去势仔猪同时免疫猪瘟、口蹄疫、蓝耳病疫苗的效果研究.docx

1、-'去势仔猪同时免疫猪瘟、口蹄疫、王丈礼，杨利，贾元超，龙杰，黄丽，何永钢（四川省梓潼县畜牧兽医局，四川梓波622150）中图分类号:S852.52文献标识码：B文章编号：1001-8964（2013）07-0027-03摘要：本试验随机选择30日龄健康仔猪30头，去势后分成3组：1组分别同时接种CSF、FMD疫苗，2组分别同时接种CSF、FMD、PRRS疫苗，对照组不免疫任何疫苗，观察免疫副反应。然后在免疫后30、60、90、120d时采血，用ELISA抗体试剂盒检测杭体动态效价。结果显示：2组和1组的免疫副反应较小可控；免疫后30120d,FMD和PRRS阳性抗体的合格率都超过70

2、%；免疫后30d,CSF阳性杭体合格率能达到70%,60d时CSF抗体合格率只有60%,90d及以后已无CSF阳枝杭体。关键词：猪瘟；猪口蹄疫；猪繁殖与呼吸综合征；抗体效价.StudytheImmuneEffectofInjectingCSF,FMDandPRRSVaccinesattheSameTimeonCastratedPigletsWANGWen-1i,YANGLi,JIAYuan-chao,etal.(AnimalHusbandryandVeterinaryBureauofZitongCounty,SichuanZitong622150,China)Abstract:Thetests

3、elected30pigletsat30-days-old,whichwererandomlydividedintothreegroupsaftercastrating.ThefirstgroupwereimmunizedCSF,FMDvaccine?thesecondgroupwereimmunizedCSF,FMD»PRRSvaccineatthesametime,andthecontrolgroupwereimmunizednothing,observingtheimmunesidereactionsofthesegroups.After30,60,90,120days,the

4、serumantibodiesdynamictiterweredetectedbyELISAantibodytestkit.Theresultsasfollowing：comparingwiththecontrolgroup,boththefirstandsecondgroup'simmunesidereactionsweresmallandcontrollable,FMDandPRRSantibodies'positiveratesweremorethan70%atthe30120d,afterimmunization30d,CSFantibodies*positiverat

5、ereached70%,theCSFantibodies'positiveratewasonly60%after60d,therewasnotpositiveCSFantibodyafter90d.Keywords：CSF:FMD；PRRS；Antibodytiter1试验用疫苗和器材收荷日期：2血3-05-】厂.作者简介：王文礼（1964-）,M,四川桦浚人.硕士研完生，主要从事动物疫痛覆防工作。1.1猪瘟活疫苗（脾淋源）云南生物制药有限公司生产，批号为20120710o猪口蹄疫0型合成肽疫苗（多肽2570+7309）上海申联生物医药有限公司生产，批号为20120604c1.2 高致

6、病性猪繁殖与呼吸踪合征活疫苗（JXA1-R株）齐鲁动物保健品有限公司生产，批号为1206010-2。1.4试验用若材免疫接种用器具,318mc型醯标仪，移液器、TL-2000MM-1微振器,TDL80-2B离心机,"93自动双重纯水蒸馅器，SKP-电热恒温培养箱。2试验用抗体检测试剂猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒ELISA抗体检测试拘盒武汉科前动物生物制品有限责任公司生产，批号为121213。2.1 猪O型口蹄疫（FMD）病毒ELISA抗体检测试剂盒武汉科前动物生物制品有限责任公司生产，批号为121208o猪痕（CSF）病毒ELISA抗体检洲试剂金武汉科前动物生物制品有限责任公司

7、生产，批号为121216o3试验仔猪分组和检测方法3.1试猪选择在四川梓潼县某养殖场随机选择已断奶的300龄未免疫过任何疫苗的DLY仔猪30头，由专人饲养和管理，饲喂相同品牌全价饲料，自由饮水。试验前对所选中的猪进行全面健康检查：体重在1012kg/头,呼吸为15-18次/min,脉搏为65-78次/min,体温在38.839.3T,食欲正常，精神状态良好；经耳静脉采血检测,CSF、FMD、PRRS病毒抗体均呈阴性。3.2试猪分姐将这30头猪随机分成3个试验组：对照组10头，在猪去势的同时在其左右侧颈部和臀部分别肌注生理盐水2mL；第1组10头，在猪去势的同时于其左右侧颈部分别肌注CSF活疫苗

8、2mL和0型FMD合成肽疫苗2mL；第2组10头，在猪去势的同时于其左右侧颈部和臀部分别肌注CSF活疫苗2mL、O型FMD合成肽疫苗2mL、PRRS活疫苗1头份。3.3方法分别在免疫后30、60、9（）、120d采集每头猪的耳静脉血5.0mL,用ELISA抗体检测试剂盒进行CSF、FMD、PRRS抗体测定，具体操作方法依照试剂盒说明书进行。4数据统计与分析使用酶标仪（630nm波长处）测定各样品反应孔中的0D旬值，观察各组免疫抗体的动态变化，所得0D印值数据用SPSS10.0软件的One-WayANVOA方法进行统计学分析。5试验结果5.1临床免疫副反应接种疫苗后4h内观察临床反应，发现第2组

9、有1头猪出现呕吐、轻微肌肉震颤、呼吸急促的现象。呕吐物约50g,把这头有轻微反应的仔猪放进保温箱中（试验当时是冻雨雪天），约1h后副反应症状消失。其他猪无可见的副反应症状。5.2 第2组和对照组血清PRRS病毒抗体的动态变化根据猪PRRS抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准，在酶标仪上读各孔OD阪值，试验成立的条件是：阳性对照孔OD«,值均应N0.7,阴性对照孔OD阪值均应0.3。计算阳性对照孔的平均值和样品KQ值，公式为KQ=100x样品OD即值/阳性对照孔OD«）平均值。若KQ值N20,判为PRRS病毒抗体阳性；若KQ20,则判为抗体阴性。本试验阳性对照孔的OD即平均值为

10、1.895,阴性对照孔的OD«）平均值为0.061,证明本次抗体检测试验成立。据此计算出本试验PRRS样品的OD即值N0.379,判为PRRS抗体阳性。详细数据见表IO«1免疫血清PRRS抗体EUSA检测OD&,均值（*）30d60d90d!20d2组对黑组1.441*0.1360.147*0.0241.347±0.2260.185*0.0431.367±0.2430.135±0.0371.317*0.2370.165*0.0251、2组和对照姐FMD抗体的动态变化根据猪0型FMD抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准，在酶标仪上读各孔OD

11、伽值，试验成立的条件是：阳性对照孔0腿值均应N0.8,阴性对照孔OD颂值均应0.3；样品OD助值N0.4时判为阳性，样品OD&P值0.4时判为阴性。本次抗体检测试验阳性对照孔的平均OD即值为1.48,阴性对照孔的平均OD旬值为0.084,因此，该抗体检测试验成立。数据见表2O表2免疫血清FMD抗体EUSA检测ODg均值任打）30d60d90d120d2组J.187±O.O36l.36O±O.(M2l.397±O.O471.4150.0351组0.888±0.041l.269±0.0391.438*0.0331.456±O.O4

12、3对照组0.294±0.0320.25610.0210.211±0.045O.157±O.O365.3 1组和2组血清猪瘟病毒抗体的动态变化根据猪CSF抗体检测试剂盒说明书提供的判定标准,在酶标仪上读各孔。6粉值，试验成立的条件是阳性对照孔0。阪值均应0.6,阴性对照孔OD«o值均应0.3；样品OD旬值NO.35时判为阳性,样品OD旬值0.35时判为阴性。本次检测阳性对照孔的平均OD旬值为1.649,阴性对照孔的平均OD阪值为0.057,所以本次抗体检测试验成立。详细数据见表3。表3免疫血清CSF抗体EUSA检测ODmo均值（公）30d60d90dI2O

13、<!2组0.403±0.051O.372±O.O42O.263±O.O280.157*0.0271蝴0.397±0.043O.369M).O34、0.258±0.0230.154±0.028O.I89±O.O230.161±0.034Q.146±0.0310.10510.0256抗体阳性率变化情况采用ELISA方法，按试剂盒说明书计算抗体阳性率。判定标准为：CSF样品0。即值N0.35,表示线瘟抗体阳性;FMD样品OD值N0.4,表示FMD抗体阳性；PRRS样品ODw值N0.38,表示PRRS抗体阳

14、性。由此得出各期各组各种抗体的阳性率：在试验进行到30d时，2组的FMD抗体阳性率为90%,1组的FMD抗体阳性率为80%,直到120d时，两组FMD抗体阳性率都达到了100%；在试验的30-120d阶段,2组和1组的PRRS抗体阳性率都是100%；在试验30d时，2组和1组的CSF抗体阳性率为70%,在60d的阳性率为60%,在90120d,两组的CSF抗体均显阴性。7分析与结论7.1从表1、表2、表3可以看出，在整个试验期间(120d),对照组(10头猪)血清中的CSF、FMD、PRRS抗体都呈阴性；1组和2组中FMD和PRRS的抗体OD均值与对照组中相应的抗体OD即均值比较，.差异显a(

15、P<0.05)；在30-60d期间,CSF抗体0D«)均值与对照组中相应的抗体ODg均值比较，差异显著(Pv0.05)o说明本次试验期间，各试验蛆猪均不存在自然感染CSF、FMD、PRRS的情况，所测得的阳性抗体均源于疫苗免疫后产生。7.2从表1还可以看出，第2组3针同时免疫后的30d内，一直都有较高滴度的PRRS阳性抗体(0D仪值038),这种高滴度抗体至少可以维持到l20d。证明同时肌注3针疫苗的免疫方法在整个育肥期间对PRRS都有较好的免疫保护作用。7.3从表2可以看出，第2组3针免疫后在第30d都有较高滴度的FMD抗体，血清样品OD«o值在0.842-1.55

16、3之间，其均值为1.187,并且还略高于同期试验组的FMD抗体0D血均值(0.888)。】、2两组的FMD抗体0D«)均值都在0.4以上，说明PRRS对FMD抗体的产生具有促进作用，这与孟丽军等的试验结果较一致。这种高滴度的抗体至少可以维持到120d,证明3针同时肌注的免疫方式在整个有肥期间对猪FMD也都有很好的免疫保护作用。第1组在免疫后30d,只有2份血清样品的FMD抗体0D位值为0.337.0.377,略低于0.4的阳性判定标准，可能是个体差异所致，其他8份血清样品的0D®值在0.639-1397之间，都在0.4以上，而该组样品。血，的平均值为0.888(>0.

17、4)；直到60、90、120d,该组10份样品的0D硕值都大于0.4,说明同时接种CSF、FMD两种疫苗的免疫方法对FMD还是有较好的免疫保护作用。在试验30d时，第2组的FMD阳性抗体OD«o均值为1.187,略高于第1组的FMD抗体0D位均值(0.888)(PvO.05),差异显著；到试验60d及以后，1、2组中的FMD阳性抗体滴度基本持平(P>0.05),差异不显著。说明猪PRRS活疫苗在免疫初期对猪FMD抗体的产生有促进作用。7.4从表3可以看出，1、2组猪在免疫30-60d后,CSF抗体检测呈阳性(0D曲值都>0.35),但抗体滴度都不太。)名猝著缶2OI3-O

18、7期.怠第274期高，血清样品0D位值在0.35-0.44之间，只略高于阳性抗体判定标准(0.35),与试剂签提供的阳性抗体0D阪均值1.28比较,差异极大(P<0.05)。2组和1组的CSF抗体ODm均值差异不显著(P>0.05)；与对照蛆比较，在试验进行到90d时，两免疫蛆血清中的CSF抗体均呈阴性，差异也不显著(P>0.05)o证明在仔猪去势时无论是用CSF活疫苗、FMD合成肽疫苗、PRRS活疫苗三种疫苗同时免疫的方法，还是按一贯采用的CSF活疫苗、FMD合成肽苗两种疫苗同时免疫的方法,都必须在初次免疫猪CSF疫苗60d后，再次加强免疫CSF活疫苗，这样才能确保育肥后期对CSF的免疫保护作用。7.5从各组各抗体阳性合格率可以看出，试验2组和1组在免疫后30-120d期间，FMD和PRRS抗体合格率都超过了国家规定的70%标准，但是CSF抗体合格率只在免疫后30d才达到国家规定的70%标准，到60d,CSF抗体合格率只有60%,到90120d时,CSF抗体合格率就已为0了。参考文献：1张长龙，严宝英,贾文孝，等.猪瘟、猪D蹄疫