幽门螺杆菌疫苗相关研究进展.docx

1、doi：10.3969/j.issn.100()-484X.2012.05.024幽门螺杆菌疫苗相关研究进展杨钮欣李丹丹综述江吉富审校(遵义医学院微生物学教研室，遵义563003)中国图书分类号R392.9文献标识码A文章编号1000484X(2012)054)4784)3幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)是定梢于人胃内的革兰氏阴性螺形杆菌，为微需氧菌，营养要求较高。幽门螺杆菌感染是人类最常见的传染病之一。在发展中国家，近80%未满10岁的儿童和超过90%的成年人被感染孔"。它能导致慢性胃炎，十二指肠和胃溃疡，并且是导致胃癌的一个重要因子。除此之外,

2、H.pylori还是胃粘膜相关淋巴组织淋巴痛发展的-个重要因素。目前临床治疗尚以三联疗法为主。但药物存在副作用，且根除率在逐年下降,无法达到群体防治的效果。所以，研制H.pylori疫苗在预防和控制感染方面显得尤为重要。据文献报道，国内外有关H.pylori疫苗的研究主要包括:H.pylori疫苗的构建、免疫途径、免疫佐剂、递送系统、Hp疫苗的免疫机制等。本文在研究人员对幽门螺杆菌疫苗及相关问题研究的基础上，作一综述。1疫苗接种途径疫苗接种途径有U服免疫、卵腔粘膜免疫、注射免疫等。由于H.pylori具有严格的嗜组织性，能够特异地定居于胃粘膜上皮细胞表面，因此经典的免疫途径是口服免疫即口-胃途

3、径，符合H.pylori经口传染并定殖于胃粘膜的生活特点，研究证实口服免疫能刺激良好的粘膜及系统免疫反应，但必须与一种佐剂同时使用才能发挥免疫保护的效果。国内外研究都主要以口服免疫为主，因为在给予全身免疫时，粘膜组织很少能得到保护,但它可以通过局部免疫而获得保护，这是粘膜免疫中的一条公认的准则。2接种对象在现阶段的研究中，多数临床研究以未感染幽门螺杆菌的健康成人为主，在儿童体内的研究未见报道。由于大多数H.pylori感染发生于儿童期，所以最佳的接种时期应考虑为学龄前。对尚未感染的作者简介：杨饪欣(1983年-),女，在读硕士，主要从事感染与免疫研究，E-niail：yangxx_123；通讯

4、作者及指导教师:江吉富(】956年-男，副教授,硕上生导师.主要从事感染与免疫研究.E-mail：jifujiang©。人群,疫苗能保护其以后不被感染，而对已感染者，接种疫苗的作用表现在能在出现症状前控制感染。3幽门螺杆菌疫苗的免疫机制H.pylori可刺激先天性和获得性的免疫应答。由于细菌在胃粘膜的定植触发先夭宿主免疫防御机制,Toll样受体识别病原相关分子模式，刺激骨上皮细胞炎症因子与抗萌因子的表达虽然免疫系统被活化，但H.pylori仍然能够继续生存，因为它通过点突变和重组产生多样性，降低r免疫传感器的识别能力。它也可以通过隐藏自身来逃避和操纵免疫系统，跨过免疫系统到达肠腔，模

5、仿机体抗原并降低免疫细胞活性。Czinn等以灭活的幽门螺杆菌口服免疫小鼠或雪貂，结果证实能产生抗H.pylori的IgA和IgG抗体。如果辅以粘膜佐剂，抗体数散将增加，由此提出了H.pylori疫苗的可行性设想。这一设想后来通过感染H.felis的小鼠模型得到证实。以H.pylori超声粉碎物加霍乱毒素(CT)免疫小鼠可抵抗活H-felis的攻击，说明保护作用与抗体水平相关。以抗H.pylori的IgA单克隆抗体对小鼠进行被动口服免疫，同时以H.felis攻击，小鼠可抵抗细菌感染，说明IgA抗体有免疫保护作用。另有研究证明，Thl型反应和Th2型反应在预防H.pylori感染中发挥更加重要的作

6、用。对小鼠应用可增强Thl和Th2型反应的佐剂，可减少细菌攻击后的定植数最。4幽门螺杆菌疫苗的种类4.1全菌疫苗主要用II.pylori全菌粗制抗原免疫小鼠,Czinn'73首先将H.pylori活菌在4Y低温超声破碎后,将所得全菌超声提取物即用于免疫动物,证实H.pylori全菌抗原能有效刺激动物抗体效价升高，但缺乏保护作用。此后由Summerton等“在已有研究的基础上用福尔马林灭活的H.pylori全菌体(HWC)与-种大肠杆菌不耐热肠毒素突变体一并给予口服免疫小鼠，结果显示具有良好的保护性免疫反应。虽然全菌疫苗的免疫原性高，但含有多种蛋白及其他未知成分，特别是部分蛋白与人体具有

7、免疫交又反应，可引起严重:的免疫后反应;而它的优势就是弥补了个别抗原没有的缺陷。目前对于全菌疫苗的研制仍存在着争议。4.2幽门螺杆菌亚单位疫苗亚单位疫苗由于其结构简单、成分清楚、安全性好和便于T业化大量生产而成为各种疫苗的研究重点，目前的关键是寻找有效的抗原及抗原组合。邹全明等”研制的口服重组H.pylori分子内佐剂亚单位疫苗于2006年9月完成了1H期临床试验，对5000余名志愿者进行了预防感染效果的系列定期观察和检测。结果显示疫苗安全性良好，预防H.pylori感染的保护率为72%,特异性抗体阳性率为85%。目前相关文献研究热点主要集中在以下抗原:尿素酶(Urease)、粘附素(HpaA

8、)、中性粒细胞激活蛋白(HpNAP)、空泡毒素(VacA)、细胞毒素相关蛋A(CagA)、过氧化翅酶(KatA)、外膜蛋白(Omp)、脂多糖(LPS)、热休克蛋白(Hsp)、血型抗原结合蛋白(BabA)等。43表位疫苗抗体分子在抗原上的结合位点称为抗原决定簇，又称抗原表位，是抗原性质、数目及空间的构型，决定抗原特性。抗原表位是免疫细胞识别的基本结构和功能单位。抗原分子的众多表位产生的效应各不相同，有保护性表位、抑制性表位及致病性表位之分。以保护性抗原上的特异性表位为基础进行疫苗分子设计，并以抗原表位为靶抗原，既能诱生特异性免疫应答，又避免了天然蛋白中抑制性抗原表位引起的免疫抑制，使免疫应答具有

9、更强的特异性和更好的免疫效果，且不存在生物危害性和遗传变异致疫苗效力丧失等问题'2燃。4.4核酸疫苗核酸疫苗(Nucleicacidvaccine),又称DNA疫苗(DNAvaccine)、基因疫苗(Geneticvaccine),是指应用基因工程技术将编码某种抗原蛋白质的外源基因与真核表达载体重组后直接导入机体内，利用免疫原基因在宿主体内表达出的抗原蛋白而引起机体的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。此类疫苗安全有效，使用简便，可长期在宿主细胞内表达而使机体获得持续性的免疫力等优点,因而越来越受到人们的重视，被看作是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第3代疫苗4.5载体疫苗与递送

10、系统疫苗需要合适的递送系统才能发挥出最佳的免疫效果。H.pylo/i载体疫苗由于具有许多优点而越来越受到人们的重视，它省去了纯化蛋白抗原所消耗的时间、资金和精力;不需要抗原佐剂的辅助免疫，从而不再需要对抗原进行繁琐的乳化处理，减少了疫苗有效成分的损失;应用载体转运疫苗,可以有效减少疫苗在胃内强酸环境下的损失等等。目前研究较多的有活载体，聚乙醇酸共聚物微球(PLG),聚乳酸聚乙醇酸共聚物微粒，壳聚糖，脂质体和病毒等。活载体疫苗是指采用携带有目标基因的活载体细菌或病毒表达目标抗原，从而达到免疫的目的。微粒指药物溶解或分散在高分子材料基质中形成的粒径为1-4()呻的微球或微囊侦。另外，研究表明，适当

11、比例脂质体与抗原形成的复合物能与机体细胞表膜和细胞内膜直接融合或通过内吞作用进入细胞。不仅能提高特异抗体的滴度、提前特异抗体出现的时间，还能大大降低知4原的使用量*刃。5佐剂粘膜免疫可以诱导局部粘膜产生分泌性IgA(slgA)JgM和IgG等保护性抗体，并可诱导其它部位的粘膜也产生slgA,这是粘膜免疫保护作用的主要机制。由于粘膜免疫系统特殊性,单纯可溶性抗原经粘膜途径免疫很难激发粘膜和系统免疫应答，必须辅以合适的粘膜佐剂才能激发免疫应答。幽门螺杆菌粘膜免疫佐剂最常使用的是大肠杆菌不耐热肠毒索(Heat-labileenterotoxin,LT)和霍乱毒素(Choleraloxin,CT)o小

12、鼠粘膜免疫实验表明,CT主要诱导抗原特异的CD4'Th2型细胞生成，而LT则能诱导混合的CD4*Th1和Th2型细胞生成质。目前认为，它们通过以下方式诱导粘膜免疫反应:增加上皮细胞的渗透性，增强抗原吸收;增强不同抗原提呈细胞的抗原提呈作用；调节B细胞的分化，增加IgA的形成;调节T细胞的增殖和细胞因子的产生但由于其毒性作用，研究者们构建了很多突变体以去除或降低毒性，如LT的亚单位及突变体：LTB、LTR7K、Ll&lF、LTA69G、LTE112K、LT(S63K/A72R)、LTR192G,CT亚单位及突变体：CTB、CTS63K、CTS61F、CTE112K等新。6实验动物

13、模型对于幽门螺杆菌疫苗的研究，动物模型是必不可少的。用于研究的模型有捞猴、猫、雪貂以及啮齿类动物等。Dubois等S对与人类H.pylori相似的猫猴模型研究发现，该物种群居时可自然感染H.pylori,口服重组尿酶与大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)能抵御H.pylori感染而不会造成不良影响。啮齿类的动物是被最先使用的，其中使用较多的是小鼠模型，但小鼠并不是H.filis和H.pylori的自然宿主3。1997年Lee等"6J筛选出的幽门螺杆菌悉尼菌株(H.pyloriSydneystrain,H.pyloriSSI)被认为是小鼠感染的首选菌株，其能够K期定植于小鼠并缓慢发生慢性活动性

14、胃炎、严重胃粘膜萎缩、胃癌等病理变化。由于小鼠模型的简单和实用，使它广泛应用并成为H.pylori疫苗发展的基础。7讨论幽门螺杆菌疫苗在预防和控制感染中起着非常重要的作用，但我们如何才能研究出一种理想的疫苗，它不仅要有良好的安全性、有效性、而且要易于大批量生产、不需要特殊的贮存及运输，并适合于发展中国家使用。这就要求在抗原、佐剂和递送系统等方面进行严格并深入的研究。目前已有疫苗进入或完成了临床试验阶段,但它的稳定性、安全性与有效性仍然面临着很大的考验;虽取得了一些成果，但还是有许多问题尚待解决。例如：如何避免免疫后胃损伤来诱导高保护性免疫反应;能否在新生儿期就实施免疫计划等等。8参考文献Das

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