溶液配制方法p

1、实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0) 组份浓度：1 M Tris-HCl，配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N）浓盐酸的体积（ml）pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2 4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注

2、意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。TrisHCl冲液（0.05M，25）50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。pHX(毫升)pHX(毫升)7.107.207.307.407.507.607.707.807.908.0045.744.743.442.040.338.536.634.532.029.28.108.208.308.408.508.608.708.808.9026.222.919.917.214.712.410.38.57.0三

3、羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2-CH2OH-CHOCH2-NH2分子量=121.14;0.1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度：0.5 M EDTA，配制量：1 L，配制方法：1. 称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。2. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。3. 加去离子水将溶液定容至1 L，适量分成小份后，高温高压灭菌，室温保存。10×TE B

4、uffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA，配制量：1 L3 M 醋酸钠(pH5.2) 组份浓度：3M 醋酸钠，配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。PBS Buffer (1×)组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 2mM KH2PO4，配制：1 L配制方法：称量试剂:8g

5、 NaCl, 0.2g KCl, 1.44g Na2HPO4, 0.24g KH2PO4，置于1 L烧杯中。加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。高温高压灭菌后，室温保存。PB缓冲液(pH8.0)：1L NaH2PO4 0.16537g, Na2HPO4 6.7817g.注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵，配制量：100 ml配制方法：  1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml

6、烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。常用缓冲液的配制方法1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05M）X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M盐酸 再加水稀释至200ml.pH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml2.2 50 44.0 3.0 50 11.42.4 50 32.4 3.2 50 8.22.6 50 24.2 3.4 50 6.42.8 50 16.8 3.6 50 5

7、.0甘氨酸分子量75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L.2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05M）X ml 0.2M邻苯二甲酸氢钾 +Y ml 0.2M盐酸 再加水稀释至200ml.pH X Y pH X Y2.2 5 4.670 3.2 5 1.4702.4 5 3.960 3.4 5 0.9902.6 5 3.295 3.6 5 0.5972.8 5 2.642 3.8 5 0.2633.0 5 2.032 邻苯二甲酸氢钾分子量2.4.23 0.2M邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85g/L.3.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH 0.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml pH 0

8、.2M Na2HPO4/ml 0.1M柠檬酸/ml2.2 0.40 19.6 5.2 10.72 9.282.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.852.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.402.8 3.17 16.83 5.8 12.09 7.913.0 4.11 15.89 6.0 12.63 7.373.2 4.94 15.06 6.2 13.22 6.783.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.153.6 6.44 13.56 6.6 14.55 5.453.8 7.10 12.90 6.8 15.45 4.554.0 7.71 12.29

9、7.0 16.47 3.534.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.614.4 8.82 11.18 7.4 18.17 1.834.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.274.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.855.0 10.30 9.70 8.0 19.45 0.55Na2HPO4分子量141.98 0.2M溶液含28.40g/LNa2HPO4·2H2O分子量178.05 0.2M溶液含35.61g/LC6H8O7·H2O分子量210.14 0.1M溶液含21.01g/L4.柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液pH 钠离子浓度/M

10、柠檬酸C6H8O7·H2O/g 氢氧化钠NaOH/g 浓盐酸HCl/ml 终体积/L2.2 0.20 210 84 160 103.1 0.20 210 83 116 103.3 0.20 210 83 106 104.3 0.20 210 83 45 105.3 0.35 245 144 68 105.8 0.45 285 186 105 106.5 0.38 266 156 126 10使用时可以每升中加入1g酚，若最后pH有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。5.柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1M）pH0.1M柠檬酸/ml0.1M柠檬酸钠/mlpH0.1M柠檬

11、酸/ml0.1M柠檬酸钠/ml3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.610418.64.89.210.8C6H8O7·H2O分子量210.14 0.1M溶液含21.01g/LNa3C6H5O7·2H2O分子量294.12 0.1M溶液含29.41g/L6.乙酸-乙酸钠缓冲液

12、（0.2M）pH 0.2M NaAc/ml 0.2M HAC/ml pH 0.2M NaAc/ml 0.2M HAC/ml3.6 0.75 9.25 4.8 5.90 4.103.8 1.20 8.80 5.0 7.00 3.004.0 1.80 8.20 5.2 7.90 2.104.2 2.65 7.35 5.4 8.60 1.404.4 3.70 6.30 5.6 9.10 0.904.6 4.90 5.10 5.8 9.40 0.60NaAc分子量136.09 0.2M溶液为27.22g/L7.磷酸盐缓冲液(PB)磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2M）pH0.2M Na2HPO4/m

13、l0.2M NaH2PO4/mlpH0.2M Na2HPO4/ml0.2M NaH2PO4/ml5.88.092.07.061.039.05.910.090.07.167.033.06.012.387.77.272.028.06.115.085.07.377.023.06.218.581.57.481.019.06.322.577.57.584.016.06.426.573.57.687.013.06.531.568.57.789.510.56.637.562.57.891.58.56.743.556.57.993.07.06.849.551.08.094.75.36.955.045.0Na2

14、HPO4·2H2O分子量178.05 0.2M溶液含35.61g/LNa2HPO4·12H2O分子量358.22 0.2M溶液含71.64g/LNaH2PO4·H2O分子量138.01 0.2M溶液含27.6g/LNaH2PO4·2H2O分子量156.03 0.2M溶液含31.21g/L(2) 磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15M）pH1/15M Na2HPO4/ml1/15M KH2PO4/mlpH1/15M Na2HPO4/ml1/15M KH2PO4/ml4.920.109.907.177.003.005.290.509.507.388.002

15、.005.911.009.007.739.001.006.242.008.008.049.500.506.473.007.008.349.750.256.644.006.008.679.900.106.815.005.009.1810.0006.986.004.00Na2HPO4·2H2O分子量178.05 1/15M溶液含35.61g/LKH2PO4分子量136.09 1/15M溶液含9.078g/L8.磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05M）X ml 0.2M KH2PO4 +Y ml 0.2M NaOH 再加水稀释至20mlpH(20) X/ml Y/ml pH(20) X/m

16、l Y/ml5.8 5 0.372 7.0 5 2.9636.0 5 0.570 7.2 5 3.5006.2 5 0.860 7.4 5 3.9506.4 5 1.260 7.6 5 4.2806.6 5 1.780 7.8 5 4.5206.8 5 2.365 8.0 5 4.6809.巴比妥钠-盐酸缓冲液（18）pH 0.04M巴比妥钠/ml 0.2M盐酸/ml pH 0.04M巴比妥钠/ml 0.2M盐酸/ml6.8 100 18.4 8.4 100 5.217.0 100 17.8 8.6 100 3.827.2 100 16.7 8.8 100 2.527.4 100 15.3 9

17、.0 100 1.657.6 100 13.4 9.2 100 1.137.8 100 11.47 9.4 100 0.708.0 100 9.39 9.6 100 0.358.2 100 7.21 100 巴比妥钠分子量206.18 0.04M溶液为8.25g/L11.硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）pH 0.05M硼砂/ml 0.2M硼酸/ml pH 0.05M硼砂/ml 0.2M硼酸/ml7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0硼砂Na2B4O

18、7·10H2O分子量381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液为19.07g/L硼酸H3BO3分子量61.84 0.2M溶液为12.37g/L硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存12.甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（0.05M）X ml 0.2M甘氨酸 +Y ml 0.2M氢氧化钠 再加水稀释至200mlpH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml8.6 50 4.0 9.6 50 22.48.8 50 6.0 9.8 50 27.29.0 50 8.8 10.0 50 32.09.2 50 12.0 10.4 50 38.69.4 50 16.8 10.6 50 45.5甘氨

19、酸分子量75.07 0.2M甘氨酸溶液含15.01g/L13.硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）X ml 0.05M硼砂 +Y ml 0.2M氢氧化钠 再加水稀释至200mlpH X/ml Y/ml pH X/ml Y/ml9.3 50 6.0 9.8 50 34.09.4 50 11.0 10.0 50 43.09.6 50 23.0 10.1 50 46.0硼砂Na2B4O7·10H2O分子量381.43 0.05M(=0.2M硼酸根)溶液为19.07g/L14.碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+，Mg2+存在时不得使用pH 20 9.16 9.40 9.51 9.

20、78 9.90 10.14 10.28 10.53 10.8337 8.77 9.12 9.40 9.50 9.72 9.90 10.08 1028 10.570.1M碳酸钠/ml 1 2 3 4 5 6 7 8 90.1M碳酸氢钠/ml 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Na2CO3·10H2O分子量286.2 0.1M溶液28.62g/L，NaHCO3分子量84.0 0.1M溶液8.40g/L 3M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠，配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌

21、溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。10 M 醋酸铵，配制量：100 ml，配制方法： 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。 3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色

22、，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：  液化苯酚应贮存于-20，此时

23、的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。  加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。  加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。  重复操作步骤。  加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。  重复操作步骤，稍微残留部

24、分上层水相。  使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。  将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。10% (W/V) SDS 组份浓度：10% (W/V)SDS，配制量：100ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-2

25、00ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解; 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2; 3.将溶液定容至100ml后，室温保存。2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH，配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。Solution I(质粒提取用试剂)组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM

26、EDTA, 50 mM Glucose，配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。2. 高温高压灭菌后，4保存。3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。Solution II(质粒提取用)组份浓度：200mM NaOH，1%(W/V)SDS，配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中10% SDS 50ml, 2N NaOH 50ml;2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀，3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月，注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌Solution III(

27、质粒提取用)组份浓度：3 M KOAc, 5 M 乙酸，配制量：500 ml配制方法：1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。4. 高温高压灭菌后，4保存。1 M DTT 组份浓度：1 M DTT，配制量：20 ml，配制方法：1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。3. 适量分成小份后，-20保存。IPTG (Isopropyl -D-1-Thiogalactopyranoside) 异

28、丙基-D-硫代半乳糖苷，别名Isopropyl -D-Thiogalactoside白色或白色粉末,溶于水后呈清亮无色液体 分子式：C9H18O5S 分 子 量: 238.30，2-8°C冷藏保存。10 mM ATP 组份浓度：10 mM ATP，配制量：20 ml配制方法：1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。3. 适量分成小份后，-20保存。饱和硫酸铵1.不同温度下饱和硫酸铵溶液的数据温 度（）010202530重量百分数41.4242.2243.0943.

29、4743.85摩尔浓度3.93.974.064.104.13每1000g水中含硫酸铵摩尔数5.355.535.735.825.911000ml水中用硫酸铵克数706.8730.5755.8766.8777.5每1000ml溶液中含硫酸铵克数514.8525.2536.5541.2545.92. 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25）在 25 硫 酸 铵 终 浓 度 ，% 饱 和 度硫 酸 铵 初 浓 度 ， 饱 和 度10202530333540455055606570758090100每 1000ml 溶 液 加 固 体 硫 酸 铵 的 克 数05611414417619620924327731

30、335139043047251656166276710578611813715018321625128832636540644949459269420295978911231551892252623003403824245206192530496193125158193230267307348390485583301930629412716219823527331435644954633124374107142177214252292333426522353163941291642002382783194115064031639713216820524528537546945326599134

31、1712102503394315033661011371762143023925533671031411792643536034691051432273146534701071902757035721532377536115198807715790793. 调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0）在 0 硫 酸 铵 终 浓 度，% 饱 和 度硫 酸 铵 初 浓 度 ， 饱 和 度20253035404550556065707580859095100每 100ml 溶 液 加 固 体 硫 酸 铵 的 克 数010.613.416.419.422.625.829.132.636.139.843.647.6

32、51.655.960.365.069.757.910.813.716.619.722.926.229.633.136.840.544.448.452.657.061.566.2105.38.110.913.916.920.023.326.630.133.737.441.245.249.353.658.162.7152.65.48.211.114.117.220.423.727.130.634.338.142.046.050.354.759.22002.75.58.311.314.317.520.724.127.631.234.938.742.746.951.255.7250 2.75.68.4

33、11.514.617.921.124.528.031.735.539.543.647.852.23002.85.68.611.714.818.121.424.928.532.336.240.244.548.83502.85.78.711.815.118.421.825.429.132.936.941.045.34002.95.88.912.015.318.722.225.829.633.537.641.84502.95.99.012.315.619.022.626.330.234.238.35003.06.09.212.515.919.423.026.830.834.85503.06.19.3

34、12.716.119.723.527.331.36003.16.29.512.916.420.123.127.96503.16.39.713.216.820.524.47003.26.59.913.417.120.97503/26.610.113.717.48003.36.710.313.98503.46.810.59003.47.09503.51000注：当量浓度(N)：溶液的浓度用1升溶液中所含溶质的克当量数来表示的叫当量浓度，用符号N表示。例如，1升浓盐酸中含12.0克当量的盐酸(HCl)，则浓度为12.0N。 当量浓度=溶质的克当量数/溶液体积（升）摩尔浓度(mol/L),即溶液的浓度

35、用1升溶液中所含溶质的摩尔数来表示. 例如1升浓硫酸中含18.4摩尔的硫酸，则浓度为18.4mol/L。 摩尔浓度（M）=溶质摩尔数/溶液体积（升）浓度单位的换算公式：1）当量浓度=1000.d.质量百分浓度/E 2）质量百分浓度=当量浓度E/1000.d 3）摩尔浓度=1000.d质量百分浓度/M 4）质量百分浓度=质量-体积浓度（毫克/升）/104.d 5）质量-体积浓度（mg/L）=104质量百分浓度 5、ppm是重量的百分率，ppm=mg/kg=mg/L 即:1ppm=1ppm=1000ug/L ,1ppb=1ug/L=0.001mg 式中：E溶质的克当量；d溶液的比重； M溶质的摩尔

36、质量；“PS”缓冲液PH7.67.47.27.0H2ONaClNa2HPO4NaH2PO410008.52.20.110008.52.20.210008.52.20.3100ml8.5g2.2g0.4ga.Hanks'平衡盐成分（g/L）BS004BS006BS008BS010无水氯化钙0.140.14无水硫酸镁0.097670.09767氯化钾0.400.400.400.40氯化钠8.008.008.008.00无水磷酸二氢钾0.060.060.060.06碳酸氢钠无水磷酸氢二钠0.0480.0480.0480.048D葡萄糖1.001.001.001.00酚红0.010.01pH（

37、无碳酸氢钠）6.6±0.36.6±0.36.7±0.36.6±0.3pH（加碳酸氢钠）7.4±0.37.4±0.37.4±0.37.3±0.3渗透压（无碳酸氢钠）276±5%276±5%270±5%270±5%渗透压（加碳酸氢钠）284±5%286±5%280±5%280±5%b. Earle's平衡盐成分（g/L）BS000BS001无水氯化钙0.20.2无水硫酸镁0.097670.09767氯化钾0.40.4碳酸氢钠氯化钠6

38、.86.8无水磷酸二氢钠0.1220.122D葡萄糖11酚红0.01pH（无碳酸氢钠）4.6±0.34.6±0.3pH（加碳酸氢钠）7.6±0.37.6±0.3渗透压（无碳酸氢钠）240±5%240±5%渗透压（加碳酸氢钠）288±5%288±5%c.Dulbecco's磷酸盐缓冲盐成分（g/L）BS901BS902无水氯化钙氯化钾0.20.2磷酸二氢钾0.20.2氯化钠88无水氯化镁0.047无水磷酸氢二钠1.151.15pH7.5±0.37.5±0.3渗透压280±5%28

39、5±5%SDS-PAGE蛋白电泳SDS-PAGE上样缓冲液：5ml 1mol/l的Tris-HCl（pH6.7），2.5gSDS, 1ml巯基乙醇，0.05g溴酚兰，10g蔗糖，加水定容至100ml。考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。脱色液：90ml甲醇:水(1:1)和10ml冰醋酸配成100ml脱色液Tris-甘氨酸电泳缓冲液（pH8.3）：在900ml去离子水中溶解15.1gTris碱，94g甘氨酸，加入50ml10（W/V）的电泳级SDS贮液，用去离子水补至1000ml量则成5×

40、;贮液。10% (W/V) SDS：组份浓度：10% (W/V)SDS，配制量：100ml，配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 组份浓度：1.5 M Tris-HCl，配制量：1 L配制方法： 1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中， 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。用浓盐酸调节pH值至8.8， 将溶液定容至1 L，高温高压灭菌后，室温保存。 注

41、意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。SDS-PAGE分离胶配方表SDS-PAGE浓缩胶（5% Acrylamide）配方表抗生素的贮存溶液及其工作浓度*1 以水为溶剂的抗生素贮存液应通过0.22 mm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。*2 镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基)。常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨10g；酵母提取物5g；氯化钠10g。如果需要用5mol/L Na

42、OH（1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。2×YT培养基配制每升培养基，在900ml去离子水中加入：胰化蛋白胨    16g，酵母提取物    10g，NaCl 5g.摇动容器直至溶质溶解，用5N NaOH调pH值至7.0，用去离子水定容至1L。在15psi(1.05kgcm2)高压下蒸汽灭菌20min。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g，酵母提取物10g，葡萄糖20g。用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营

43、养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。SOB培养基配制每升培养基，在950ml去离子水中加入：胰化蛋白胨    20g，酵母提取物5g，NaCl 0.5 g.摇动容器使溶质完全溶解。加10ml 250mmolL KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH<!>调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15 psi(1.05kgcm2)高压下蒸汽灭菌20min。该溶液在使用前，加入5ml灭菌的

44、2 mol/l MgCl22molL MgCl2溶液的配制方法如下：用90ml去离子水溶解19g MgCl2，用去离子水调整体积为100ml，在15psi(1.05kgcm2)高压下蒸汽灭菌20min。SOC培养基SOC培养基除含有20mmol/L葡萄糖外，其他成分与SOB培养基相同。SOB培养基经高压灭菌后冷至60或60以下，加20ml除菌的1mol/L葡萄糖溶液(1mol/l葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解18g葡萄糖，完全溶解后，用去离子水定容至100ml，用0.22um滤器过滤除菌)。Terrific肉汤(又称TB培养基，Tartof and Hobbs 1987)配制每

45、升培养基，在900ml去离子水中加入：胰化蛋白胨    12g，酵母提取物24g，甘油 4ml.摇动容器使溶质完全溶解。然后在15psi(1.05 kgcm2)高压下蒸汽灭菌20min。当溶液冷至60或60以下时加入100ml无菌的0.17mol/L KH2PO4，0.72mol/L K2HPO4溶液该溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100ml并在15psi(1.05kgcm2)高压下蒸汽灭菌20min。GYT培养基（Tung and Chow 1995）10%(v

46、/v)甘油，  0.125%(m/v)酵母提取物，  0.25%(m/v) 胰蛋白胨.使用0.22um滤器过滤除菌，分装成2.5ml一份，保存于4。M9培养基Na2HPO4 12.8g KH2PO4 3.0g NaCl 0.5g NH4Cl 0.5g 葡萄糖(单独灭菌) 10.0g 维生素B1(单独灭菌) 1g/ml pH 自然配制1L培养基，应在750m1无菌去离子水(冷至50或50以下)中加入：5×M9盐溶液 200ml，1 mol/LMgSO4 2 ml，适当碳源的20%溶液(如20%葡萄糖) 20ml，1 mol/LCaCl2 

47、; 0.1 ml，灭菌的去离子水至980ml。如果需要，可在M9培养基中补加适当氨基酸和维生素的贮存液。5×M9盐溶液配制：用无离子水溶解下列盐类，终体积为1L：Na2HPO4·7H2O  64g， KH2PO4 15g，NaCl 2.5g，NH4Cl  2.5g。分装成200ml一份，调pH=7.4，在15psi(1.05kg/cm2)高压下蒸汽灭菌15min。分别配制MgSO4溶液和CaCl2溶液，高压灭菌。用无菌水将5×M9盐溶液稀释至980ml后，加入MgSO4和CaCl2溶液。葡萄糖溶液在加到稀释的M9盐溶液之前，用0.22um滤器过滤除菌。当使用含有染色体上脯氨酸生物合成操纵子缺陷(lac-proAB)的大肠杆菌以及互补的proAB基因在F'质粒上时，在M9基本培养基中补加下列成分：0.4%(m/v)葡萄糖(右旋糖)5mM MgSO4·7H2O0.01%硫胺NZCYM培养基配制每升培养基，在950ml去离子水中加入：NZ胺    10g，NaCl 5g，酵母提取物5g，酪蛋白水解物1