禽白血病病毒感染对新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影响.docx

1、动物医学进展,2017,38(12):119-122ProgressinVeterinaryMedicine禽白血病病毒感染对新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影响张桂枝。靳双星】"，黄炎坤】，陈文萍2(1.河南牧业经济学院动物科技学院，河南郑州450046,2.舞阳县动物疫病预防控制中心，河南深河462400)摘要：为研究禽白血病病毒(ALV)感染对新城疫(ND)和禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响，采用ELISA方法对河南省某地方品种鸡场进行ALV-p27抗原检测，同时采集试验鸡的血清样品，检测ND、AI(H9)和AKHs)亚型的免疫抗体水平，并比较了ALV经种蛋垂直传播感染1日龄罪鸡和

2、后期感染对ND、AI疫苗免疫效果影响的差异。结果表明，ALV经种蛋垂直传播感染1日龄雏鸡，能显著降低ND、AI(H9)和AI(H5)疫苗免疫的抗体水平，阳性试验组与阴性组相比血清中ND.H9.H5(Re-6),H5(Re-7)和Hs(Re-8)抗体效价分别降低1.71log2、2.37log2J.59log2、1.00log2和1.79log2；鸡群后期感染ALV,对ND和AI疫苗的免疫没有明显的抑制作用，阳性试验组与阴性组相比无显著差异。关键词：禽白血病病毒：新城疫疫苗3禽流感疫苗；免疫效果中图分类号：S813.7文献标识码：B文章编号.1007-5038(2017)12-0119-04禽白

3、血病病毒(Avianleukemiavirus,ALV)属反转录病毒，是在鸡群中普遍存在并常诱发肿瘤的三大类病毒之一，几乎波及所有的商品鸡群有关研究表明，鸡群感染ALV除引起肿瘤导致直接发病死亡外；还严重影响鸡的生产性能，推迟性成熟、产蛋高峰维持时间缩短、产蛋率降低、受精率降低，尤其是祖代和父母代鸡群暴发禽白血病后，ALV经过垂直感染可严重影响种蛋孵化率和雏鸡的质量；另外，ALV还可导致B淋巴细胞成熟受抑制，阻断T淋巴细胞的发育，导致胸腺和法氏囊不同程度的萎缩，使感染鸡产生免疫抑制，造成机体抵抗力明显下降，增加其他疾病继发感染的几率。迄今为止，有关ALV感染对疫苗免疫效果的影响报道较少，尤其是

4、ALV通过种蛋垂直传播感染和后期水平传播感染对疫苗免疫效果影响的差异未见报道。本课题组根据对河南省地方品种鸡ALV感染情况调查结果，选择某鸡场开展了禽白血病的净化工作，在净化试验中重点考察了ALV感染对新城疫和禽流感两大重要疫病疫苗免疫效果的影响，并比较了ALV垂直传播感染1日龄雏鸡和后期水平传播感染对疫苗免疫效果影响的差异，为禽白血病的净化及新城疫和禽流感的有效防控提供理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1 主要仪器和试剂酶标仪为Therm0公司产品；微量加样器、96孔微量反应板、离心机、微量振荡器、ALV-p27抗原检测试剂盒均为BioChek公司产品；鸡新城疫、禽流感Hs和血凝抑制试

5、验检测抗原和阳性血清为中国兽医药品监察所产品。1.1.2试验鸡及免疫状况试验鸡来源于河南省某地方品种鸡场，按照本场免疫程序分别进行了鸡马立克病疫苗、新支Hm二联冻干苗、法氏囊冻干苗、新支流三联油苗、禽流感H5N】(Rb6+Re-7+Re8)油苗、新支H52二联冻干苗和新支流减四联油苗等的免疫接种。1.2方法检删方法1.2.1.1泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测采样前在样品管中加入1mL样品稀释液，用无菌棉签采集试验鸡泄殖腔棉拭子，与稀释液混匀后冷冻。反复冻融2次，检测前将样品恢复至25C,按照Bio-Chek公司ELISA试剂盒的操作说明进行检测。收稿日期：2017-04-08基金项目：河南

6、省重大科技专项计州项目(161100510200)；校科技创新团队项目(HUAHE2015003)作者简介：张桂枝(1970)，女，河南原阳人，副教授.硕士，主委从事畜禽疫病防治的教学与科研工作。*通讯作者1.2.1.2新城疫和禽流感抗体水平测定采用微量血凝（HA）试验，在96孔微量凝集反应板中，测定抗原的凝集滴度，然后配制4单位抗原；采用微量血凝抑制（HI）试验，测定血清样品中新城疫、禽流感乩、禽流感H5抗体效价，用nlog2来表示。1.2.1.3经种蛋垂直传播1日龄雏鸡感染ALV对疫苗免疫效果的检测出雏当天收集1日龄雏鸡胎粪进行ALV-p27抗原检测。选取抗原阳性鸡50只，单独隔离饲养作为

7、试验组；选取抗原阴性鸡50只作为阴性组。2组鸡的饲养管理和免疫程序完全一致,分别在45日龄和65日龄2个时间点，每组各随机采集24只鸡的血清，检测新城疫（45日龄）、禽流感H9抗体效价（45日龄）和禽流感H5抗体效价（65日龄），并进行统计分析比较其差异。1.2.1.4后期感染ALV对疫苗免疫效果的检测选取1日龄胎粪ALV-p27抗原阴性鸡作为试验动物，8周龄时检测其ALV-p27抗原淘汰阳性鸡，阴性鸡饲养至23周龄再次检测泄殖腔棉拭子ALV-P27抗原，根据检测结果将其分为两组，抗原阳性鸡为试验组（40只），由于经过了1日龄和8周龄检测淘汰阳性鸡，因此该试验组中的鸡大部分是后期感染ALV所致

8、；23周龄抗原阴性鸡作为阴性组（40只）。2组鸡的饲养管理和免疫程序完全一致，在180日龄每组各随机采集24只鸡的血清，检测新城疫、禽流感Hs、禽流感H9抗体效价，并进行统计分析比较其差异。1.2.2试验数据统计分析试验所得的所有数据，采用MicrosoftExcel软件进行整理和统计分析，抗体效价数据以平均数士标准差来表示。2结果2.1经种蛋垂直传播1日龄雏鸡感染ALV对ND和AI疫苗免疫效果的影响2.1.1 对ND抗体效价的影响雏鸡饲养至45日龄时，分别采集阳性试验组和阴性组各24只鸡的血清，利用微量HA-HI试验，测定样品中ND抗体效价。结果显示，阳性试验组ND抗体效价平均值为8.29l

9、og2,阴性组为10.00log2,阳性试验组的抗体水平显著低于阴性组（P<0.05）（表1）。2.1.2 对禽流感Hg抗体效价的影响检测结果显示，阳性试验组禽流感H,抗体效价平均值为7.13log2,阴性组为9.50log2,阳性试验组的抗体水平显著低于阴性组（P<0.05）（表Do对禽流感氏抗体效价的影响锥鸡饲养至65日龄时，分别采集阳性试验组和阴性组各24只鸡的血清，利用微量HA-HI试验，测定样品中禽流感也（Re-6）、压（Re-7）和H5（Re-8）抗体效价。结果显示，阳性试验组禽流感H5（Re-6）抗体效价平均值为8.58log2,阴性组为10.171og2,阳性组显著

10、低于阴性组（PV0.05）；阳性试验组禽流感H5（Re-7）抗体效价平均值为5.71log2,阴性组为6.71log2,两组间差异极显著（PV0.01）;阳性试验组禽流感H5（Re-8）抗体效价平均值为8.17log2,阴性组为9.96log2,两组间差异极显著（P<0.01）（表2）。表145日龄鸡血清中ND.AI-H,抗体水平(nlog2)Table1NDandAI-H9antibodytiterinserumof45-dayoldchickens组别鸡只数ND抗体效价AIH9抗体效价GroupsThenumberofchickensNDantibodytiterAI-H9antib

11、odytiter阳性组Positivegroup248.29±】.04.7.13±0.99.阴性组Negativegroup2410.00±0.729.50±0.59注：*表示差异显著(P<0.05).Note：*MeansignificantdifferencePV。.05).表265日龄鸡血清中AI-H5抗体水平(nlog2)Table2AI-H$antibodytiterinserumof65-dayoldchickens组别Groups鸡只数ThenumberofchickensH5(Rl6)抗体效价H$(Re-6)antibodytite

12、rH5(Re-7)抗体效价Hs(Re-7)antibodytiterH5(Re-8)抗体效价Hs(Re-8)antibodytiter阳性组Positivegroup248.58土0.78-5.71±0.818.17土0.76,阴性组Negativegroup2410.17±0.706.71±0.699.96±0.55注：*表示差异显著(PV0.05)；*表示差异极显著(PV0.01).Note：«MeansignificantdifferencedPV0.05);*Meanextremelysignificantdifference(PVO.

13、Ol).2.2后期感染ALV对ND和AI疫苗免疫效果的影响2.2.1对ND抗体效价的影响180日龄时，分别采集阳性试验组和阴性组各24只鸡的血清，测定样品中ND抗体效价，结果显示，阳性试验组ND抗体效价平均值为10.63log2,阴性组平均值为10.88log2,阳性组略低于阴性组，但两组间差异不显著(P>0.05)(表3)。2.2.2对禽流感H9抗体效价的影响检测结果显示，阳性试验组禽流感H9抗体效价平均值为10.00log2,阴性组平均值为10.25log2,阳性组略低于阴性组，但两组间差异不显著(P>0.05)(表3)。2.2.3 对禽流感H$抗体效价的影响检测结果显示，阳性

14、试验组禽流感H5(Re-6)抗体效价平均值为8.33log2,阴性组为8.29log2,阳性组略高于阴性组，但两组间差异不显著(P>0.05)o阳性试验组禽流感Hs(Re-7)抗体效价平均值为7.79log2,阴性组为8.331og2,阳性组低于阴性组，但两组间差异不显著(P>0.05)；阳性试验组禽流感H"Re-8)抗体效价平均值为8.25log2,阴性组为8.46log2,阳性组略低于阴性组，两组间差异不显著(P>0.05)(表3)。表3180日龄鸡血清中ND与AI-H9、Hs抗体水平(log2)Tabic3NDandAI-H5/9antibodytiterin

15、serumof180-dayoldchickens组别Groups检测鸡只数ThenumberofchickensND抗体效价NDantibodytiterh9抗体效价HgantibodytiterHs(Re-6)抗体效价Hs(Re-6>antibodytiterH5(Re-7)抗体效价H$(Re-7)antibodytiterH5(Re-8)抗体效价Hs(Re-8)antibodytiter阳性组Positivegroup2410.63±0.5810.00土0.888.33±1.137.79±1.258.25±1.07阴性蛆Negativegro

16、up2410.88±0.3410.25±0.618.29±l.O48.33±0.968.46±0.722.3垂直传播感染ALV和后期感染ALV对、D和Al疫苗免疫效果影响的差异性比较由表1、表2、表3检测结果可知，经种蛋垂直传播1日龄雏鸡感染ALV能显著降低ND、禽流感和H5疫苗免疫的抗体水平，阳性组血清中ND、禽流感H9和Hs抗体效价显著低于阴性组，两组间差异均极显著(PV0.01);而后期感染ALV,对ND和AI疫苗的免疫没有明显的抑制作用，阳性组血清中ND、禽流感H9和H5抗体效价与阴性组相比无显著差异(P>0.05)。3讨论由于E

17、LISA方法检测ALV-p27抗原，无法检测出所有的外源性ALV："：,因此，尽管鸡群在1日龄和8周龄两个时间点检测ALV-P27抗原淘汰阳性鸡，鸡群中仍然存在少数抗原阴性带毒鸡，这部分鸡生长到一定日龄后仍可向外排毒，导致与其接触鸡群感染ALV,这是鸡群后期水平感染ALV的重要原因。根据本试验23周龄ALV-P27抗原检测结果，阳性率达4.73%。因此在开展禽白血病净化工作时，一个世代需经多次检测淘汰抗原阳性鸡并结合病毒的分离，同时要健全生物安全制度和孵化管理，经过45世代净化才能达到彻底根除目的。本试验研究结果表明，ALV经种蛋垂直传播感染1日龄雏鸡能显著降低感染鸡群ND和AI疫苗

18、的免疫效果，阳性组血清中ND、禽流感H9和H5抗体效价显著低于阴性组，两组间差异均极显著(PV0.01)；而后期水平传播感染ALV,对ND和AI疫苗的免疫没有明显抑制作用，阳性组血清中ND、禽流感H9和H5抗体效价与阴性组相比无显著差异。王建新等报道，1日龄肉鸡人工感染ALV-J能显著降低新城疫的抗体效价，与本试验研究结果ALV经种蛋垂直传播感染1日龄雏鸡能显著抑制ND、禽流感H9和H5免疫效果相一致。司兴奎等研究报道ALV感染程度与新城疫、禽流感的免疫抗体水平具有明显的负相关性"I°张丹俊等研究报道五华鸡群感染ALV-J对247.278和337日龄鸡血清中ND、禽流感H9

19、和H5抗体效价没有明显影响LI,与本试验研究结果后期水平传播感染ALV对疫苗的免疫效果没有显著影响也相符合。研究表明ALV可以通过干扰功能性白细胞介素2(IL-2)的合成，导致B淋巴细胞成熟受抑制和阻断T淋巴细胞的发育。商营利等研究表明，ALV-J可引起鸡胸腺、法氏囊及脾脏中淋巴细胞的凋亡，凋亡现象主要在早期，随日龄的增加凋亡细胞逐渐减少这可以部分解释本试验中ALV经种蛋垂直传播感染1日龄雏鸡能显著降低ND、禽流感和压疫苗免疫的抗体水平，而后期水平传播感染对ND和AI疫苗的免疫没有明显抑制作用。ALV感染越早对鸡群的危害越严重，因此，做好种鸡AL净化，降低雏鸡ALV感染率是充分发挥ND、AI等

20、疫苗免疫效果，有效预防新城疫和禽流感的重要措施之一。参考文献：1 崔治中.禽白血病病毒研究的过去、现在和将来J.生命科学，2012,24(4),35-38.2 杜岩，崔治中，泰及建，等.从市场商品肉鸡中检出J亚群念白血病病毒J.中国家旗学报,1999,3(1):1-4.3 SunSH.CuiZZ.EpidemiologicalandpathologicalstudiesofsubgroupJavianleukosisvirusinfectiousinChineselocal“yellow"chickenJ.AvianPathol,2007,36：221-6.4 XuB,DongW,Y

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23、onImmunizedEfficacyofNewcastleDiseaseandAvianInfluenzaVaccineZHANGGui-zhi',JINShuang-xing1,HUANGYan-kun1»CHENWen-ping2.CollegeofAnimalScienceandTechnologyHenanUniversityofAnimalHusbandryandEconomyZhengzhouHenan*450046tCAtnai2.WuyangCountryAnimalDiseasePreventionandCountroICenterfLuoheHenan462400)Abstract；ToinvestigatetheeffectofAvianLeukosisvirus(ALV)infectiononimmunizedefficacyofnew-castledisease(ND)andAvianInfluenza(Al)v