功能性食品的设计方案食科1102班

1、 功能性食品的设计方案：一.设计题目：增强人体免疫力香菇（香菇多糖）二. 香菇多糖提取方案：原理：香菇多糖，是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力，从而提高人体的免疫能力。实验方法1 提取 将香菇洗净后除根部后切除根部，菌伞切成小块，放入真空干燥箱（低温）烘干，然后将烘干的香菇小块放在研钵里研磨。 用台秤量取香菇粉20g，置于250ml烧杯中，加入100ml蒸馏水，于石棉网上加热至沸，并不断搅拌，煮沸30min后,抽滤。滤渣再用100ml蒸馏水溶液煮沸30min,抽率。合并两次滤液，然后将合并后的滤液加热浓缩

2、至20ml,溶于100ml95乙醇，搅拌并冷却至室温，静置1h。将混合液以4000r/min的转速离心10min,得到的沉淀放在真空干燥器中干燥，得到粗香菇多糖。2.除蛋白 将得到的粗糖50ml100热水溶解，加Sevage 溶液 氯仿：正丁醇=5：1（V/V） 10ml,剧烈震动 10mim,静置10min， 4000r/min离心10min,取上层清液，加Sevage 溶液反复操作5次3.纯化 将提取的粗糖置于烧杯中，加蒸馏水50ml溶解，向溶液中加入等体积0.15mol/l的CTAB与硼酸-硼砂缓冲液处理，静置10min, 4000r/min离心得沉淀用2mol/l乙酸溶解，静置10mi

3、n, 4000r/min离心后去上清液加等体积甲醇，静置24h.三香菇多糖注射液的用量及毒理学评价1.用法用量：每周两次，每次一瓶2ml（含1mg），加入250ml生理盐水或5%葡萄糖注射液中滴注，或用5%葡萄注射液20ml稀释后静注。2.毒理学评价：药理作用：香菇多糖是一种具有免疫调节作用的抗肿瘤辅助药物，能促进T、B淋巴细胞增殖，提高NK细胞活性，从而提高人体免疫能力。毒理研究重复给药毒性：大鼠、犬和猴重复给药试验中均可见网状内皮细胞肿大和增殖，在大鼠（0.03mg/kg，1个月；0.01mg/kg，3个月）和猴（2mg/kg，6个月）中，可见中小动脉动脉炎，在2mg/kg组中，部分犬和猴

4、有胃肠道或膀胱出血及皮疹和溃疡。以上病变除大鼠的动脉炎外，仅见于高剂量组，停药后有恢复趋势。猴和犬大剂量注射本品可产生泡沫细胞和血管炎，泡沫反应表现过量的多糖进入组织，特别是网状内皮系统。遗传毒性：本品致突变试验结果阴性。生殖毒性：雌性大鼠妊娠前给予香菇多糖剂量达1.0mg/kg，未见异常。雄性大鼠给予0.01mg/kg未见授精异常，但在0.1和1.0mg/kg组可见轻至中度授精异常。在大鼠和免器官形成期给药的试验中，最大剂量分别为5.0mg/kg和1.0mg/kg，未见致畸作用，但仔鼠断乳后体重略低。大鼠围产期和哺乳期给予香菇多糖果剂量达5.0mg/kg时未见异常。四：香菇多糖的功能学评价选

5、取六只生长状况相近的小鼠，分为三组，每组都用电压为0.2伏，电流为45微安的电击设备进行处理，使小鼠的胸腺萎缩，免疫功能下降，然后注射一定量的香菇多糖液，观察并测定小鼠的免疫力增强情况，相同试验重复三次。1.试验项目（动物试验） （1）体重（绝对体重） （2）脏器体重比值 胸腺体重比值、脾脏体重比值 相对比值越大，免疫能力也越强。 （3）细胞免疫功能测定：小鼠脾淋巴细胞转化试验、迟发型变态反应 *小鼠脾淋巴细胞转化试验：1. 采用刀豆蛋白A刺激T淋巴细胞，使母细胞发生增殖反应，活细胞特别是增殖细胞中的线粒体水解酶可将MTT（黄色）分解成蓝紫色结晶。2. 721分光光度计570nim测定光密度值

6、0D能反映细胞的增殖情况。3. 受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，结果为阳性，需方差分析。*迟发型变态反应：1. 二硝基氟苯(DNFB)稀释液与腹壁皮肤蛋白结合成完全蛋白，由此刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，47天后，再将其涂抹于耳部进行抗原攻击，使局部肿胀，一般在抗原攻击后，2448小时后达到高峰，其肿胀程度可以反应DTH程度。2. 用左右耳的重量之差表示DTH程度，受试样品组的重量差值显著高于对照组的重量差值，判断阳性，数据处理采用方差分析。 (4).体液免疫功能测定：抗体生成细胞检测，血清溶血素测定*抗体生成细胞检测：1. 经过绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞悬液与一定量的绵

7、羊红细胞混合，在补体参与下，使分泌抗体的脾细胞周围的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的空斑。2. 溶血空斑数反映抗体生成细胞数，用空斑数十的六次方 脾细胞数或空斑数全脾细胞数表示，受试样品组的空斑数显著高于对照组的空斑数，判断阳性，数据处理采用方差分析。*血清溶血素测定1. 用绵羊红细胞免疫细胞后，产生抗绵羊红细胞的抗体，利用其凝集绵羊红细胞的程度来检测溶血素的水平。2. 血清凝集程度一般分为5级，受试样品组的抗体水平显著高于对照组的抗体水平，判断阳性，数据处理采用方差分析。级别显示：+ 所有红细胞均凝集-说明凝集能力很强 + 肉眼观察到的大部分红细胞凝集-说明凝集能力强+ 部分红细胞凝集-说明凝

8、集能力属于中等强度 + 少部分红细胞凝集-说明凝集能力弱 - 红细胞完全不凝集（5）单核-巨噬细胞功能测定：小鼠碳廓清试验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验*小鼠碳廓清试验1. 从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨（100ml|kg）立即计时，在一定范围内，体内碳颗粒被清除速率与血碳浓度呈指函数关系。2. 721分光光度计600nm测血液碳酸钠溶液的光密度值，采用吞噬指数表示碳廓清能力，受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，判定阳性，数据处理采用方差分析。吞噬指数=（体重 肝+脾的重量）×k的三分之一次方 *小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验1. 滴片法：巨噬细胞对光滑表面有粘附的特性

9、，将含有巨噬细胞的腹腔液滴在载玻片上，加入鸡红细胞，孵育一定时间后，冲洗掉未粘附的细胞，固定染色，显微镜计数巨噬细胞数显示吞噬细胞率和吞噬指数。2. 721分光光度计600nm测血液碳酸钠溶液的光密度值，采用吞噬指数表示小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力，受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，判定阳性，数据处理采用方差分析。 （六）NK细胞活性测定1. 乳酸脱氢酶测定法：活碳含有的乳酸脱氢酶不能透过碳膜，受到NK杀伤后，乳酸脱氢酶释放到碳外，可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH,NADH再经递氢体PMS还原INT成紫红色化合物。2.在酶标仪上490nm比色测定光密度值，根据公式计算

10、NK细胞活性=【（反应孔0D自然释放孔0D） （最大释放孔0D 自然释放孔0D）】×100%，受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性，判定阳性，数据处理采用方差分析。2】试验原则：1. 所有项目均为必测项目2. 采用正常或免疫力低下的模型动物进行实验3】结果判定测定项目2-5的结果阳性或任一试验的两个剂量组的结果阳性及测定项目6的一个以上剂量组为阳性，则可判定该受试样品具有免疫调节作用。五适宜人群全体人群六自我评价： 转眼间，一学期的功能性食品课程已经结束了，回想这一学期的表现，总结如下： 我仍然清楚的记得第一节课，老师给我们进行的思想教育，课后我也自己思考了好多，明白自己为什么会迷茫，会找不到方向，最主要的原因是缺乏动力和意志力。 因此，以后的每节课，我都会坐在第一排，认真听讲，不把这堂课当做考查课，而是想着多汲取点知识。对于老师上课提出的问题，我也能认真思考，积级回答，几乎没有开过小差，保证了课堂效率，但是课后疏于巩固，在以后的学习中我会特别注意这一点的。 在做实验的环节中，我每次都会按时到，严格按照老师的要求，积极主动的投入实验中，