生物类课程试验教学指导书

1、第一局部 生物学根底实验实验一 细胞的显微与亚显微结构观察一、相关根底知识生物体的一切生命活动， 都是以细胞作为根本结构和功能单位来进行的。 由于其内在结构和自身表 面张力以及外部机械压力，细胞表现具有不同的形态，有圆球形、圆盘形、肾形、多边形、纺锤形等。 更重要的是， 细胞的形态与其功能密切相关， 如红细胞是圆盘形的， 有利于其在血管内流动及气体交换； 肌细胞按收缩方向是细长的纤维状结构， 适于细胞的收缩运动。 精子细胞核小， 具有一条能运动的尾或 鞭毛，以利于其受精过程；植物表皮的保卫细胞是肾形的，似两扇大门、通过对不同细胞形态的观察， 可以了解执行不同生理功能的细胞所具有的不同形态， 同

2、时还可以认识执行同一功能的细胞具有不同形 态，甚至同一种细胞在不同发育时期也呈现不同形态。虽然形形色色的细胞组成了千奇百怪的生物世界， 但细胞却具有共同的根本结构， 即细胞膜、 细胞 质和细胞核。 这些根本结构不是模式化的， 只有对具体的细胞进行分析观察， 才能正确认识和了解细胞 的结构。细胞的许多结构在自然状态下几乎是无色的， 观察时， 必须经过染色步骤。 不同的结构与不同的染 料有特异性结合， 使细胞的不同部位染上不同深度或不同种的颜色， 并产生不同的折射率。 将细胞内部 各局部的构造显示得更清楚。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被化学试剂固定杀生后，膜结构被破坏，染料才 能进入细

3、胞内部，附着在被染结构上，显示其染色作用。因此，我们称固定剂有“煤染作用。但有一 些活体染料却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂。在电化学作用下，染料堆积在 细胞中某些特定的位置上，从而染色，如中性红染液泡系、健那绿染线立体等。活体染色的方法有体内活染和离体活组织染色两种， 体内活染通常是将染料用注射、 吸收或吞咽等 方法进入生物有机体内进行染色。染色以后， 不影响细胞的生命活动， 不产生任何理化变化。离体活组 织染色是指对已离体的活组织或细胞， 置于相对能保持活性的培养液中， 使其保持生活状态， 再进行染 色的方法。活体染色的目的是显示活细胞的某些结构，用来研究生活状态下的细胞结

4、构和生理病理状态。二、实验目的和要求1、观察各种组织细胞的切片，注意联系细胞的形态与功能的关系。2、学习一些细胞器的超活染色技术，观察植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量与分布。三、实验材料与仪器1、实验材料 1洋葱鳞茎内表皮；2黄豆根尖；3动植物组织标本。2、器材显微镜 刀片 小剪刀 尖头镊 载玻片 盖玻片 擦镜纸 吸水纸 吸管等3、试剂中性红 13000 健那绿 0.5 蒸馏水四、实验方法与步骤1、观察动植物不同组织的切片 单层扁平上皮；多边形或不规那么波浪形彼此边缘紧密镶嵌。 单层柱状上皮：核柱形细胞，形状高细，排列紧密，似木栅栏状。 纤毛上皮：假复层柱状细胞。是由一层不同形状、不同高

5、度的细胞构成。由于细胞大小不同，核不 在同一水平位置上，故称为假复层。骨骼肌：长圆柱状细胞，内有大量卵圆形细胞核，在肌膜下排成一行，为典型多核细胞。 平滑肌：长棱形细胞，中央有一圆形核。脂肪细胞：圆形细胞，脂滴占据大局部容积。 软骨细胞：陷在软骨陷窝内的大小不等的圆形细胞。 人血涂片：观察不同核形的白细胞及双凹面形红细胞。 鸡血涂片：卵圆形细胞，与人血涂片比拟其胞形、核形。 运动神经元涂片；不规那么形细胞，胞体为三角形或多边形。突起由胞体不规那么延伸。 精巢切片；观察精巢内精细胞在不同发育阶段的不同形态。 洋葱根尖；观察根尖的形态、区分根冠区、分生区、伸长区的不同形态细胞。2、黄豆根尖细胞液泡

6、系的活染及观察 取一干净载片，中央滴一滴中性红染液。用刀片将初生的黄豆根尖切一纵切薄片，置染液中，染 5-10min 。用吸管吸取蒸馏水，滴在染液周围，使染液冲淡近无色。此时，轻轻盖一干净载片，用吸水 纸吸去多余水分。 先观察分生区细胞， 寻找染成红色的圆形小泡， 即初生液泡。 由分生区向伸长区观察， 寻找体积增大的液泡。3、洋葱表皮细胞线粒体的活染及观察 取一干净载片，中央滴一滴健那绿染液。用尖头镊从洋葱鳞片内撕下一小片表皮，平铺在染料上，勿使有气泡、染 510min。用吸管吸蒸馏水洗去染液，盖片.吸去多余水分。观察胞质中被染成蓝、 绿色的颗粒，即线粒体。五、作业与讨论1. 完成实验报告。2

7、. 答复以下问题：显微镜观察为什么要染色？活体染色与常规染色的异同点在何处？实验二 线粒体和液泡系的超活染色与观察、实验目的1. 观 察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。2. 学习一些细胞器的超活染色技术。二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构， 而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、 化学变化以致引起细胞的死亡。 活体染 色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的不同， 通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。 体内活染是以胶体状的染料溶液注入植物体内。

8、染料的胶粒固定、 堆积在细胞内某些特殊结构里， 到达易于识 别的目的。 体外活体染色又称超活染色， 它是由活的动、 植物别离出局部细胞或组织小块， 以染料溶液 浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、 堆积在细胞内某些特殊的局部， 主要是染料的 “电化学 特性起重要作用。 碱性染料的胶粒外表带阳离子， 酸性染料的胶粒外表带有阴离子， 而被染的局部本身也是具有阴离子或 阳离子，这样， 它们彼此之间就发生了吸引作用。 但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用， 应选择 那些对细胞无毒性或毒性极小的染料， 而且总是要配成稀淡的溶液来使用。 一般是以碱性染料最为适用， 可能

9、因为它具有溶解在类脂质如卵磷脂、胆固醇等的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B Janusgreen B和中性红neutral red 两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的 染色各有专一性。三、实验用品一器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、外表皿、 吸管、吸水纸。二试剂0.85g0.25g0.03g1. Ringer 溶液氯化钠 氯化钾 氯化钙蒸馏水100 ml2. 10% 、 1 3000 中性红溶液称取0.5g中性红溶于50ml Rin ger液，稍加热3040 C使之很快溶解，用滤纸过滤，装人棕色 瓶于暗处保存，否那么易

10、氧化沉淀，失去染色能力。临用前，取已配制的 1%中性红溶液Iml，参加29ml Rin ger溶液混匀。装入棕色瓶备用。3. 1、 15000詹纳斯绿 B 溶液称取50mg詹纳斯绿B溶于 5ml Ringer溶液中，稍加热3040C,使之溶解，用滤纸过滤后， 即为I %原液。取I %原液Iml参加49ml Rin ger溶液，即成1/5000工作液酒人瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。三材料1 洋葱鳞莫内表皮细胞。 2小麦或黄豆幼根根尖。四、实验方法一线粒体的超活染色与观察线粒体是细胞进行呼吸作用的场所， 其形态和数量随不同物种、 不同组织器官和不同的生理状态而 发生变化。詹纳斯

11、绿B是毒性较小的碱性染料， 可专一性地对线粒体进行超活染色， 这是由于线粒体内的细胞 色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态即有色状态，呈蓝绿色； 而线粒体周围的细胞质中，这些染料被复原为无色的色基即无色状态 。洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色观察1. 用吸管吸取1 /5000詹纳斯绿B染液，滴一滴于干净的载玻片上，然后，撕取一小片洋葱鳞 茎内表皮，置于染液中，染色 1015min。2 用吸管吸去染液，加一滴 Ringer 液，注意使内表皮组织展平，盖上盖被片进行观察。3 在高倍镜下， 可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一倒贴细胞壁处。 仔细观察细胞质中线粒体的形态与分布。

12、二液泡系的超活染色与观状中性红为弱碱性染料， 对液泡系 即高尔基体 的染色有专一性， 只将活细胞中的液泡系染成红色， 细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察：1. 实验前，把小麦种子或黄豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到 1cm 以上。2. 用双面刀片把初生的小麦或黄豆幼苗很尖约12cm长小心切一纵切面，放入载玻片上的1/ 3000中性红染液滴中，染色 510min。3. 吸去染液，滴一滴 Ringer 液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使很尖压扁，利于观 察。4. 在高倍镜下， 先观察根尖局部的生长点的细胞， 可见

13、细胞质中散在很多大小不等的染成玫瑰红色 的圆形小泡， 这是初生的幼小液泡。 然后， 由生长点向延长区观察， 在一些已分化长大的细胞内， 液泡的染色较浅，体积增大，数目变少。在成熟区细胞中，一般只有一个淡红色的巨大液泡，占 据细胞的绝大局部，将细胞核挤到细胞一倒贴近细胞壁处。实验三 叶绿体的别离与荧光观察叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器， 光合作用就是在叶绿体中进行的。 由于具有这一重要 功能， 所以它一直是细胞生物学、 遗传学和分子生物学的重要研究对象。 叶绿体是植物细胞中较大的一 种细胞器，利用低速离心即可别离集中进行各种研究。一、实验目的1. 通 过植物细胞叶绿体的别离，了解细胞器别

14、离的一般原理和方法。2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。二、实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心， 是别离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的 沉降速率取决于颗粒的大小、 形状和密度， 也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。 在一给定的离心场中， 同一时间内， 密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。 依次增加离心力和离心时间， 就能够使非均一悬 浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。叶绿体的别离应在等渗溶液0.35 mol / L氯化钠或0.4 mol /L蔗糖溶液中进行，以免渗透压的 改变使叶绿体受到损伤。

15、将匀浆液在 1000r/ min的条件下离心 2min，以去除其中的组织残渣和一些 未被破碎的完整细胞。然后，在 3000r/ min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体混有局部细 胞核。别离过程最好在 05C的条件下进行；如果在室温下，要迅速别离和观察。荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。某些物质在一定短波长的光如紫外光 的照射下吸收光能进入激发态， 从激发态回到基态时， 就能在极短的时间内放射出比照射 光波长更长的光如可见光 ，这种光就称为荧光。假设停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物 质受激发光照射后可直接发出荧光，称为自发荧光或直接荧光，如叶绿素的

16、火红色荧光和木质素的黄色荧光等。 有的生物材料本身不发荧光， 但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光， 这种荧光称为次生 荧光或间接荧光 ，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间， 有必要时立即拍照。 另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、 盖片和无荧光油。三、实验用品一器材1. 主要设备：普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。2小型器材：500ml烧杯2个，250ml量筒1个，滴管10支，10ml刻度离心管20支，纱布假设干，无 荧光载片和盖片各 4 片。二材料新鲜菠菜三试

17、剂0.35mol/ L 氯化钠涪液，0.01 % 吖啶橙acridine orange。四、实验方法一叶绿体的别离与观察1 .选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称30g 放入 150ml 0.35mol /L NaCl 溶液中，装人组织捣碎机。2. 利用组织捣碎机低速5000r/min匀浆35min。3. 将匀浆用 6 层纱布过赖于 500ml 烧杯中。4. 取滤液4m1在1000 r/ min下离心2 min。弃去沉淀。5. 将上清液在 3000 r/min 下离心 5min 。弃去上清液，沉淀即为叶绿体 混有局部细胞核 。6. 将沉淀用 0.35mol/L Nacl 溶液悬浮。

18、7. 取叶绿体悬液一滴滴于载片上，加盖片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。 在普通光镜下观察。 普通光镜下， 可看到叶绿体为绿色橄榄形， 在高倍镜下可看到叶绿体内部 含有较深的绿色小颗粒，即基粒。 在荧光显微镜下观察。以Olympus荧光显微镜为例，在选用£ blue激发滤片、E双色镜和O 530 orange阻断滤片的条件下，叶绿体发出火红色荧光。 取叶绿体液一滴滴在无荧光载片上， 再滴加滴 0.01%吖啶橙荧光染料， 加无荧光盖片后即可 在荧光显微镜下观察。 参加吖啶橙染色后， 叶绿体可发出桔红色荧光， 而其中混有的细胞核那么 发绿色荧光。二菠菜叶手切片观察用剃须刀将新鲜的嫩菠

19、菜叶切削一斜面置于载片上，滴加I2滴0.35mol/L NaCL溶液，加盖片后轻压，置显微镜下观察。1. 在普通光镜下观察。在普通光镜下可以看到三种细胞表皮细胞：为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞。保卫细跑：为构成气孔的成对存在的肾细胞。叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞。叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。2. 在荧光显微镜下观察。在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光，但其荧光强度要比游离叶绿体弱。气孔发绿色荧光， 两保卫细胞内的火红色叶绿体那么环绕气孔排列成一圈。表皮细胞内叶绿体数量要比叶肉细胞少。3. 用同样方法制片，但滴加12滴0.01%吖啶橙染液染色1min，洗去余液，加

20、盖片后即可在荧光显微镜下观察。 用吖啶橙染色后， 叶绿体那么发出桔红色荧光， 细胞核可发出绿色荧光， 气孔仍为绿色。实验四 减数分裂一、目的学习生殖细胞的取材和染色体制片，认识减数分裂各时期的形态特征。二、原理减数分裂是形成生殖细胞的一种特殊方式的细胞分裂。 它是遗传学中一个特别重要的事件， 是维持 大多数动植物品种染色体数目世代稳定传递的根本机制。同时， 基因的别离、 自由组合以及交换无不是通过减数分裂发生的。 可以说减数分裂是经典遗传学的根本， 动植物都是通过减数分裂形成配子， 所以 减数分裂通常以植物的花粉母细胞或动物的精巢、 卵巢作材料进行观察。 减数分裂的特点是： 连续进行 两次核分

21、裂，而染色体仅复制一次，从而形成四个只含单倍数染色体的产物生殖细胞或配子 。三、材料1 小麦雄花序。2 蝗虫精巢。四、器具和试剂镊子、解剖刀、解剖针、载玻片、盖玻片、酒精灯、吸水纸、滴瓶、皮头铅笔、火柴、显徽镜。 卡诺氏固定液，改进苯酚品红、 70酒精。五、步骤一小麦花粉母细胞涂片观察1. 取材和固定：当小麦植株开始挑旗，旗叶与下一叶片的叶耳间距约 35cm，花药长度约2.02.5mm ,气温在23C25C时，将穗子剥出，在卡诺氏固定液中固定24小时。如暂不制片可转入 70%酒精中，4C保存。2. 染色和压片：从穗中部小穗中取出花药假设干置于载片上，切去花药端部，滴两滴改进苯酚品红，用 摄子挤

22、压花药，使内含物全部挤出，除去药壁，将挤出的细胞轻轻敲打；如果花药较小，也可滴两 滴染液后用镊子直接将花药捣碎，去除未碎的组织，然后盖上盖玻片，在酒精灯上微微加热。用左 手拇指及食指固定盖片与载片，勿使其移动。右手拇指用力压盖玻片，使细胞伸展开。3. 镜检：由于小麦小穗发育是以中部小穗最先发育，然后依次向上、下推移，所以在一个穗子上往往 能找到减数分裂的假设干时期。 如果中部花药尚未进入减数分裂时期那么需要另选一个更大的稳于取花 药制片。二蝗虫精巢精母细胞制片观察1. 取材和固定：捕捉进入繁殖期的雄性蝗虫，剪开胸腹部体壁，放入卡诺氏固定液中固定24 小时，暂不制片时，可重复固定一次，转入 70

23、%酒精中4C保存。2. 制片：取虫体剪去翅膀，在翅的基部前方，相当于腹部前端的背侧，仔细剪干体壁，从精巢中前部 取几段精细管放在载片上，用解剖针撕碎精细管，除去大块管壁组织，涂匀。3. 染色观察：加改进苯酚品红 35滴，染色 10分钟必要时可在酒精灯上快速掠几下加上盖片和 吸水纸，以指压法压片。光镜下，可以看到减数分裂的各个时期，以及精子的形成过程。六、作业1 绘制你所看到的分裂图，并注明属什么时期。2 试比拟减数分裂与有丝分裂过程中，染色体的动态有何异同。实验五 植物多倍体细胞的诱导和观察一、目的 了解和掌握用秋水仙素诱导植物多倍体的原理和一般方法。二、原理 秋水仙素诱导多倍体的机制在于抑制

24、纺锤丝的形成，使每个染色体纵裂后，不能移向两 极，同时细胞也不能分裂，从而导致细胞染色体数增加，成为多倍体细胞。三、材料、器具和试剂洋葱鳞茎 显微镜、培养皿、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、指管、水浴锅、刀片。0.1NHCI、0秋水仙素、卡诺氏固定液、改进苯酚品红，70%酒精。四、步骤1. 秋水仙素处理：将不定根长至5cm的洋葱鳞茎置于0.1 %的秋水仙素液中浸没根尖部，室温下培 养至根尖膨大，剪取根部、卡诺氏固定液固定24小时，如暂不使用可转入 70%酒精中4C保存。2. 解离：取根尖置于大指管中加 60C预温的0.1NHCI , 60C水浴中，解离810分钟，洗去多余盐酸。3. 制片：取根尖

25、在载片上，切去延长区局部，用镊子将根尖充分压碎也可用刀片充分切碎涂匀。4. 染色观察： 加染色液假设干滴， 染色 5 分钟加盖片和吸水纸， 用铅笔皮头适当敲打， 光镜寻找分散好， 背景清晰的图象观察。五、作业观察多倍体细胞的情况，并选择你所看到的清晰的图象绘图。实验六 果蝇唾腺染色体的制片与观察、目的1. 练习别离果蝇幼虫唾腺的技术，学习唾腺染色体的制片方法。2 观察了解果蝇唾腺染色体的特征。、原理双翅目昆虫的唾腺细胞发育到一定阶段之后就不再进行有丝分裂， 而停止在分裂间期， 但唾腺染色 体仍不断复制而不分开， 从而形成约 1000 一 4000 拷贝的染色体丝， 比其它细胞的中期染色体大得多

26、 约 100150倍所以又称多线染色体和巨大染色体。唾腺染色体还具有明显的横纹， 其数目、 宽窄和排列顺序都具有种的特异性。 同时其“体细胞联会 的特点，也为染色体畸变的研究提供了很大的方便。三、材料黑腹果蝇的三龄幼虫。四、器具和试剂显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、吸水纸、皮头铅笔。 果蝇幼虫培养基，改进苯酚品红、 1NHCl ， 0.7生理盐水。五、步骤1. 果蝇三龄幼虫的培养：15C18 C培养果蝇幼虫，爬至培养瓶壁的幼虫即为三龄幼虫。2 染色体制片：1在载玻片上滴一滴生理盐水， 取三龄幼虫置于生理盐水中， 用两支解剖针， 一支压住幼虫末端13 处，另一支小心插入头部，人尽可能靠近口

27、器处平稳快速拉出唾腺一对透明的香蕉状腺体。2用解剖针剔除脂肪体等其他组织。吸水纸吸去多余生理盐水，而后加一滴1NHCl ，浸 23分钟，使腺体组织疏松，易于压片和获得清晰图像。3吸去多余 HCl ，生理盐水轻轻冲洗。4吸去多余生理盐水，加数滴改进本酚品红染色 10分钟。5盖上盖玻片和吸水纸， 以左手中指和食指固定载片和盖片，用铅笔的皮头适当敲打或用右手拇指用力压片。3. .观察：寻找形态良好、分散适中的图像仔细观察各条臂的特点。六、作业1. 绘制你所看到的清晰的唾腺染色体图。2. 对实验成败原因进行总结分析。实验七 青蛙的消化、呼吸、泄殖和神经系统一、目的通过蛙或蟾蜍的内部解剖和观察，了解两栖

28、动物消化、呼吸、泄殖系统和神经系统的形态构造 及特点；学习一般解剖技术。二、内容1. 蛙或蟾蜍的解剖及其消化、呼吸和泄殖系统形态结构的观察。2 蛙或蟾蜍神经系统的示范。三、实验材料和用具活蛙或蟾蜍 ，蛙或蟾蜍神经系统示范标本。 解剖器、蜡盘、鬃毛、大头针、放大镜、棉花、乙醚或氯仿等。四、实验操作及观察解剖蛙或蟾蜍剪开腹壁时，应沿腹中线稍偏左侧剪，以不致损毁位于腹中线的腹静脉。同时注 意剪刀尖应向上挑，以免损伤内脏。将右侧腹壁翻开前，先将腹静脉从腹壁上剥离开。用双毁髓法处死活蛙或蟾蜍 ，或使其麻醉致死。 麻醉法：将活蛙或蟾蜍置于装有浸过乙醚或氯仿棉球的广口瓶内，加盖静置至蛙深度麻醉 致死、：将已

29、死的蛙或蟾蜍腹面向上置于蜡盘中，展开四肢，用大头针于腕部和跗部钉入，以将蛙或 蟾蜍固定在蜡板上。一口腔： 为消化和呼吸系统共同的通道。1 舌：左手持镊将蛙或蟾蜍的下颌拉下，可见口腔底部中央有一柔软的肌肉质舌，其基部着生在 下颌前端内侧，舌尖向后伸向咽部。右手用镊子轻轻将舌从口腔内向外翻拉出展平，可看到蛙的舌 尖分叉蟾蜍舌尖钝圆，不分叉 ，用手指触舌面有粘滑感。右手持剪剪开左右口角至鼓膜下方， 令口腔全部露出。2 内鼻孔： 1 对椭圆形孔，位于口腔顶壁近吻端处。取一鬃毛从外鼻孔穿入，可见鬃毛由内鼻孔穿出。3 齿：沿上颌边缘有一行细而尖的牙齿，齿尖向后，即颌齿蟾蜍无齿；在 1 对内鼻孔之间有两丛细

30、齿，为犁齿蟾蜍无齿 。4 耳咽管孔：位于口腔顶壁两侧，颌角附近的1 对大孔。用镊子由此孔轻轻探入，可通过鼓膜。5 声囊孔：雄蛙口腔底部两侧口角处，耳咽管孔稍前方，有1 对小孔即声囊孔雄蟾蜍无此孔 。6 喉门：为舌尖前方，腹面的具有纵裂的圆形突起。内由1 对半圆形杓状软骨支持，两软骨间的纵裂即喉门，是喉气管室在咽部的开口。7 食管口：喉门的背侧，咽底的皱襞状开口。观察完口腔后，剪开皮肤。然后用镊子将两后肢基部之 间的腹直肌后端提起，用剪刀沿腹中线稍偏左自后向前剪开腹壁这样不致损毁位于腹中线上的腹 静脉，剪至剑胸骨处时，再沿剑胸骨的左、右侧斜剪，剪断乌喙骨和肩呷骨。用镊子轻轻提起剑 胸骨，仔细剥离

31、胸骨与围心膜间的结缔组织注意勿损伤围心膜 ，最后剪去胸骨和胸部肌肉。将 腹壁中线处的腹静脉从腹壁上剥离开；再将腹壁向两侧翻开，用大头针固定在蜡板上。此时可见位 于体腔前端的心脏，心脏两侧的肺囊，心脏前方的肝脏，以及胃、膀胱等器官，本实验中暂不仔细 观察心脏。二消化系统1 肝脏：红褐色，位于体腔前端，心脏的前方，由较大的左右两叶和较小的中叶组成。在中叶反面， 左右两叶之间有一绿色圆形小体，即胆囊。用镊子夹起胆囊，轻轻向后牵拉，可见胆囊前缘向外发 出两根胆囊管，一根与肝管连接，接收肝脏分泌的胆汁，一根与总输胆管相接。胆汁经总输胆管进 入十二指肠。提起十二指肠，用手指挤压胆囊，可见有暗绿色胆汁经总输

32、胆管而入十二指肠。2 食管：将心脏和左叶肝脏推向右侧，可见心脏背方有一乳白色短管与胃相连，此管即食管。3 胃：为食管下端所连的一个弯曲的膨大囊状体，局部被肝脏遮盖。胃与食管相连处称贲门；胃与小 肠交接处明显紧缩，变窄，为幽门。胃内侧的小弯曲，称胃小弯；外侧的弯曲称胃大弯；胃中间部 称胃底。4 肠：可分小肠和大肠两部。小肠自幽门后开始，向右前方伸出的一段为十二指肠；其后向右前方弯 转并继而盘曲在体腔右下部， 为回肠。 大肠接于回肠， 膨大而陡直， 又称直肠； 直肠向后通泄殖腔， 以泄殖腔孔开口于体外。5 胰脏：为一条淡红色或黄白色的腺体，位于胃和十二指肠间的弯曲处。将肝、胃和十二指肠翻折向 前方

33、，即可看到胰脏的反面。总输胆管穿过胰脏，并接受胰管通入。但胰管细小，一般不易看到。6 脾：在直肠前端的肠系膜上，有一红褐色球状物，即脾。它是一淋巴器官，与消化无关。(三)呼吸系统： 蛙为肺皮呼吸。肺呼吸的器官有鼻腔、口腔、喉气管室和肺。其中鼻腔和口腔已 于口腔处观察过。1 喉气管室：左手持摄轻轻将心脏后移，右手用钝头镊子自咽部喉门处通入，可见心脏背方一短粗略 透明的管子，即喉气管室，其后端通入肺。2 肺：为位于心脏两侧的 1 对粉红色、近椭圆形的薄壁囊状物。剪开肺壁可见其内外表呈蜂窝状，密 布微血管。(四)泄殖系统： 将消化管移向一侧，仔细观察以下结构。蛙(或蟾蜍)为雌雄异体，观察时可互 换不

34、同性别的标本。1泌尿器官：(1) 肾脏：I对红褐色长而扁平的器官，位于体腔后部，紧贴背壁脊柱的两侧。将其外表的腹腔膜剥离 开，即清楚可见。肾的腹线有 1 条橙黄色的肾上腺，为内分泌腺体。(2) 输尿管：由两肾的外缘近后端发出的1 对壁很薄的细管，它向后伸延，分别通入泄殖腔背壁(蟾 蜍的左右输尿管末端合并成一总管后通入泄殖腔背壁) 。( 3)膀胱：位于体腔后端腹面中央，连附于泄殖腔腹壁的1 个两叶状薄壁囊。膀胱被尿液充盈时，其形状明显可见，当膀胱空虚时，用镊子将它放平展开，也可看到其形状。( 4)泄殖腔：为粪、尿和生殖细胞共同排出的通道，以单一的泄殖腔孔开口于体外。沿腹中线剪开耻 骨，进一步暴露

35、泄殖腔。剪开泄殖腔的侧壁并展开腔壁，用放大镜观察腔壁上输尿管、膀胱，以及雌蛙 输卵管通入泄殖腔的位置。2雄性：( 1)精巢： 1 对，位于肾脏腹面内侧，近白色，卵圆形(蟾蜍的精巢常为长柱形)，其大小随个体和季节的不同而有差异。( 2)输精小管和输精管：用镊子轻轻提起精巢，可见由精巢内侧发出的许多细管即输精小管，它们通 入肾脏前端。所以雄蛙(或蟾蜍)的输尿管兼输精。( 3)脂肪体：位于精巢前端的黄色指状体，其体积大小在不同季节里变化很大。胸蟾蜍精巢前方，有 1对扁圆形的毕氏器，为退化的卵巢。在肾脏外侧各有 1 条细长管，为退化的输卵管，其前端渐细而封 闭，后端左右合一，开口于泄殖腔。3雌性：(

36、1)卵巢： 1 对，位于肾脏前端腹面，形状大小因季节不同而变化很大。在生殖季节极度膨大，内有 大量黑色卵，未成熟时淡黄色。( 2)输卵管：为 1 对长而迂曲的管子，乳白色，位于输尿管外侧。以喇叭状开口于体腔；后端在接近 泄殖腔处膨大成囊状，称为“子宫 。“子宫开口于泄殖腔背壁(蟾蜍的左右“子宫合并后，通入泄 殖腔)。( 3)脂肪体： 1 对，与雄性的相似，黄色，指状，临近冬眠季节时体积很大。雌蟾蜍的卵巢和脂肪体 之间有橙色球形的毕氏器，为退化的精巢。五、示范蛙(或蟾蜍)的神经系统标本，观察蛙(或蟾蜍)脑和脊用的结构，了解外周神经与中枢神经的关 系。六、作业1. 根据观察绘出蛙或蟾蜍口腔内的结构

37、，注明各结构的名称。2. 根据解剖观察，绘制蛙或蟾蜍泄殖系统结构图，注明各器官的名称。3. 思考题：两栖动物的消化、呼吸系统及感觉器官的哪些方面表现出陆生脊椎动物的特征?实验八 反射时的测定及反射弧的分析、目的要求学习反射时的测定方法，了解反射弧的组成。二、根本原理完整的反射弧是反射的结构根底，反射弧任何一局部损坏，原来的反射便不再出现。反射时是刺激信息通过反射弧所用的时间。本实验选用毁脑的脊蛙或脊蟾蜍为对象，测定比拟简单的脊髓反射的反射时。三、动物与器材蟾蜍或蛙、支架、蛙嘴夹、蛙板、蛙腿夹、小烧杯、小培养皿、常用手术器械、滤纸片、棉花、秒 表、纱布、0.5 %和1 %硫酸溶液、2%普鲁卡因、

38、水。四、方法与步骤1. 取一只给蟾蜍或蛙，只毁脑称脊蛙或脊蟾蜍，腹位固定于蛙板上。剪开右侧股部皮肤，别离出坐骨神经穿线备用。2. 取下蛙腿夹，用蛙嘴夹夹住脊蟾蜍下颌，悬挂于支架上。将蟾蜍右后肢的最长趾浸入0.5%硫酸溶液中23mm 浸入时间最长不超过10s,立即记下时间以秒计算。当出现屈反射时，那么停止计时，此为屈反射时。立即用清水冲洗受刺激的皮肤并用纱布擦干。重复测定屈反射时3次，求出图1.1反射弧分析均值作为右后肢最长趾的反射时。用同样方法测定左后肢最长趾的 反射时。3. 用手术剪自右后肢最长趾基部环切皮肤，然后再用手术摄剥净长趾 上的皮肤。用硫酸刺激去皮的长趾，记录结果。4. 改换右后肢

39、有皮肤的趾，将其浸入硫酸溶液中，测定反射时，记录 结果。5. 取一浸有1%硫酸溶液的滤纸片， 贴于蟾蜍右侧背部或腹部，记录擦 或抓反射的反射时。6. 用一细棉条包住别离出的坐骨神经，在细棉条上滴几滴 2%普鲁卡因 溶液后，每隔2min重复步骤4 记录加药时间。7. 当屈反射刚刚不能出现时记录时间，立即重复步骤 5。每隔2min重复一次步骤 5，直到擦或抓反射不再出现为止记录时间 。记录加药至屈反射消失的时间及加药至察或抓反射消失的时间，并记录反射时的变化。8 将左侧后肢最长趾再次浸入0.5%硫酸溶液中条件不变记录反射时有无变化。毁坏脊髓后再重复实验，记录结果。五、考前须知1每次实验时，要使皮肤

40、接触硫酸的面积不变，以保持相同的刺激强度。2 刺激后要立即洗去硫酸，以免损伤皮肤。六、思考题以实验结果为根据，以严密的逻辑推理方式说明反射孤的几个组成局部。实验九 ABO血型鉴定、目的要求掌握ABO血型的鉴定方法和原理，观察红细胞凝集现象。二、根本原理根据红细胞膜外外表是否存在特异性抗原A和B ,将人的血型分为A、B、AB、O四个类型。血清中含有分别与抗原 A和抗原B 起反响的抗体或凝集素a , 3凝集素。当抗体与相应的抗原起 反响时，红细胞发生凝集，最后溶解。为确保平安输血，临床上在 输血前必须注意鉴定血型。三、实验器材显微镜、双凹载玻片、消毒牙签、刺血针、A型和B型标准血清、生理盐水、酒精

41、棉球。四、方法与步骤1 取一块清洁玻片，用蜡笔划上记号，左上角写A字，右上角写B字。2. 用小滴管吸A型标准血清抗 B 一滴参加左侧，用另一小滴 管吸B型标准血清抗 A 一滴参加右侧。3. 穿刺手指取血，玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使 每侧抗血清和血液混合。每边用一支牙签，切勿混用。A烟血清图1.2血型的检验凝集示意图血tL帼 胞4. 静置室温下1015min后，观察有无疑集现象， 假设只是A侧发生凝集，那么血型为B型；假设只是B 侧凝集，那么为A型；假设两边均凝集，那么为 AB型；假设两边均未发生凝集，那么为O型。这种凝集反响的强度因人而异，所以有时需借助显微镜才能确定是否出现凝集

42、。五、思考题1 根据自己的血型，说明你能接受和输血给何种血型的人，为什么？2 如何区别血液的凝集与凝固，其机理是否一样？实验十 家兔系统解剖与观察一、实验目的与内容1掌握家兔的处死方法与解剖技术2通过解剖观察家兔的内部结构，了解家兔消化系统、呼吸系统、排泄及生殖系统、动脉与静脉系 统及心脏的结构，进而掌握哺乳类动物内脏形态结构特征。二、教学要求 通过实验使学生掌握家兔的解剖技术， 掌握家兔的外形特征和内部解剖各系统的根本结构特征、 机 能特点。使学生对哺乳动物的根本特征有一更深入的了解和认识。三、实验材料和用具实验材料 : 活家兔 .实验用具 : 解剖剪、 解剖刀、镊子、解剖盘、骨剪 , 注射

43、器及针头、棉花等。四、实验作业,并注明各部位名称。根据解剖观察绘制家兔消化系统、呼吸系统、排泄及生殖系统图第二局部 根底土壤学实验实验一 土壤含水量的测定土壤含水量是研究土壤水分物理性质的一项主要指标。 测定土壤含水量的方法很多， 烘干法是测定 土壤含水量方法中最常用的一种经典方法，测定结果比拟准确可靠。 称取一定的待测土样放在105110度的烘箱中烘烤足够的时间， 土壤中的水分就会变成水汽被排除， 称量干土重后， 其损失的水分重即为 土壤的含水量，通常用占烘干土重的百分数表示。1 仪器用品烘箱、 枯燥器、 天平感量 0.01g 、 铝盒等。2 操作步骤 1 先将铝盒称重，在田间选点，每点取土

44、 10g 左右，分别放入重量的铝盒中，盖好，带回室内称重。(2) 揭开铝盒盖，套在盒下面，放入105110度的烘箱内烘68小时。(3) 把烘干的盛土铝盒取出放入枯燥器中，待冷却后称重(一般冷却时间约20分钟左右。(4) 再将铝盒放入烘箱中烘23小时，取出称重，直至前后两次重量相差不超过O.OIg为止。3结果计算(1) 以烘干土为基数的水分百分数：W(%)= (G1-G2)/(G2-G0) X100(2) 以风干土或自然湿土为基数的水分百分数(通常用于化学分析计算之用)：W(%)= (G1-G2)/(G1-G0) X100式中 W 含水量(%; G0铝盒重(g); G1铝盒十湿土重(g) ; G

45、2 铝盒十烘干 土重(g)。为便于计算和检查，可采用表2.1形式进行记载。表2.1烘干法测定土壤含水量记载表取土取土取土深盒号 盒重盒+湿土盒+干土干土水分含水时间地点度(cm)(g)重(g)重(g)重(g)重(g)量(%)实验二 土壤水分常数的测定吸湿系数的测定仪器用品天平、烘箱、枯燥器、铝盒、10% HzSQ或 15% K2SO4饱和液。二、操作步骤1. 称取通过1mm筛孔的风干土样 5-10克放入重量的铝盒中，并平铺于盒底。2. 将铝盒放入盛有10% H2SO4(或K2SO4饱和液)的枯燥器内的白瓷板上。加盖密封后放在温度恒定 的地方。3. 放置34天后，取出铝盒，盖好枯燥器盖，迅速在天

46、平上称重，记下重量。然后重新将铝盒放回枯燥器中。使其继续吸湿。而后每隔23天称重一次(注意保持枯燥器中的HSQ溶液浓度)，直至恒重为止。4. 将到达恒重的土样置于105110C的烘箱中烘至恒重。按照烘干法测定土壤含水量的计算方法计算出土壤的最大吸湿量。凋萎系数的测定一、实验目的及说明凋萎系数(又称萎蔫系数)指作物开始永久凋萎，并在饱和水气中也不能恢复膨压时的土壤含水量。 此时所含的水分形态为全部吸湿水和局部膜状水， 有局部水仍可被作物吸收， 但因补给极慢， 难以维持 作物正常需水要求而导致作物萎蔫。 不同土壤由于质地、 结构、腐殖质含量的差异， 其萎蔫系数也不同； 不同作物种类和同一作物不同生

47、育阶段其萎蔫系数也有一定的差异。一般凋萎系数至田间持水量之间的土壤含水量都属有效水。 有效水量是指从田间测得的土壤自然含 水量减去该土壤的凋萎系数含水量，即为有效水量。土壤有效水量 % =土壤自然含水量 %凋萎系数 %土壤最大有效水量 %= 田间持水量 %凋萎系数 %二、测定原理凋萎系数的测定一般有两种方法，一是间接测定法；二是直接测定法。一 间接测定法 根据不同土壤质地和水分常数计算求得。通常用最大吸湿水含量乘以一个系数而 得。其系数为 1.34 1.52.0，假设土质偏砂乘以 1.34；壤质乘以 1.5；粘质乘以 2.0。有人建议乘 以 1.5 即可。这种计算法只能求得其近似值，不能反映作

48、物本身的多样性。二 直接测定法 也叫生物测定法。直接用植物生长做试验求出凋萎系数。1. 测定幼苗的凋萎系数 即当幼苗发生永久萎蔫时， 测定其土壤的含水量即为幼苗的凋萎系数。 这种 方法能较准确的反映不同作物的特点，但不能反映作物在不同发育阶段的特殊性。2. 测定作物孕蕾开花阶段的凋萎系数三、测定方法及步骤幼苗法1. 将土样通过2mm孔径的风干土均匀装满烧杯 杯高6 7cm，直径45cm，杯中插入一直径 0.5cm ,长为 8cm 的玻璃管，以便浇水时空气由此排出。每一样品重复4次。2. 浇水或营养液 ，用塞有棉花的漏斗均匀滴加水，浸湿土壤空气可由玻管排出 。3. 准备幼苗 在装土前几天， 选好

49、所需种子 如大麦种子 ，着手开始催芽， 发芽 3 4天后即可使用。4. 种植 在湿润的土表下 2cm处种入56粒已发芽的种子，盖土后称重记载，杯口用厚纸盖住，以 免土表蒸发以后每杯选留 3 株。5. 培育 将杯放在光线充足处防止烈日直射 ，待幼苗生长到与杯口齐平时，杯口用腊纸封住，纸 上有孔，幼苗即可由此长出。纸与杯壁接合处，封上石腊，然后在蜡纸上盖一薄层石英砂，防止土 表蒸发，排气的玻管口用棉花塞上。6. 观察、管理 在生长过程中，每天早、中、晚观察室温和生长情况，并每隔56天称重一次如杯内水分蒸发过多， 可进行第二次灌水。 当第二片叶子长得比第一片叶子较长时， 证明幼苗根已分 布于杯内的整

50、个土体，此时可进行试验也可最后灌一次水 。然后将杯移到没有阳光直射处，直 到第一次凋萎叶子下垂 。当植株出现凋萎后，将杯移入木箱内，经一昼夜观察，如凋萎现象消失，即把杯放回原处，待 凋萎现象再次出现后，再把杯置入箱内， 如此反复观察， 直到植株不能复原，就可认为幼苗已到达 永久凋萎。7. 取样分析 去除石腊封面、土表 2cm 的土层，植株及根系，测定杯中土壤的含水量即为凋萎系数。在分析天平上称取风干土样 5g10g 二份，分别放入重量的小铝盒或称量皿中，称时将盖盖上；放入烘箱内，将盖翻开斜放旁边或盒底。调节烘箱温度至105 110C，连续烘烤8小时在烘烤期间不要随意翻开烘箱，以免影响烘箱内温度

51、升降变化或使土壤吸湿。 8 小时后翻开烘箱，用坩埚钳将盖盖好， 迅速放入枯燥器内冷却， 至室温后称重。 然后再翻开盖， 重新放入烘箱内， 继续烘烤 2 小时， 取出冷却称重。 两次称重到达恒重 即两次称重相差不超过 0.003 克即可。 如未达恒重，那么需反复烘烤，直至恒重为止。然后按最后一次称重，计算其土壤吸湿水含量准确 至小数点后两位 。四、结果计算土壤吸湿水含量%=风干样品重一烘干样品重烘干样品重X 100五、仪器、试剂木箱内放湿锯木末，使箱内水汽饱和、作物种子、温度计；1/1000和1/100天平、小铝盒、烘箱。营养液：2.8克磷酸氢铵NH4H2PO4、3.5克硝酸钾KNO3、5.4克

52、硝酸铵NH4NO3溶于1 升水中。六、作业题1土壤凋萎系数的含义是什么？它与作物吸水有何关系？2. 凋萎系数含水量有哪几种水分形态？其性质如何？3. 测定凋萎系数有几种方法？幼苗法测定凋萎系数的关键问题是什么?实验三田间持水量的测定一、实验目的及说明田间持水量关系到植物的生长发育，是一个很重要的水分常数，也是确定灌水量的重要依据。田间持水量在外界不同水源的作用下的概念是不同的。地下水位浅的时候，下过大雨后，整个土层的全部孔隙都被水充满，到达饱和，此时的土壤水分叫饱和水。降雨停止后，排水沟排除土壤中多余的水分，这样土壤中大孔隙中的水分，因受重力作用向左右及向下移动，孔隙中由毛管力保持在毛细管中的

53、最大水分含量叫毛管持水量，也就是在田间状态下， 高水位土壤自然排水后的含水量，就代表了高水位情况下的田间持水量，也叫最大持水量。在地下水深的地方， 地下水上升不到地面，但下雨或灌溉后，上层土壤也可到达饱和，但不与地下水相接，所以土壤中的重力水首先从大孔隙中消失，较细毛管内靠毛管力保持在土壤中的水分为毛管悬着水，它所含的最大水量， 代表土壤在田间状态下， 经过自然排水而保存在上层土壤中的水分，也叫田间持水量，在数量上包括吸湿水、膜状水和毛管悬着水。 不过它所代表的田间持水量比毛管持水量要小，因此也叫最小持水量。 还可以把它定义为， 在田间自然条件下，地表没有蒸发和蒸腾损失时，土壤所保持的最大持水

54、量，叫做田间最大持水量或田间持水量。二、测定原理和方法基于上面田间持水量的定义和概念，测定田间持水量的方法都是利用灌水或降雨后，土壤被水充分湿润，多余的水分在重力的作用下向下渗漏而排出，这时土壤的水分状况就相当于田间持水量。此时土壤中的水分状态根本上是相对稳定的，处于不流动或实际小不流动的状态，这时的土壤水分对于植物来说是有效水的最高限。地下水埋深大于 3m的土层所保持的主要是毛管悬着水、系真正的田间持水量。 当地下水位浅到测定土层处于毛管支持水范围时，测得的田间持水量就大， 故测定结果必须注明地下水的深度。三、主要仪器木框，正方形，框内面积为1m2,框高2025cm，下端削成楔形，并用白铁皮

55、包成刀刃状，便于插入土内。水桶；铝盒；土钻；铁锹；1/100天平；电热枯燥箱；塑料布正方形，面积约为5m2;青草或干草；盒卷尺；木板等。四、操作步骤在田间选择一块面积为 4m2有代表性的比拟平坦的地块，仔细平整土面。在地块中央插入木框，一般插入10cm深或达犁底层，框内为测试区。在其周围筑一正方形的坚实土硬，埂高40cm、埂顶宽30cm，框与土埂间为保护区。在测试区附近挖一土壤剖面，观察土壤剖面特征，按发生层次在剖面壁采样测定各层土壤自然含水量、容量和比重。根据测得的土壤含水量算出待测土层约1米左右中的总贮水量，沉着重和比重的结果算出待测土层中孔隙总容积，从中减去现有的总贮水量，求出待测土层全部孔隙为水充满所需补充灌入的水量。为了保证土壤湿透并到达预测深度，实际灌水量将为计算出的水量的1.5倍。按下式计算测试区和保护区的灌水量：Q=H aWx dyX Sx h式中 Q灌水量m3a土壤饱和含水量%W土壤自然