实验二、DNA的原位显示—Feulgen染色法目的要求1、_第1页
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1、FeulgenFeulgen反应的一般步骤：反应的一般步骤： 1 1、材料准备：取一洋葱鳞茎，置于盛满水的小烧、材料准备：取一洋葱鳞茎，置于盛满水的小烧杯上使其长出新根。待根尖长杯上使其长出新根。待根尖长2cm2cm左右时，于上左右时，于上午午9 9时剪下根尖用时剪下根尖用CarnoyCarnoy固定液固定、保存。固定液固定、保存。（固定的目的是防止细胞死后变化，保持胞内固固定的目的是防止细胞死后变化，保持胞内固有结构与状态有结构与状态）2 2、水解：从冰箱取出预先准备好的洋葱根尖，用、水解：从冰箱取出预先准备好的洋葱根尖，用清水洗清水洗3 3次，每次次，每次2min2min，换，换1M 1M

2、 HClHCl洗一次，倾去，洗一次，倾去，换入预热换入预热6060的的1M 1M HClHCl，放入，放入恒温水浴锅中在恒温水浴锅中在60600.50.5下水解下水解8-15min8-15min（视材料而定）。（视材料而定）。3 3、吸去热、吸去热1M 1M HClHCl，换入冷，换入冷1M 1M HClHCl洗一次，用蒸馏洗一次，用蒸馏水漂洗水漂洗3 3次，每次次，每次2min2min。4 4、SchiffSchiff液黑暗条件下染色液黑暗条件下染色30-50min30-50min（避光避光: :因为因为生成不稳定的物质，见光很容易分生成不稳定的物质，见光很容易分解解）。）。5 5、用、用新

3、配制新配制的亚硫酸氢钠溶液洗的亚硫酸氢钠溶液洗3 3次，每次次，每次约约5min5min。（。（洗去无色品红，在自然条件下洗去无色品红，在自然条件下易还原为碱性品红易还原为碱性品红）6 6、用清水洗、用清水洗2 2次，每次次，每次2min2min。7 7、取一根尖置于载玻片上，切下、取一根尖置于载玻片上，切下生长区部位生长区部位（染成紫红色），加一滴清水或（染成紫红色），加一滴清水或4.5%4.5%醋酸醋酸水溶液，加盖玻片，轻压。水溶液，加盖玻片，轻压。8 8、镜检：、镜检：细胞内细胞内DNADNA的部位呈紫红色的部位呈紫红色。9 9、绘图、绘图水解是本实验成败关键之一。水解时间和温度水解是本实验成败关键之一。水解时间和温度一定要合适，如果温度过高或时间过长，造成一定要合适，如果温度过高或时间过长，造成水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，都不能呈现颜色反应。都不能呈现颜色反应。 用用SchiffSchiff试剂染色前，蒸馏水的残留不宜过多，试剂染色前，蒸馏水的残留不宜过多，否则会使染色剂浓度降低。否则会使染色剂浓度降低。漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每

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