实验二细菌的人工培养

1、西安医学院西安医学院病原生物学与免疫学教研室病原生物学与免疫学教研室Xian edical University微免教研室微免教研室目的要求目的要求掌握常用培养基的细菌接种法。掌握常用培养基的细菌接种法。掌握常用细菌生化反应的原理、检查方法。掌握常用细菌生化反应的原理、检查方法。熟悉常用培养基的种类。熟悉常用培养基的种类。了解细菌培养基的制备原则及其基本程序。了解细菌培养基的制备原则及其基本程序。了解细菌培养物的各种性状。了解细菌培养物的各种性状。Xian edical University微免教研室微免教研室实验内容实验内容一、细菌的一、细菌的培养技术（录像）培养技术（录像）二、二、培养基的

2、制备、种类及细菌的生长现象培养基的制备、种类及细菌的生长现象三、三、细菌的接种法细菌的接种法四、四、细菌的生化反应细菌的生化反应Xian edical University微免教研室微免教研室思考讨论思考讨论何谓培养基？其制备原则是什么？常用培养基何谓培养基？其制备原则是什么？常用培养基的种类及其用途？的种类及其用途？用什么方法检查细菌的动力？有何实际意义？用什么方法检查细菌的动力？有何实际意义？Xian edical University微免教研室微免教研室1 1、记录细菌的生长现象。记录细菌的生长现象。2 2、记录并分析、记录并分析细菌的生化反应细菌的生化反应。Xian edical Un

3、iversity微免教研室微免教研室 培养基的制备原则培养基的制备原则二二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象培养基的制备、种类及细菌的生长现象1 1、充足的营养物质；充足的营养物质；2 2、合适的酸碱度；、合适的酸碱度；3 3、必须经过灭菌处理。、必须经过灭菌处理。 培养基的制备过程培养基的制备过程配料、溶化、测定及矫正配料、溶化、测定及矫正pHpH、过滤、分装、灭菌备、过滤、分装、灭菌备用用Xian edical University微免教研室微免教研室 培养基的种类（性状）培养基的种类（性状）二二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象培养基的制备、种类及细菌的生长现象液体培养基、半固体培养

4、基、固体培养基液体培养基、半固体培养基、固体培养基 培养基的种类（用途）培养基的种类（用途）1 1、基础培养基：如肉汤培养基、基础培养基：如肉汤培养基2 2、营养培养基：如血平板、营养培养基：如血平板3 3、鉴别培养基：如糖发酵管、鉴别培养基：如糖发酵管4 4、选择培养基：如、选择培养基：如SSSS培养基培养基5 5、厌氧培养基：如、厌氧培养基：如庖庖肉培养基肉培养基Xian edical University微免教研室微免教研室 细菌的生长现象细菌的生长现象二二、培养基的制备、种类及细菌的生长现象培养基的制备、种类及细菌的生长现象1 1、液体培养基：混浊生长、沉淀生长、菌膜生长、液体培养基：

5、混浊生长、沉淀生长、菌膜生长2 2、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长、半固体培养基：扩散生长、非扩散生长3 3、固体培养基：菌落、菌苔、固体培养基：菌落、菌苔Xian edical University微免教研室微免教研室三三、细菌的接种法细菌的接种法琼脂平板培养基的分区划线接种法琼脂平板培养基的分区划线接种法琼脂斜面培养基的接种法琼脂斜面培养基的接种法半固体培养基接种法半固体培养基接种法液体培养基接种法液体培养基接种法Xian edical University微免教研室微免教研室三三、细菌的接种法细菌的接种法琼脂平板培养基的分区划线接种法琼脂平板培养基的分区划线接种法琼脂斜面培养基的接种

6、法琼脂斜面培养基的接种法半固体培养基接种法半固体培养基接种法液体培养基接种法液体培养基接种法Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 各种细菌具有的酶不完全相同，对营养物各种细菌具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力不一致，代谢产物有别。据质的分解能力不一致，代谢产物有别。据此特点，利用生物化学方法来鉴别不同细此特点，利用生物化学方法来鉴别不同细菌，称为细菌的生化反应。菌，称为细菌的生化反应。 Xian edical University微免教研室微免教研室v原理：原理： 细菌细菌 糖（醇）糖（醇）有机酸，有机酸，pHpH（指示剂呈酸

7、性反应）指示剂呈酸性反应） 甲酸解氢酶甲酸解氢酶 甲酸甲酸倒置小试管中有气泡）倒置小试管中有气泡）v方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖等发酵管，乳糖等发酵管，3737培养培养18h18h24h24h观察。观察。v结果：结果： 糖发酵试验糖发酵试验四四、细菌的生化反应细菌的生化反应Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 糖发酵试验糖发酵试验Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 靛基质（吲哚）试验靛基质（吲哚）试验v

8、原理：原理： 细菌细菌 吲哚试剂吲哚试剂 色氨酸色氨酸吲哚吲哚v方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于蛋白方法：大肠埃希菌、伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水，胨水，3737培养培养18h18h24h24h后，加入吲哚试剂观察。后，加入吲哚试剂观察。v结果：结果：Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 靛基质（吲哚）试验靛基质（吲哚）试验Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 硫化氢试验硫化氢试验v原理：原理： 细菌细菌v含硫氨基酸含硫氨基酸H H2 2S+S+FeSOFeSO4

9、4（黑色）（黑色）v方法：大肠埃希菌、肖氏沙门菌分别接种于硫方法：大肠埃希菌、肖氏沙门菌分别接种于硫酸亚铁培养基，酸亚铁培养基，3737培养培养18h18h24h24h观察。观察。v结果：结果：Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 硫化氢试验硫化氢试验Xian edical University微免教研室微免教研室vI - I - 吲哚（吲哚（indolindol）试验）试验vM - M - 甲基红（甲基红（methyl redmethyl red）试验）试验vVi- VPVi- VP（Voges-ProskauerVoges-Pr

10、oskauer）试验）试验vC - C - 枸橼酸盐利用（枸橼酸盐利用（citrate utilizationcitrate utilization）试验）试验四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 IMViC试验试验Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 葡萄糖葡萄糖 丙酮酸丙酮酸 乙酰甲基甲醇（乙酰甲基甲醇（pHpH5.45.4） 混合酸（混合酸（ pHpH4.54.5） 甲基红指示剂甲基红指示剂 KOH+KOH+空气空气 丁二醇丁二醇 双乙酰双乙酰 - -萘酚萘酚+ +肌酸肌酸 红色化合物红色化合物 红色红色 （VPVP试验阳性）试

11、验阳性） （甲基红试验阳性）（甲基红试验阳性） VPVP试验与甲基红试验原理试验与甲基红试验原理Xian edical University微免教研室微免教研室v方法：方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水，蛋白胨水，3737培养培养18h18h24h24h后，按每毫升培养后，按每毫升培养基加入含基加入含0.3%0.3%肌酸或肌酐的肌酸或肌酐的0.1ml 40% KOH0.1ml 40% KOH溶液，溶液，48485050水浴水浴2h2h或或3737 4h4h，充分摇动后观察，充分摇动后观察。v方法：方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖大肠

12、埃希菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水，蛋白胨水，3737培养培养18h18h24h24h后，滴加甲基红指后，滴加甲基红指示剂观察结果。示剂观察结果。四四、细菌的生化反应细菌的生化反应VP试验试验甲基红试验甲基红试验Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验v原理：原理： 细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸细菌利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基橼酸盐作为唯一碳源时，可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵上生长，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，并分解铵盐生成氨

13、，培养基呈碱性反应。盐生成氨，培养基呈碱性反应。v方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于枸橼方法：大肠埃希菌、产气杆菌分别接种于枸橼酸盐培养基，酸盐培养基，3737培养培养18h18h24h24h观察。观察。v结果：结果：Xian edical University微免教研室微免教研室v大肠埃希菌大肠埃希菌 + + - - + + - - v产气杆菌产气杆菌 - - + + - - + + 四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 IMViC试验试验Xian edical University微免教研室微免教研室四四、细菌的生化反应细菌的生化反应 尿素酶试验尿素酶试验v原理：原理： 细菌若有尿素酶，能分解培养基中的尿细菌若有