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文档简介

1、大孔吸附树脂分离纯化地黄中梓醇工艺的研究论文作者:张秀丽报告人:江南报告时间:2018.4本论文利用大孔吸附树脂分离提取地黄中梓醇。以地黄粗提液中梓醇含量为指标,高效液相色谱(HPLC)为含量测定方法,考察9种不同极性大孔吸附树脂 对梓醇的吸附和解吸附性能, 筛选出最佳树脂D101 进行分离实验。结果表明,D101 大孔吸附树脂的静态吸附容量为69. 2mg /g 干树脂 , 其吸附等温线符合Langmuir 和 F reundlich 吸附等温式。采用5%乙醇作为洗脱剂, 洗脱液减压浓缩后进行硅胶柱层析分离, 氯仿、甲醇梯度洗脱得到梓醇单体, 纯度达 90% 以上 ,梓醇得率为6%。本论文的

2、主要内容包括:1 地黄提取液的制备;2.梓醇含量的测定;3.静态吸附解吸实验;4.吸附等温线实验取 D 101、 H PD 100 型大孔吸附树脂适量(相当于 1g 干树脂 ), 处理后置于小锥形瓶内, 取地黄粗提液倍比稀释后, 各取20m l 加入锥形瓶中, 于室温下放入120r /min 的摇床中充分振荡, 测其平衡浓度,以平衡浓度和吸附量为横纵坐标绘制吸附等温线;5.吸附动力学实验取 D 101、H PD 100型大孔吸附树脂适量(相当于1g干树脂),处理后置于小锥形瓶,取 20ml 地黄粗提液加入锥形瓶内, 置于摇床恒温振荡18h, 在 0. 5、 1、 2、 4、 8、18h 取样测

3、定 , 计算树脂对梓醇的吸附量, 绘制吸附动力学曲线。6.动态吸附解吸实验准确称取D101 大孔吸附树脂适量(相当于5g 干树脂 ), 预处理后湿法装于 1.2cmx40 cm 小层析柱内, 用一定浓度的地黄粗提液通入柱中, 控制吸附条件 , 定时接收流出液, 贯穿后 , 依次用 5 倍柱体积水、5% 乙醇、10%乙醇、20%乙醇、 40%乙醇、60%乙醇、80% 乙醇、 95% 乙醇洗脱, 对上样液、残余液及洗脱液定容取样, 0. 22Lm 微孔滤膜过滤, HPLC 测定峰面积, 计算对应梓醇含量,确定最佳洗脱溶剂。本论文与本人课题相似,虽然梓醇的得率较低,但纯度很高,这也提示说如果要得到高

4、纯度小批量的梓醇可以选择最后的纯化工艺为硅胶层析。总结其实验步骤的工艺流程图为:怫fe频忆像一城)1参懦浸泡一次合做液川川保树脂吸附一柱层析图5梓醇的分离纯化工艺流程图F ig 5 Separation and pur ification p roc csschart ofcata 明。1生地黄中梓醇纯化工艺优选论文作者:杨菁报告人:江南 报告时间:2014.12.12本文采用高效液相色谱法检测梓醇含量。以梓醇含量为指标,比较不同型号的大孔树脂、活性炭对梓醇的分离效果,再对所含梓醇的部分应用不同的葡聚糖 凝胶进行分离。结果:优选确定的工艺为:用15%活性炭对梓醇粗提物吸附后, 活性炭用20%乙

5、醇洗脱,将收集洗脱液浓缩后用葡聚糖凝胶G-15进行分离,所得产物中梓醇含量在 85%以上。梓醇化学性质不稳定,易受酸碱等条件影响,这为梓醇的纯化增加了难度, 本文在地黄中梓醇提取工艺条件优化的基础上,应用活性炭及葡聚糖凝胶对地黄 醇提取物进行分离,以期获得纯度较高的梓醇。本课题的主要内容包括:1.梓醇粗提物的制备取生地黄 500 g适当粉碎,加入12倍量95%乙醇,回流提取 2次,每次1h;合并两次滤液,减压浓缩至 500m L,过滤,得地黄醇提物备用; 2.量取100 m L样品,向其中加入15 g粉末状活性炭,搅拌,静置2 h,滤过, 收集滤液,高效液相分别检测滤液和活性炭吸附前药液中梓醇

6、含量。实验结果可知,活性炭对梓醇具有较强的吸附能力, 平均吸附量为19. 9 mg /g。根据活性炭 特点,选择不同浓度的乙醇及水对活性炭进行洗脱。取 200 m L样品,向其中 加入30 g活性炭,搅拌,静置2 h,滤过,收集活性炭阴干,用1 000 m L水、 1 000 m L 10% 乙醇、1 000 m L 20% 乙醇、1 000m L 40% 乙醇、1 000 m L 95% 乙醇洗脱,分别收集洗脱液,减压浓缩至体积为 200 m L,薄层跟踪检测。实验 结果提示10%20%乙醇洗脱效果较好,收率在 80%左右,梓醇纯度约为45% , 采用活性炭吸附可作为梓醇的粗分离手段。3.活

7、性碳处理后,选用不同型号的葡聚糖凝胶对梓醇进行分离,取10 m L 样品,分别缓慢加到葡聚糖凝胶G-15、葡聚糖凝胶G-25、葡聚糖凝胶LH20凝胶柱中,打开活塞,当药液面接近胶面时加水洗脱,采用部分自动收集器进行收集,流速为0. 5 m L min/min ,每 10 min 收集一管。薄层跟踪检测梓醇。通过薄层跟踪对3 种不同型号的葡聚糖凝胶对梓醇的分离效果进行比较,由试验结果可见葡聚糖凝胶G-25、葡聚糖凝胶 LH20 对梓醇的分离效果不理想,而葡聚糖凝胶G-15 能将梓醇与其他成分实现较好的分离。结果表明葡聚糖凝胶G-15 分离效果好,收率高达50%以上,纯度能达到85% 以上。 4.

8、 梓醇分离纯化验证试验根据以上试验结果,采用活性炭吸附、20% 乙醇洗脱及G15 分离的方法,对梓醇粗提物进行了分离纯化。生地中梓醇富集纯化工艺路线及降血糖活性功能评价论文作者:蒲东报告人:江南报告时间:2014.11.07本文对梓醇的富集纯化工艺进行了初步的研究,并对生地及梓醇进行了降血糖活性的功能性评价。 本课题的主要研究内容:1.在建立梓醇含量测定的方法基础上,以梓醇得率为考察指标,选用正交实验筛选出梓醇的最佳提取工艺;2.通过对D101、 HPD600等多种吸附材料进行比较,选择吸附量最大的吸附材料采取乙醇回流的方式对筛选出的吸附材料进行洗脱;3.应用高血糖小鼠模型对提取出的梓醇进行降

9、糖活性等的研究对提取出的梓醇进行急性毒性实验。 通过以上实验,得到以下结果:1.梓醇的最佳提取工艺为10倍量乙醇回流提取两次,每次1h, 2应用高效液相色谱仪检测 D101、HPD600等十余种树脂吸附后 剩余梓醇量,选出活性C为实验用吸附材料,解吸方式为乙醇回流两次,每次2h, 结果显示有60%梓醇能被洗脱下来,剩余无法解吸,推测活性C是为不可逆吸附; 3.动物实验结果表明,梓醇能明显降低四氧嚓睫致糖尿病小鼠的血糖水平,提高糖尿病小鼠的糖耐量,运用生化试剂盒对小鼠血清进行检测,结果表明梓醇能明显提高糖尿病小鼠血液抗氧化能力,且呈剂量依赖关系。该篇论文结构严谨,实验路线清晰,为本人论文-地黄叶

10、中梓醇的纯化工艺研究提供了思路。梓醇的化学性质不稳定,对敏感,且地黄中的环烯醚菇昔类物质大都结构类似,给分离造成很大麻烦,常规的纯化分离手段分离不易分开。目前较为常用的方法是大孔树脂分离,但大孔树脂吸附量较小,容易造成吸附量与树脂量比例过小,造成成本较大,从而限制了梓醇的工业开发。但在本实验中,采用活性作为梓醇的吸附剂,不仅吸附量大,且操作简单,解吸简便活性的造价也较低,易于应用于工业化生产但应用活性作为吸附材料,梓醇的损失较大,达到,因此,迫切需要需找一种更为简便,损失量更小的纯化分离手段。在本实验中,利用实验制备的生地浸膏及梓醇研究了对高血糖小鼠体重、血糖水平、血清SOD 活性、 AR 活

11、性、 MDA 含量的影响。该实验通过建立高血糖小鼠模型,并分别灌胃阳性药物和试验制备的生地浸膏和不同剂量的梓醇,对比各组血糖水平及小鼠血清生化指标。结果显示,生地的降血糖效果明显,同时在提高小鼠血液抗氧化能力方面作用显著,这为下一步糖尿病并发症的药物研发提供了一定的实验基础。豨莶草抗关节炎作用的研究论文作者:蒋芳萍报告人 : 江南 报告时间:2014.12.20本论文通过小鼠急性损伤性关节炎模型、小鼠急性痛风性关节炎模型、大鼠急性痛风性关节炎模型、单克隆抗体组合诱导类风湿关节炎小鼠模型等四种动物模型研究了豨莶草提取物的抗关节炎作用。结果表明:豨莶草乙醇提取物的抗关节炎作用优于豨莶草水提取物;豨

12、莶草乙醇提取物能显著降低这四种模型动物的关节肿胀度,能明显降低急性损伤性关节炎小鼠组织中 IL-1% Rantes IL-10水 平和类风湿关节炎小鼠血清或组织中 IL-1 0、IL-6、IL-17和MMP-3水平,显著 升高急性痛风性关节炎小鼠组织中IL-4 水平和急性痛风性关节炎大鼠血清中IL-10 水平,提示豨莶草提取物可能是通过调节与关节炎相关的一些炎症因子而起作用。小鼠急性毒性试验结果显示豨莶草乙醇提取物毒性明显低于豨莶草水提取物。本论文还用正交设计法优化了豨莶草乙醇提取工艺,得到的最优工艺为:用8倍量的70%乙醇提取3次,提取时间依次为2.5h、 1.0h 和 1.0h。本文对豨签

13、草提取物的药效学进行了全面的评价,2010 版中国药典中也以奇壬醇作为豨签草提取物中的有效成分,但中药提取物的作用往往是很多或一类物质综合作用的结果,所以, 该课题如果继续做下去是不是可以通过柱层析来分离其中同类物质进行药效学研究,以期提高疗效或对其他疾病有疗效。关节炎目前尚无特效药及特效疗法,主要以对症减轻疼痛,控制病情,延缓关节退行性变化。西药治疗不良反应多,价格昂贵,患者难以接受,中医中药和天然药物有效成分具有疗效可靠、价格便宜、不良反应少等优点,治疗关节炎这种慢性疾病可能比西药更具有优势。但中药及天然药物有效成分复杂,其治疗关节炎的作用机理机制尚未完全明确,有待进一步更深的研究。期待开发出更多安全有效的治疗关节炎的中药新药。待考察的炎症因子的筛选也为本人论文即将要进行的急性肾衰竭所要考察的炎症因子的种类提供了参考。白细胞介素-4( IL-4) 是小鼠巨噬细胞趋化因子,是与急性痛风性关节炎有关的抗炎性白细胞介素类的主要细胞因子之一,主要由T细胞分泌,能减少IL-1和TNF-a的分泌,抑制关节软骨的腐蚀破坏。IL-4可以促

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