金荞麦对鸭禽流感疫苗免疫效果影响.docx

1、金养麦对鸭禽流感疫苗免疫效果影响阮涌I,嵇辛勤2,夏先林I,文明心，李世静I,刘廷江I,陈佳琪（1.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025；2.贵州省动物疫病研究室.贵州贵阳550003）摘要：一直以来，鸭群对禽流感疫苗免疫应答效果欠佳，为解决该现状，利用金养麦具有增强免疫力、抗癌和抑菌的功效，按照1%、2%、3%的重量比将金养麦混合于三穗麻鸭日根中c于不同日龄采血后分别采用血凝抑制试验、MTT法和ELISA方法，检测禽流感抗体效价、T淋巴细胞转化效率、IFN-）和IL-2水平。结果显示，金养麦能够促进禽流感疫苗对鸭群的体液免疫和细胞免疫水平。关键词：三穗麻鸭；金养麦；禽流感疫苗；免疫中图

2、分类号：S852.43文献标识码：A文章编号：1004-874X（2015）13-0119-04EffectsofFago-conimmuneeffectsofavianinfluenzavaccineforducksRUANYong1,JIXin-qin12,XIAXian-lin1,WENMing-2,LIShi-jing,LIUTing-jiang1,CHENJia-qi1(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversityGuiyang550025,China;2.LaboratoryforAnimalDiseaseofGuizhou,Guiyang5

3、50003,China)Abstract：Inordertosolvethesituationofineffectivenessofavianinfluenzavaccineforducks,1%,2%,3%weightofFago-cwasmixedinSan-Suiduckdietsseparately.Fago-chasthefunctionsofenhancingimmunity,anti-cancerandantibacterial.HI,MTTandELISAwereusedtodetectavianinfluenzaantibodytiter,Tlymphocytetransfo

4、rmationefficiency,IFN-7andIL-2levels,afterducksbloodsampleswerecollectedondifferentdays.TheresultsshowedthatFago-ccouldpromotehumoralandcellularimmunitylevelofavianinfluenzavaccineforducks.Keywords：San-Suiduck;Fago-c;avianinfluenzavaccine;immune近年来，贵州省三穗县大力发展养鸭业，随着养殖规模不断扩大，疾病防控更加重要卜2】。据有关文献报道口水禽作为禽流

5、感病毒的储存及变异宿主，对禽流感疫苗的免疫应答效果一直欠佳，为解决该问题，鸭用免疫增强剂的筛选逐步引起科研工作者的重视。金养麦作为我国传统的中药材，具有增强免疫力、抗氧化、抗肿瘤和抗菌等功效。同时还有文献指出，将金养麦代替10%14%的全价日粮喂猪，可提高猪肉的氨基酸含量，同时减低胆固醇含量，说明金养麦在畜牧养殖方面具备良好应用前收稿日期：2014-09-27基金项目：贵州省科技计划项目（黔科合计省合20137004号,黔科合重大专项字20126004号）作者简介：阮涌（1987-）,男，苗族，硕士，助理实验师，E-mail：ruan_yong通讯作者：嵇辛勤（1957-）,女，教授，E-ma

6、il：jxq972景，但其对水禽免疫功能的影响还未见相关文献报道。为此，本试验将金养麦作为饲料添加剂按一定比例混合于鸭日粮中，通过检测鸭群注射禽流感疫苗后体液和细胞免疫水平，分析金养麦对鸭免疫功能的影响，从而为鸭专用免疫增强剂的筛选工作奠定基础。1 材料与方法1.1试验材料试验于贵州省黔东南州青酒集团养殖基地进行。试验动物为三穗麻鸭，共175只，随机平均分为5组（阴性对照组、疫苗对照组、金养麦I组、金养麦II组、金养麦m组）；育雏日粮为怀化正大饲料有限公司小鸭料，之后采用常规自配饲料，其中各金养麦试验组在自配饲料基础上分别按照I%、2%、3%的重量比添加金养麦干燥粉末，混合均勾后保存备用；每组

7、鸭的饲养管理和条件一致。试剂：H5N1亚型禽流感病毒（Re-6株）灭活疫苗（批号2012015）,购自青岛易邦生物工程有限公司；金养麦粉末，由养殖场采集金养麦植株晒干磨碎；禽流感HI抗原（批号201206）,购自哈尔滨维科生物技术开发公司；MTT试剂，购于Solarbio公司；检测鸭IFN-7和鸭IL-2试剂盒，均购于上海浩本生物科技有限公司。1.2试验方法空白对照组只注射等量生理盐水，常规疫苗组和各金养麦试验组在10、24日龄按照常规剂量（0.5mL/只）注射禽流感灭活疫苗；育雏期各组均采用正大饲料小鸭料，其中，金养麦I组、II组、DI组分别在正大饲料小鸭料中按1%、2%、3%重量比添加金养

8、麦，育雏期结束后，金养麦I组、II组、m组分别饲喂含1%、2%、3%金养麦重量比的自配饲料，常规疫苗组和空白对照组同期饲喂不含金养麦的自配饲料。在10、24、38、52、66日龄每组随机选取3只鸭无菌抽取血液，分装于肝素钠抗凝管和非抗凝管各5.0mL,肝素钠抗凝管血液用于MTT试验，不抗凝血液收集后低速离心分离血清低温保存。检测数据采用Excel和SPSS16.0软件处理。2 结果与分析2.1金养麦对鸭禽流感抗体效价的影响采用HI试验，对试验鸭血清进行禽流感抗体效价检测，结果见图1。由图1可知，在10日龄未免疫时，均未产生禽流感抗体效价，符合实验要求；在第52日龄时，金养麦组禽流感抗体效价达到

9、峰值,且金养麦口组（2%）,与疫苗对照组差异显著；在66日龄时，各组间禽流感抗体效价差异不显著。表86428642S空白对照组D金养麦I组昌金葬麦in组1024385266日龄图1愈流感抗体效价动态变化明，金养麦U组能够促进鸭群对禽流感疫苗的应答水平。2.2金养麦对鸭IFN-y水平的影响采用ELISA试剂盒，将低温保存血清平衡至室温，严格按照试剂盒说明书操作步骤进行检测，结果见图2O由图2可知，在10-52日龄，各组差异均不显著，但金养麦II组（2%）IFN-含量整体呈现较高水平；在免疫后66日龄，金养麦U组（2%）与疫苗对照组差异显著。表明金养麦在一定程度上可提高鸭IFN-）水平。10243

10、85266日龄图2鸭IFN-y水平动态变化1024385266日龄图2鸭IFN-y水平动态变化0.80.6a0.40.20金葬麦对鸭T淋巴细胞转化效率的影响收集当天新鲜血液，采用MTT法检测鸭T淋巴细胞转化效率。检测结果见图3O由图3可知，在免疫后24日龄，金养麦I组与疫苗对照组差异显著，金养麦II组、DI组与疫苗对照组差异极显著；在免疫后38日龄，金养麦I组、II组与疫苗对照组差异极显著，金养麦HI组与疫苗对照组差异显著；在免疫后52日龄，各金养麦组与疫苗对照组差异极显著；在免疫后66日龄，金养麦II组、IH组与疫苗对照组差异极显著。表明金养麦可提高鸭T淋巴细胞转化水平。2.3 金养麦对鸭I

11、L-2水平的影响采用ELISA试剂盒，将低温保存血清平衡至室温，严格按照试剂盒说明书进行检测，结果见图4。由图4可知，在免疫后24日龄，各金养麦组均与疫苗对照组差异极显著，在免疫后38日龄各金养麦组IL-2水平均低于疫苗对照组，且与空白对照组无显著差异；在免疫后52日龄各组差异不显著，但IL-2水平均高于疫苗对照组；在免疫后66日龄，各组差图3鸭T淋巴细胞的转化效率图3鸭T淋巴细胞的转化效率一1-=生与芸空白对照组10套荟歪言芸芸至-荟一芸13疫苗对照组臼金养麦I组（3金养麦II组243852日龄图4鸭IL-2水平动态变化一芸ii一芸g-一一一g=_芸标易餐易务多三三-二&一=_=一|云_一?

12、&_=!_=三_!_芸芫_ta金养麦m组66异均不显著。表明金养麦配合饲料能够在鸭第24日龄促进IL-2水平的分泌。3 结论与讨论水禽作为禽流感病毒的主要储存宿主，一直以来对禽流感疫苗免疫应答效果欠佳。针对该现状，本试验选用具有抗癌抑菌和增强免疫功效的中药材金葬麦B9】，将其磨成粉末添加于鸭日常饲料中，严格按照贵州省三穗县禽流感疫苗免疫程序，实时监测鸭群禽流感抗体效价、T淋巴细胞转化效率、IFN-7水平动态变化及IL-2水平动态变化。结果显示，52日龄时金养麦口组禽流感抗体效价与疫苗对照组差异显著；66日龄时金养麦D组IFN-7水平与疫苗对照组差异显著；24日龄时金养麦I、U、DI组IL-2水

13、平均与疫苗对照组差异极显著；24、38、52日龄时，金养麦I、U、ID组T淋巴细胞转化效率均与疫苗对照组呈现显著或极显著差异，因此，金养麦试验组禽流感抗体效价整体高于疫苗对照组。本试验结果表明，金弄麦能够促进鸭群禽流感抗体的效价，而抗体的分泌与效应B细胞密切相关I,因此，金养麦可以有效诱导机体体液免疫；IFN-7是一组具有多种功能活性的蛋白质，是由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子，对同种细胞具有广谱的抗病毒、影响细胞生长、分化、免疫功能等多种生物活性，也与抗体的产生密切相关本试验中，金养麦对鸭IFN-7水平的促进效果缓慢，但于24-52日龄各金养麦试验组IFN-7水平与疫苗对照组相比仍呈现逐步

14、升高的趋势，且在52日龄时各金养麦试验组IFN-）水平高于疫苗对照组，原因可能是由于鸭群自身对禽流感疫苗免疫应答水平较低所致IL-2又称T细胞生长因子，可促进T细胞的增殖，也参与抗体反应，是机体调控免疫应答的重要细胞因子【。本试验中，在24日龄时L-2水平显著升高，而疫苗对照组IL-2水平处于最低水平,因此，金养麦在疫苗注射初期能够促进鸭IL-2的分泌，T淋巴细胞转化效率与细胞的分化水平呈正相关，是反映细胞免疫功能强弱的重要指标在24日龄后金养麦试验组T淋巴细胞转化效率始终高于疫苗对照组，说明金养麦能够促进鸭群T淋巴细胞的增殖因此，金养麦能够有效诱导机体细胞免疫和体液免疫，同时还能够有效促进禽

15、流感疫苗对鸭群的免疫，为今后免疫增强剂的筛选奠定基础。参考文献：1 吴道科.三穗麻鸭有了深加工企业N.贵州日报，2009-03-18(2).2 道科,代光.三穗多举措做大做强三例鸭：N.经济信息时报，2009-03-04(3).3 AdamsSC,XingZ,LiJ,etal.Immune-relatedgeneexpressioninresponsetoHl1N9lowpathogenicavianinfluenzavirusinfectioninchickenandPekinduckperipheralbloodmononuclearcells_j.Molecularimmunology.

16、2009.46(8):1744-1749.4 王慧影，何大乾.水禽是流感病毒巨大的储存库，隐蔽性大、散毒途径广而快，水源成媒介一业界上下要警惕水禽流感巨大“隐性”侵害J.中国动物保健，2007(9)：87-89.5 盛华刚，朱立俏，林桂涛.金养麦的化学成分与药理作用研究进展J.西北药学杂志，2011,26(2):156.6 邓蓉，向清华，王安娜，等.野生金养麦的营养成分及其饲喂对猪肉品质的影响J.贵州农业科学，2012,40(1)：114-116.7 WebsterR,HulseD.ControllingavianfluatthesourceJ.Nature,2005,435(7041)：41

17、5-416.8：乔红杰，丑贵平，李春玲.金养麦根提取物对鸡牌淋巴细胞活性影响的血清药理学研究JJ.动物医学进展,2010,31(3):44-48.9王继永，王元忠，曾燕，等.抗癌新药金养麦中微虽元素的光谱测定J.光谱学与光谱分析，2011,31(1):253-255.10JBaiL,DengS,RebouletR,etal.NaturalkillerT(NKT)-B-ceilinteractionspromoteprolongedantibodyresponsesandlong-termmemorytopneumococcalcapsularpolysaccharidesJ.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2013,110(40)：16097-16102.11 刘