鸭禽流感疫苗免疫程序研究报告.docx

1、第53卷第21期2014年11月湖北农业科学HubeiAgriculturalSciences鸭禽流感疫苗免疫程序研究报告Hi杨峻，罗青平，艾地云，罗玲，王红琳，张蓉蓉，温国元，张腾飞，汪宏才，邵华斌(湖北省农科院畜牧兽医研究所/动物胚胎工程及分子育种湖北省改点实验室，武汉430064)播要：为了科学制定鸭的禽流感疫苗免疫程序，进行了以下三方面的试殴：不同品种维格母源抗体消长带况测定。姑果表明，57日龄雏鸭AI-HI抗体可维持较高水平,15-17日龄下降至4.01og2以下。疫苗首免后抗体检剥。结果表明，鸭首次免疫后2周可测出AI-HI扰体，4周时达到高峰；抗体水平持续4周后开始下降。肉鸭免疫

2、一次抗体水平差异大，不能完全预防禽流感的发生。肉种鸭及妥种曲免疫程序及抗体消长规律的测定。结果表明,7-14日龄初免，60日龄二次免疫和120日龄加强免疫(三次免疫)，种鸭的AI-HI抗体水平最高分别可达到91og2Jllog2,二次免疫后8个月其AI-HI平均抗体水平为5.6【og2,三次免疫后10个月其AI-HI平均抗体水平为7.6log2以上。关键词：鸭；禽流感；灭活疫苗；免疫程序中图分类号：S859.79；S858.32文献标识码：A文童编号：0439-8114(2014)21-5213-04DOLlO.l4088/ki.issn0439-8114.2014.21.042ImmuneP

3、rocedureofAvianinFluenzaVaccineforDuckYANGJun,LUOQing-ping,AlDi-yun,LUOLing,WANGHong-Un,ZHANGRoi-rong.WENGuo-yuan,ZHANGTeng-fei,WANGHong-cai,SHAOHua-bin(InstituteofAnima)andVeterinaryScience,HubeiAcademyofAgriculturalSciences/HubciKeyLaboratoryofAnimalEmbryoandMolecularBreeding,Wuhan430064,China)Abs

4、tract；Inordertoscientificallymaketheimmuneprocedureofavianinfluenzavaccineforduck,threetestsincludingthedetectionofthevarietyofmaternalantibodylevelsindifferentbreeds,theantibodydetectionafterfirstimmunization,andtherelationshipofimmuneprocedureandantibodylevelsvarietyweremade.Theresultsshowedthatth

5、eAI-HIantibodylevelsof1weekoldduckswererelativehigher,andthendroppedto4log2orevenlowerat15to17daysold.TTieAI-HIantibodyinduckswasdetectedat2weeksafterfirstimmunization,andantibodylevelreachedpeakatfourweeksafterfirstimmunization(4.81og2).Theantibodylevelwasstable4weeksandthenbegantodrop.Theantibodyl

6、evelsinmeatduckshadgreatdifferenceafterfirstimmunization.AIVwasnotpreventedcompletely.TheAI-HIantibodylevelofbreedingducksreachedto911log2whentheducksgotfirstimmunizationat8daysold,thesecondimmunizationat60daysold,andboosterimmunizationwereat120daysold.Theantibodylevelmaintainedat69log2after10months

7、.Keywords：duck；avianinfluenza；inactivedvaccine:immuneprocedure研究表明，水禽是禽流感病毒的天然宿主，禽流感病毒不仅可长期在其体内寄居，而且可通过其迁徙经消化道排毒污染水域而感染其他鸟类和哺乳动物。这可能是禽流感病毒长期适应水禽达到进化平衡状态的结果。但自20世纪90年代中期以后,研究发现H5N1亚型禽流感病毒对水禽具有明显的致病性，并可引起大批水禽发病死亡，这说明随着自然生态的进化，禽流感病毒与水禽之间的生态平衡被打破，水禽也成了禽流感病毒的易感宿主s：。近年来周边国家暴发的禽流感，给中国养收稿日期：2014-04-17捻金项目：湖

8、北省科技厅“十一五”重大攻关项目(2009BBB003)；农业部公益行业科研专项(201003012)；湖北省农业科技创新中心资助项目(2011-620-001-003)作者简介：椅峻(1953-),男，湖北武汉人，研究员，主要从事禽病防研究工作，(电话电子信箱)junyang2013；通讯作者，邵华斌，研究员，(电子信箱)Shbl961°禽业构成了极大威胁，因此及时开展有关禽流感疫苗的研究成为当前预防和控制禽流感的必然选择。有关禽流感疫苗免疫鸡效果的研究报道较多，但对水禽系统免疫效果的报道较少。本研究针对鸭禽流感灭活疫苗免疫程序中最佳免疫时间及不同品种鸭

9、免疫效果进行了试验，对预防和控制鸭禽流感的发生具有重要参考意义。1材料与方法1.1商品疫苗及检测用抗原禽流感灭活疫苗（H5亚型）选择国内批准的生产厂家疫苗；用于检测AI-HI抗体的抗原、阳性血清、阴性血清购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。AI-HI抗体检测方法按常规方法成进行。1.2试验鸭雏鸭、青年鸭和成年产蛋鸭来自湖北省内蛋鸭场和肉鸭场，试验前均未进行禽流感免疫。大部分试验结合当地生产完成。1.3试验设计1.3.1雏鸭母源抗体消长情况的测定分别对3批肉种鸭商品代和3批产蛋鸭商品代的雏鸭进行母源抗体测定，每批1日龄雏鸭80只，每2d采血1次，测定雏鸭母源抗体，直到AI-HlW31og2。1.

10、3.2疫苗首次免疫鸭抗体产生期试验分别选择3批肉种鸭商品代和3批产蛋鸭商品代的714日龄雏鸭进行试验，每组免疫60只，首次免疫剂量：每只鸭颈背部皮下注射0.3mL；免疫后1、2、3、4、6、8、10周各采血一次，测定A1-HI抗体的消长情况，确定抗体最早产生时间。同时各组分别设30只条件相同的鸭不免疫禽流感疫苗作对照。1.3.3不同日龄维鸭首免效果观察试验选择肉种鸭商品代和产蛋鸭商品代的雏鸭进行试验，分别于3、5、7、9、14、19日龄进行免疫，每组免疫60只，各组在半开放鸭舍中隔离饲养，免疫剂量为0.3mL/只。免疫前检测母源抗体水平，免疫后每周采血1次，测定AI-HI抗体的消长情况，观察分

11、析不同品种鸭的最佳免疫日龄。1.3.4种鸭的免疫程序及抗体消长规律的测定1000只肉种鸭和1000只地方产蛋种鸭全部进行二次免疫（714日龄初免，60日龄二次免疫），在120日龄时各组均分为两部分，其中500只进行第三次免疫（在二次免疫基础t,120日龄加强免疫一次）。首免剂最为0.3mL/只，二次和三次免疫均为0.5mL/Ro免疫后14周每周检测抗体1次，分析抗体上升规律；之后每2月采血1次，测定AI-HI抗体的持续期。试验分别在肉鸭场和蛋鸭场进行。2结果与分析2.1雏鸭母源抗体消长情况的测定结果分别对3批肉种鸭商品代和3批产蛋鸭商品代的雏鸭进行母源抗体测定，结果（表1）表明，57日龄雏鸭A

12、I-HI母源抗体水平维持在较高水平，此后1周快速下降,15-17日龄母源抗体水平降至4.0log2以下。表1雏鸭母源抗体消长情况的测定5=5）不同n的兼鸭AI-HI母源抗体水平（log!）77出1357911131517192118.2(79)8.4(8-9)7.6(78)6.6(67)6.2(67)5.4(56)5.2(46)4.8(46)4.2(46)3.80-4)3.6(3-4)蛋鸭27.4(7-8)7.6(79)6.8(67)6.6(67)5.6(67)5.4(5-6)5.2(4%)4.4(45)3.8(34)3.8(34)3.4(34)35.2(56)5.4(56)5.2(5-6)5

13、.0(46)4.6(4-5)4.4(45)4.0(35)3.8(34)3.2(34)3.4(34)3.2(34)19.0(8-10)9.2(9-10)8.8(89)8.6(8-9)7.8(78)6.8(位7)6.4(67)5.6(56)4.2(45)3.2(34)3.0(34)肉鸭27.6(78)7.6(79)6.8(6-7)6.6(67)5.4(56)5.4(56)5.0(46)4.4(45)3.8(34)3.8(34)3.4(34)37.8(78)7.6(7-9)6.8(67)6.6(6-7)5.4(56)5.0(46)5.0(46)4.4(45)3.6(34)3.4(3-4)3.2(34

14、)2.2疫苗首次免疫鸭抗体产生期试验结果由表2、表3可见，肉鸭和蛋鸭分别在7J4日龄免疫,2周后可检测到AI-HI抗体,4周时抗体达到4.01og2以上，但抗体水平不一致，抗体平均几何滴度达不到51og2；抗体水平持续4周之后开始下降，母源抗体对疫苗免疫效果影响不大。2.3不同日龄雏鸭首免效果观察由表4、表5可见，鸭35日龄免疫时抗体上升慢，免疫效果差,AI-HI抗体水平为351og2。719日龄免疫时抗体水平在免疫后2周开始上升,46周达高峰。根据母源抗体情况，肉鸭79日龄首免较好，蛋鸭14-19日龄首免较好（非禽流感流行区）。3.4肉种鸭及产蛋种鸭免疫程序及抗体消长规律的测定由表6、表7可

15、见，二次免疫1周后鸭抗体水平开始上升，持续时间8个月（300日龄），二次免疫后8个月其AI-HI平均抗体水平为5.61og2,最高抗体水平为9.01og2；三次免疫2周后其抗体水平持续上表2肉鸭首次免疫抗体产生期测定（n=5）试验批次鸭数首免免疫笊免疫前后鸭体内AI-H1抗体水平（Iog2）与分组只日龄ml/只01周2周3周4周6周8周10周免疫组6070.3W2W223.4(3-4)4.8(46)5.0(46)4.6(45)4.4(35)1对照狙307W2W2W2W2W2蚤2W2W2免疫组26070.37.6(78)6.2(6-7)42(3-5)3.4(35)4.6(4-6)5.2(4-6)

16、4.8(45)4.2(35)对照蛆3077.6(78)6.4(&7)4.4(4-5)3.4(34)2.8(24)W2W2W2免疫组3对照组6070.37.8(78)6.2(6-7)4.4(4-5)3.6(3-5)4.8(46)4.8(46)4.6(45)4.4(35)3077.8(7-8)6.8(67)4.6(45)3.4(3-4)2.8(24)2W2W2表3S费鸭首次免疫抗体产生期测定（n=5）试验批次与分组鸭数首免免疫量免疫前后鸭体内AI-HI抗体水平（log2）只日龄ml?只01周2周3周4周6周8周10周免疫组160140.3W2W23.4(34)4.2(35)4.6(46)5

17、.0(46)5.2(5Y)4.8(46)1对照组3014W2W2W2W22W222免疫组2对照祖60140.33.8(34)3.4(3-4)3.4(34)4.0(3-5)4.4(45)4.8(46)5.0(46)4.6(45)30143.8(34)3.4(3Y)W2<2W2W2W2W2免疫组60140.33.2(34)3.2(34)3.4(34)4.4(3-5)4.8(46)5.0(46)5.2(46)4.8(46)对照组30143.2(34)3.2(34)W2W2W2W2W2W2表4不同日龄肉鸭首免效果观察（n=5）试验分蛆鸭数免疫皱ml/只免疫前后鸭体内AI-H1抗体水平（log2）

18、母源抗体1周2周3周4周6周8周10周3日龄600.37.6(79)5.4(56)3.6(34)4.0(35)4.4(35)4.4(45)4.2(45)4.0(35)5日龄600.36.8(6-7)5.4(56)3.4(34)4.0(35)4.4(35)4.4(35)4.2(4-5)4.2(35)7日龄600.36.4(67)4.4(45)4.4(35)4.6(46)5.2(46)4.8(45)4.2(45)4.4(3-5)9日龄600.35.4(56)3.6(34)4.4(45)4.8(46)5.2(46)5.2(4-6)4.8(45)4.4(45)14日龄600.34.4(45)3.2(3

19、4)4.4(35)4.8(46)5.2(46)5.2(4)4.8(45)4.4(45)19H龄600.33.4(34)3.2(34)4.4(4-5)4.8(46)5.2(46)5.2(46)4.8(45)4.4(45)衰5不同日龄蛋鸭首免效果观察（n=5）试验分蛆竺免疫量免疫前后精体内AI-H1抗体水平（Iog2）ml7只母源抗体1周2周3周4周6周8周10周3日龄600.38.2(8-9)6.4(67)4.6(45)4.2(35)4.4(35)4.4(4-5)4.2(45)4.0(35)5日龄600.37.6(78)5.4(56)4.2(34)4.4(3-5)4.8(45)4.4(45)4.

20、2(45)4.2(35)7日龄600.36.8(6-7)4.8(45)4.4(35)4.6(4-6)5.2(46)5.2(56)4.2(45)4.2(3-5)9日酸600.36.2(56)4.6(45)4.4(45)4.8(46)5.4(56)5.2(46)4.6(45)4.4(45)140龄600.34.8(46)3.2(3-4)4.4(3-5)4.8(46)5.2(46)5.2(46)4.8(45)4.4(45)19日龄600.33.8(34)3.2(34)4.4(45)4.8(4-6)5.2(46)5.2(46)4.8(45)4.4(45)升，持续时间10个月以上（420日龄），三次免疫

21、后10个月其AI-HI平均抗体水平为7.61og2以上，最高抗体水平为11.01og2。肉种鸭及产蛋种鸭分别在60日龄和120日龄进行二次和三次免疫效果基本一致。3小结与讨论1）本研究表明，不同品种的雏鸭，母源抗体水平在57日龄维持在较高水平，此后1周快速下降。不同日龄雏鸭首免效果观察结果表明，35日龄免疫时鸭抗体水平上升慢，免疫效果差,7-19B龄免疫时鸭抗体水平在2周时开始上升,46周达高峰。根据母源抗体情况，肉鸭79日龄首免较好，蛋鸭1419日龄首免较好（非禽流感流行区）。疫苗首次免疫鸭抗体产生期试验结果表明，肉鸭和蛋鸭分别在7、14日龄免疫,2周后可检测到AI-HI抗体,4周时其抗体水

22、平达到4.01og2以上，但抗体水平不一致，抗体平均几何滴度达不到5.01og2；抗体水平持表6肉种鸭抗体消长规律的测定（n=5）试验分组鸭数免疫日龄免疫后不同时间鸭体内体内AI-HI抗体（log2）01周2周3周4周2月4月6月8月10月二次免疫500604.2(45)4.6(46)5.4(56)6.0(57)6.6(6-8)7.0(69)6.4(58)6.0(57)5.6(56)5.0(46)三次免疫5001207.0(6-9)6.6(68)7.8(79)8.2(79)8.4(7-10)9.4(8-11)8.8(8-10)8.4(79)8.0(79)7.8(79)表7蛋种鸭抗体消长规律的测

23、定（n=5）试莪分组鸭数免疫免疫后不同时间时体内体内AI-HI抗体（log2）只日龄0周2周3周4周2月4月6月8月10月二次免疫三次免疫500604.2(45)4.4(46)5.2(56)6.2(5-7)6.6(68)7.2(69)6.4(58)5.8(5-7)5.6(56)5.0(46)5001207.2(6-9)6.8(68)7.6(79)8.0(79)8.6(7-10)9.2(8-11)8.8(8-10)8.6(7-9)8.2(7-9)7.6(79)续4周之后开始下降；母源抗体对疫苗免疫效果影响不大。而二次免疫后AI-HI抗体滴度明显上升，且维持时间长。因此，在临床生产实践中必须对鸭进

24、行二次免疫，尤其是种用鸭最好在开产前23周根据情况进行三免,确保有效抗体的持续时间。2）关于鸭禽流感免疫有效抗体问题，根据姜北宇等血所做的H5亚型禽流感疫苗免疫后HI抗体与攻毒保护率的关系的研究结果，当免疫鸡HIW23时，攻毒后全部发病死亡；HI=24时，攻毒保护率为77.4%；HI=25时，攻毒保护率为97.4%；HIN26时，攻毒保护率为100%。这与其他一些研究人员所得结果基本一致。由于条件的限制，本研究未做抗体水平与攻毒保护率关系的相关性试验，国内也尚未见相关报道，但根据作者多年对水禽的临床诊断经验认为，以上的相关性试验结果可用于评价禽流感疫苗免疫效果时参考。3）肉种鸭及产蛋种鸭免疫程

25、序及抗体消长规律的测定结果表明，二次免疫1周后鸭抗体水平开始上升，持续时间8个月（300日龄），二次免疫后8个月其A1-HI平均抗体水平为5.61og2,最高抗体水平为9.01og2；三次免疫2周后鸭抗体水平持续上升，持续时间10个月以上（420日龄），三次免疫后10个月其AI-HI平均抗体水平为7.61og2以上，最高抗体水平为11.0k）g2。因此商品蛋鸭推荐二次免疫程序，种鸭推荐三次免疫程序，商品肉鸭推荐79日龄首免。4）坚持定期检测鸭群AI-H1抗体，是确保鸭禽流感疫苗免疫成功的关键措施，不同年龄、不同品种、不同饲养条件鸭群的禽流感疫苗免疫效果均会有一定的差异，应根据不同情况，制定适合

26、本场的禽流感免疫程序，确保养鸭业健康发展。参考文献：1美】Bw卡尔尼克禽病学M.第十版.高福.刘文军译.北京：中国农业出版社，1999.743-746.2 刘秀梵.家养水愈A型流感病毒和新城疫病毒的感染和临床疾病A.第15届世界禽病大会性中国畜牧冉医学会2007年学术年会论文集C.北京：中国畜牧善医学会,2007.87-95.3 于睫震.中国的禽流感A.第15届世界禽病大会实中国畜牧时医学会2007年学术年会论文集C.北京：中国畜牧兽医学会，2007.134-137.4 甘孟侯.全球禽流感的流行形势J.中国预防善医学报.2004,26（6）:468-470.5 中国冉药典委员会.中华人民共和国鲁药典（2005年版）M.北京：中国农业出版It,2006.6 姜北宇，刘月焕，祝俊杰.等.H5亚型禽流感疫苗对特禽及水禽的免疫效果观察:J.中国兽药杂志,2005,39（9）：23-25.（责任编辑曾德芳）（上接第5212页）(8):10