醒脑静注射液对抗新冠病毒肺炎的调控机制.docx

1、Vol.38No.1March2021安徽工业大学学报(自然科学版)J.ofAnhuiUniversityofTechnology(NaturalScience)文章编号：1671-7872(2021)010049-11醒脑静注射液对抗新冠病毒肺炎的调控机制张妍七王齐气李奥强李龙杰七魏林2,严菊芬*(1.安徽工业大学a.冶金工程学院，b.化学与化工学院，安徽马鞍山243032；2.华中师范大学化学学院，湖北武汉430079)摘要：采用网络药理学方法，构建醒脑静有效成分与新冠病毒肺炎(COVID-19)潜在相关靶点相互作用的药理学网络。采用分子对接的方法，评价醒脑静有效成分与网络药理学预测潜在靶

2、标MAPK3以及新冠病毒3CLpro的结合能力，探索醒脑静对抗COVID-19的核心有效成分及其调控机制。结果表明：醒脑静对抗COVID-19存在整体调控和多成分作用多靶点的特点；醒脑静有效成分中与COVID-19相关靶点结合最多的前5个化合物是麝香酮、懈皮素、山奈酚、柚皮素、阡谷爸醇：醒脑静通过与MAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17A,TNF等核心靶点相互作用，参与抗炎、抗毒、调节免疫功能等整14综合调节过程：以MAPK3为例,分子对接的核心有效成分预测与网络药理学预测结果基本一致.关键词：新冠I肉毒肺炎：醒脑静注射液：网络药理学：分子对接；谢制制中图分类号:R932文献标志码:

3、Adoi：10.3969/j.issn.1671-7872.2021.01.008RegulationMechanismofXingnaojingInjectionAgainstCOVID-19ZHANGYanla,WANGQi",LIAoqiang,b,LILongjie,b,WEILin2,YANJufen,b(1.a.SchoolofMetallurgicalEngineering,b.SchoolofChemistryandChemicalEngineering,AnhuiUniversityofTechnology,Maanshan243032,China;2.Colleg

4、eofChemistry,CentralChinaNormalUniversity,Wuhan430079,China)Abstract：ThenetworkpharmacologyoftheactivecomponentsofXingnaojingandCOVID-19wasestablishedbyusingthencthodofnetworkpharmacology.InordertofurtherexplorethecoreactivecomponentsandregulatorymechanismofXingnaojingagainstCOVID-19,themethodofmole

5、culardockingwasusedtoevaluatethebindingabilityoftheactivecomponentsinXingnaojingwithMAPK3obtainedbynetworkpharmacologyand3CLprothatwasthemainproteinofnovelcoronavirus.TheresultsshowthatXingnaojinghasthecharacteristicsofglobalregulationandmulti-componentactionagainstCOVID-19.IntheactivecomponentsofXi

6、ngnaojing,muskketone,quercetin,kaempferol,naringeninandp-spisterolarethetop5compoundsthathavethemostbindingtopotentialtargetsassociatedwithCOVID-19.TheactivecomponentsofXingnaojingmaybindtocoretargetssuchasMAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17AandTNFintheoverallcomprehensiveregulatoryprocessofanti-inflammatory,a

7、nti-viralandimmuneregulation.TakingMAPK3asanexample,thepredictionresultsofthecoreactivecomponentsofmoleculardockingisbasicallyconsistentwiththoseofnetworkpharmacology.Keywords：COVID-19;Xingnaojinginjection;networkpharmacology;moleculardocking;regulationmechanism新冠病毒导致的新冠病毒肺炎(COVID-19)截至2020年3月17日先后在

8、全球150多个国家和地区流行，收稿日期：2020-11-16基金项目：国家重点研发计划项日(2017YFE0118200)；安徽省重点研究与开发计划项目(201904b11020025)作者简介：张妍(1986)，山东成武人，实习研究员，主要研究方向为有机合成与网络药理学。通信作者：严菊芬(1986),女，江苏南通人，博士，训师，主要研究方向为微生物代谢与天然产物。引文格式：张妍，王齐，李奥强，等.醒脑静注射液对抗新型冠状病毒肺炎的调控机制J.安徽工业大学学报(自然科学版),2021,38(1):49-59.(c)naringinandMAPK3(d)naringinand3CLpro(f)k

9、aempferoland3CLpro(c)kaempferolandMAPK3图6阡谷维醇、棚皮素、山奈酚与MAPK3、3CLpro可能的结合方式Fig.6Possiblecombinationofpsitosterol,naringinandkaempferolwithMAPK3and3CLpro3结论采用网络药理学和分子对接的方法对醒脑静注射液对抗COVID-19的调控机制进行研究，所得主要结论如下：1）醒脑静对抗COVID-19存在整体调控和多成分作用多靶点的特点。从化合物角度看，醒脑静有效成分中与COVID19相关靶点有潜在作用最多的前5个化合物分别是麝香酮、懈皮素、山奈酚、柚皮素、。

10、-谷笛醇。分子对接的醒脑静核心有效化学成分与网络药理学预测结果基本一致。2）醒脑静潜在靶点中相互作用最强的前20个蛋白包括与细胞因子风暴关系密切的MAPK3,CSF2,IL4,IL13JL17A,与细胞凋亡有关的CASP3,BCL2LI,TNFRSFIA,FASLG,CASP8,CTLA4。醒脑静可作用包括InfluenzaA,TNFsignalingpathway等在内的多个病毒感染、肺炎和肺部损伤通路。醒脑静通过与MAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17A,TNF等核心靶点相互作用，参与抗炎、抗病毒、调节免疫功能等整体综合调节过程，具有干预细胞因子风暴的重要作用o3）分子对接结果显

11、示，醒脑静有效成分与COVID-19复制中重要蛋白3CLpro也有一定的结合能力，进一步说明醒脑静作用方式的多样性。本研究只是通过挖掘数据预测醒脑静有效成分及其治疗COVID-19的药理作用机制，没有通过具体实验和临床验证，详细结果有待进一步通过相关实验证实。参考文献：1许海玉，张彦琼，秦月雯，等基于TCMIPV2.0探析新型冠状病毒肺炎全病程中医证候和推荐方剂的科学内涵J.中国中药杂志，2020,4（7）:1488-1498.国家卫生健康委员会.新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）EB/OL.2020-03-04（202011-10）.3 何黎黎，龚普阳，封阴，等中药在抗新型冠状病毒

12、肺炎(COVID-19)引起的细胞因子风暴中的应用分析J.中草药，2020,51(6):13751385.4 熊微，冉京燕，谢雪佳，等治疗新型冠状病毒肺炎中成约的药理作用与临床应用J.医药导报，2020,39(4):465-476.15张舸，陈周闻，张烽斐，等醒脑静治疗肺性脑病的临床研究J.实用药物与临床，2001,4:57-58.6谢景峰，蔡定芳，赵剑华，等醒脑静注射液治疗病毒性发热的实验研究J.中国中医急症，2000,9:78-79.71KIMJ.HYUNSY.CHAEJB,etal.Valsalvaretinopathyandbranchretinalarteryocclusionaft

13、ercardiopulmonarycerebralresuscitationJ.TheAmericanJournalofEmergencyMedicine,2014,32(12):1558.8 胡丹丹，陈伟，孙鑫.醒脑静注射液调控NF-kB信号通路对脓毒症心肌损伤的影响J.中国中医急症，2012,8(21):1260-1262.9 HOPJINS,ANDREWL.Networkpharmacology:thenextparadigmindrugdiscoveryJ.NatureChemicalBiology,2008,4(11):682-690.10 SHAOL,ZHANGB.Traditio

14、nalChinesemedicinenetworkpharmacology:(hcorjsmethodologyandapplication|J.ChineseJournalofNaturalMedicines,2013,11(2):110-120.11 吴昊，王佳琪，杨雨薇，等.基于网络药理学和分子对接技术初步探索“清肺排毒汤”抗新型冠状病毒肺炎作用机制|J.药学学报,2020,55(3):374-383.12 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部M.北京：中国医药科技出版社，2015:384-385.13 ROLFA,AMOSB,WUCH.etal.UniProt:theunivers

15、alproteinknowledgebaseJJ.NucleicAcidsResearch,2017.45(D1):158-169.14 REBHANM,CHALIFA-CASPIV,PRILUSKYJ,etal.GeneCards:integratinginformationaboutgenes,proteinsanddiseasesJ.TrendsinGenetics,1997,13(4):163.15 WANGLEJ.ZHAOS,LIUM.ctal.ACE2expressionbycolonicepithelialcellsisassociatedwithviralinfection,i

16、mmunityandenergymetabolismJ/OL,MedRxiv,2020(5):20020545./l0.1101/2020.02.05.20020545.16 SHANNONP.MARKIELA,OZIERO.ctal.Cytoscapc:asoftwareenvironmentforintegratedmodelsofbiomolccularinteractionnetworksJ.GenomeResearch,2003,13(11):2498-2504.17 SZKLARCZYKD,GABLEAL,LYOND,etal.STRINGvl1:pro

17、tein-proteinassociationnetworkswithincreasedcoverage,supportingfunctionaldiscoveryingenome-wideexperimentaldatasetsJ|.NucleicAcidsResearch,2019,47(Dl):607_613.18 STELZLU,WORMU,LALOWSKIM.elal.Ahumanprotein-proteininteractionnetwork:aresourceforannotatingtheproteomelJJ.Cell,2005,122(6):957-968.19 SHER

18、MANBT.LEMPICKIRA.SystematicandintegrativeanalysisoflargegenelistsusingDAVIDbioinformaticsresourcesJ.NatureProtocols,2009,4(1):44-57.20 JAINAN.Surflex-Dock2.1:robustperformancefromligandenergeticmodeling,ringflexibility,andknowledge-basedsearch|J|.JournalofComputer-aidedMolecularDesign,2007,21(5):281

19、-306.21 WANGR,LAIL.WANGS.Furtherdevelopmentandvalidationofempiricalscoringfunctionsforstructure-basedbindingaffinityprediclionJ.JournalofComputer-aidedMolecularDesign,2002,16(1):11_26.22 李红艳，赵江盛张金华，等.一种醒脑静注射液及其制备方法：201410464441P.2017-04-05.23 ZHOUP,YANGXL,WANGXG,etal.Apneumoniaoutbreakassociatedwith

20、anewcoronavirusofprobablebatoriginJJ.Nature,2020,579:270-273.24 马纳，李亚静，范吉平.搠皮素药理作用研究进展J.辽宁中医药大学学报，2018,20(8):221-224.25 张雅雯，邵东燕，师俊玲，等山奈酚生物功能研究进展J.生命科学，2017,29(4):400-405.26 曾文峰，张发云，杜刚等.柚皮素：新一代免疫调节剂|J.生物化学与生物物理进展，2018,45(9):915-925.27 冯巧巧，刘军田.麝香酮药理作用研究进展J.食品与药品,2015,17(3):212-214.28 肖志彬，贾韩学，刘小雷谷番醇药理活

21、性的研究现状J.世界最新医学信息文摘，2015,15(8):66-68.29 CHENY.LIUQ.GUOD.Emergingcoronaviruses:genomestructure,replication,andpathogenesis!JJ.JournalofMedicalVirology,2020,92(10):2249-2256.世界卫生组织将其危害程度定义为全球大流行。中医药在改善发热、咳嗽、乏力等对症治疗方面具明显优势，我国在COVID-19治疗过程中医药参与度极高，湖北地区达75%以上，其他地区超过90%，针对中医分期分型诊治推荐不同的中药汤剂和中成药。醒脑静注射液(简称醒脑静

22、)是被推荐用于治疗重型、危重型COVID-19的中药注射液之一气中药的早期介入有利于控制疾病向“细胞因子风暴”发展叫醒脑静山冰片、郁金、板子和鹿香4味中药提取物组成，是由中药传统名方“安宫牛黄丸”经科学提取精制而成的新型中药制剂，具醒脑开窍、清热解毒和凉血活血等功效气在肺性脑病方面有良好的治疗效果。家兔病毒性高热模型研充表明，醒脑静可减少内源性热源及脑内前列腺素E2、环磷酸腺昔的合成与释放，进而降低发热指数及持续高热时间全身炎症反应综合症大鼠研究模型表明，醒脑静可降低血清中的NF-KB,TNF-a及IL-6水平，并对TNF-a,IL-6,IL-8等炎症因子具有抑制作用“气然而现阶段醒脑静对抗C

23、OVID-19的有效活性成分及调控作用机制尚不明确。网络药理学是系统生物学、计算生物学、多向药理学等多学科交叉融合学科，与中药从整体水平调控机体并发挥药效理念一致阳。七该学科的出现为从整体角度系统寻找中药复方活性成分与潜在作用靶点提供了新策略，有利于发现中药多成分-多靶点之间的关系，帮助从整体角度探索中药与治疗疾病间的关联性叫。分子对接是研究受体与配体间相互作用，预测两者亲和力和结合模式的分子模拟方法。文中采用网络药理学和分子对接技术，通过构建醒脑静、有效成分、COVID-19相关靶点相互作用网络及蛋白质相互作用网络，分析醒脑静有效成分潜在靶点信号通路，计算醒脑静有效成分与MAPK3,3CLp

24、ro的结合亲和能，探索醒脑静对抗COVID19的有效成分及其潜在调控机制。1材料与方法1.1醒脑静主要化学成分的筛选利用中药系统药理学(traditionalChinesemedicinesystemspharmacology,TCMSP)数据库与分析平台(从TCMSP数据库下载冰片、郁金、棚子主要化合物靶点基因，借助UniProt数据库心统一靶点基因名称，利用GeneCards数据库|l4|(/),以'rnuskketonev为关键词检索麝香酮可作用靶点基因,综合以上信息得到醒脑静可作用靶点基因，利用GcncCards®娜摩，

25、以“pneumonia”为关键词，检索肺炎相关靶点基因，综合ACE2共表达基因回，取两者交集，得到与COVID19相关的靶点基I大I。取醒脑静可作用靶点基因COVID-19相关靶点基因交集，得到醒脑静可作用的C0VID-19潜在相关靶点基因。在此基础上对步骤1.1醒脑静主要化学成分进行逆向精筛，得到与C0VID-19相关靶点基因有关的醒脑静有效成分。利用Cystoscape3.7.2软件""(http:/)构建醒脑静有效成分与C0VID-19相关靶点相互作用网络。1.3醒脑静潜在靶点PPI网络的构建将上述与醒脑静相互作用的COVID-19相

26、关靶点基因录入STRING网站"(/),酣多种蛋白质，限定物种为人，选择高置信度(0.700),隐藏网络中断开节点，得到COVID19相关靶蛋白质相互作用(protein-proteininteraction,PPI)网络(提取PPI网络文件，得到所有节点和连线数据，使用R语言得到核心基因，绘制PPI网结中与其他蛋白相互作用最强的前20蛋白图表。1.4醒脑静潜在靶点基因GO富集与KEGG通路分析为进一步了解醒脑静潜在COVID-19相关靶点功能及其在信号通路中的作用，将醒脑静作用的COVID-19相关潜在靶点基因导入DAVID数据库,9,(ht

27、tps://home.jsp),输入靶基因名称，限定物种为人并校正名称为officegenesymbol,对其进行生物学过程基因本体(geneontology,GO)富集分析，将所得结果导入Excel绘制成条形图进行可视化。以通路中差异表达的基因数目为标准，判断京都基因与基因组百科全书(kyotoencyclopediaofgenesandgenomes,KEGG)通路富集程度，以显著性参数P值为限定条件，使用R语言将其绘制成气泡图进行可视化处理，同时作出部分相应KEGG通路图用于分析。1.5醒脑静有效成分与MAPK3,3CLpro分子的对接使用ChemOff

28、ice软件构建醒脑静有效成分3D结构，采用MMFF94力场对其进行能量最小化，保存为mol2格式文件。在PDB数据库(/)K载MAPK3晶体结构(PDB：2Z0Q)和3CLpro晶体结构(PDB：6LU7)。使用Sybyl分子对接软件中的Surflex-Dock模块叫将醒脑静有效成分分别对接到MAPK3和3CLpro的活性空腔。对于分子对接所得构象，使用X-Score程序刖计算醒脑静有效成分与靶点蛋白的结合亲和能。2结果与分析2.1醒脑静主要化学成分通过TCMSP检索到冰片、郁金、柜子化学成分共351个，其中31个来自冰片，222个来自郁金，98个来自梃子

29、。郁金、相子以OB230%且DL20.18进一步筛选，分别得到主要化学成分15个。按照TCMSP数据库检索规则冰片所含化学成分类药性DL值较小，综合考虑醒脑静制作时取冰片全部药材为原料的生产工艺回，将TCMSP数据库检索得到的31种化合物全部作为冰片主要化学成分。麝香为野生动物制品，其信息未被TCMSP数据库收录，查阅药典将麝香酮(muskketone)作为麝香主要化学成分。2.2COVID19相关靶点基因及醒脑静有效成分通过TCMSP数据平台筛选出冰片、郁金和申卮子上述61个化学成分可能作用的相关靶点基因，分别得到冰片可作用靶点基因49个，郁金可作用靶点基因54个，椀子可作用靶点基因167个

30、。利用GeneCards®通过关键词“muskketone”检索到麝香主要有效成分麝香酮可作用靶点基因663个。综合冰片、郁金、棚子、麝香主要化学成分可作用靶点基因，去除重复部分得到醒脑静主要化学成分可作用靶点基因761个。利用GeneCards奶，通过关键词“pneumonia”检索得到肺炎相关靶点基因4562个。相关研究表明：ACE2是新冠病毒感染人体细胞的重要受体，是病毒感染细胞必不可少的蛋白牌，与ACE2共表达的基因中存在与C0VID-19相关的重要靶点基因综合ACE2共表达基因(5556个)与肺炎相关靶点基因(4562个)，取两者交集得到与COVID-19相关的靶点基因99

31、5个。取醒脑静主要化学成分可作用靶点基因与C0VID-19相关靶点基因的交集，得到醒脑静町作用于C0VID-19的潜在相关靶点基因，172个。由醒脑静潜在作用的C0VID19相关靶点基因对上述醒脑静62个主要化学成分逆向分析，得到醒脑静与C0VID-19相关的有效化学成分22种，结果如表1。表1醒脑静与COVID-I9相关的有效成分Tab.1ActivecomponentsinXingnaojingassociatedwithCOVID19药材化合物MOLIDCAS号化学式相对分子量caryophylleneMOL00003687-44-5C15H24204.35CymolMOLOOOl179

32、9-87-6C10HI4134.22(S)-(+)-a-phellandreneMOL0002002243-33-6C10HI6136.23a-terpineolMOL00023298-55-5CI0H18O154.25BorneolMOL000244507-70-0C10H18O154.25冰片OleanolicacidMOL000263508-02-1C30H48O3456.71()-epoxycar),ophylleneMOL0004741139-306C15H24O220.35NerylacetateMOL000597141-12-8C12H20O2196.29p-pineneMOL0

33、00905127-91-3C10H16136.23p-elemeneMOL00090833880-83-0C15H24204.35Linalool(D)MOL000920126-90-9C10H18O154.25IsosafroleMOL006866120-58-1C10H10O2162.19续表1药材化合物MOLIDCAS号化学式相对分子量BsitosterolMOL00035883465C29H50O414.71那金NaringcninMOL004328480-41-1C15HI2O5272.25QuercetinMOL000098117-39-5CI5H10O7302.24Kaempfe

34、rolMOL000422520-18-3C15H10O6286.24StigmasterolMOL00044983-48-7C29H48O412.69桅于MandenolMOLOOI494544-35-4C20H36O2308.55-hydroxy-7-methoxy-2-(35455-trimethoxyphenyl)chromoneMOL00309518103-41-8C19H18O7358.37SudanIIIMOL00456185-86-9C22H16N4O352.393-methylkempferolMOL0072451592-70-7C16HI2O6300.28赡香Muskketo

35、neNA541-91-3C16H30O238.412.3醒脑静-有效成分-相关靶点相互作用网络利用Cystoscape3.7.2软件构建醒脑静、有效成分、COVID-19相关靶点相互作用网络，结果如图1。Nanngcnin佛金B-sitosterol5-hydroxy-7-mcthoxy-2-(3,4,5-trimcthoxyphcnyl)chromoncKaempferol3-methylkempferol二施子SudanIIIStigmastcrolMuskketoneCOV1D-19Mandenol-terpineolQuercetinOlcanolic-terpineolB-caryo

36、phylleneIacetateLinalool(D)Lsosafrolc冰片CymolBorneolB-elemenePinene(S)-(+)-a-phellandrene(-)-cpoxycaryophyllcne图1醒脑静-有效成分-相关靶点相互作用网络Fig.1InteractionnetworkofXingnaojing-activecompounds-potentialtarget药材节点4个，化合物节点22个COVID-19相关靶点节点172个，边236条。其中长方形代表冰片及其化合物，菱形代表郁金及其化合物，三角形代表相子及其化合物，平行四边代表麝香及其化合物，圆形代表COV

37、ID-19相关靶点，连线表示疾病和药材、药材和成分、成分和靶点、靶点和疾病的关系。该网络中，每个化合物平均与10.73个靶点有相互作用，每个靶点平均与1.37个化合物相互作用，说明醒脑静具有整体调控、多成分作用多靶点的治疗特点。从化合物角度看，通过分析化合物靶点的中心度值、亲中心度值以及等级值可知，在醒脑静有效成分中，与COVIDT9相关靶点结合最多的前5个化合物是麝香酮(muskketone)、懈皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)、柚皮素(naringenin)、。-谷陪醇(。-sitosterol),分别能和145,36,10,9,8个潜在靶点发生相互作用。5个化合

38、物中，撇皮素、山奈酚、柚皮素属于黄蹴化合物，生物活性多样。棚皮素具抗病毒、抗炎作用叫III奈酚具明显的抗炎作用回，柚皮素则是一种新型免疫调节剂肉，麝香酮具抗痴呆、抑捅缺血、抗炎等药理作用，"谷带醇具抗炎、保护胃黏膜等药理活性网。从靶点角度看，与醒脑静有效成分作用个数最多点的前5个靶点为PTGS1,CASP3,PPARG,BAX,ACHE,分别能与17,7,6,5,5个醒脑静有效成分有相互作用。2.4醒脑静潜在相关靶点的PPI网络使用STRING网站分析醒脑静潜在相关靶点基因，得到其PPI网络，结果如图2。MAXCSNDUOX2ECEI4LA-DMABCHh<WIGA2RY+PL

39、A2G5MRYR2MIFHDAC9TOPI今GM2_CMA1COL17AIEIF6储，ECVIM,UCHLlLTAMGYS2CTSB、EIF2S1CASP10BBC3gs%dspSOD2-G仲GLDN4图2醒脑静相关靶点PPI网络Fig.2PPInetworkofpotentialtargetsofXingnaojing/>rw/CD8A图中节点表示靶点基因翻译蛋白，蛋白之间连线的粗细表示两者的潜在相关性，连线越粗，相关性越强。PPI图中，共涉及节点172个，连线835条，平均节点9.71个，平均局部聚类系数为0.468,PPI富集显著性参数P<1.0x10*%图3为PPI网络中与

40、其他蛋白相互作用个数前20的蛋白，这些蛋白有与细胞因子风暴关系密切的MAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17A,也有与细胞凋亡有关的CASP3,BCL2L1,TNFRSF1A,FASLG,CASP8,CTLA4o图3PPI网络中与其他蛋白相互作用个数前20的蛋白Fig.3Top20proteinsinteractingwithotherproteinsinthePPInetwork2.5醒脑静相关靶点通路可视化分析使用DAVID网站对醒脑静相关靶点进行GO富集分析，得到GO条目共计713个(P<0.05),其中包括生物过程(biolpgiMprocess)613个，细胞组分(ce

41、llularcomponent)50个，分子功能(molecularfuncii()n)50个，占比分别为86%,7%,7%,各类别前20条通路如图4。通过KEGG通路分析得到共123条通路(PV0.05),关于病毒感染、肺炎和肺部损伤的通路包括influenzaA,viralproteininteractionwithcytokineandcytokinereceptor,non-smallcelllungcancer,smallcelllungcancer,HIF-1signalingpathway,toll-likereceptorsignalingpathway,Tcellrecept

42、orsignalingpathway,TNFsignalingpathway,PI3KAktsignalingpathway,MAPKsignalingpathway,apoptosis等。如图5所示，排名前20的通路中，有21个和16个醒脑静有效成分潜在作用靶点分别在influenzaA和TNFsignalingpathway通路中发挥重要作用。醒脑静、有效成分、COVID-I9相关靶点相互作用网络中具有重要调控作用的CASP3和BAX也富集在其中，PPI网络中前20位核心蛋白也有多个在两条通路发挥重要作用，包括MAPK3,CASP3,CASP8,CYCS,CSF2,TNFRSFIA,FAS

43、LG。antioxidantactivitypeptidebindingproteinkinasebindingkinasebindingcysteine-typepeptidaseactivitycysteine；typcendopeptidaseactivityproteinserine/threomnekinaseactivityproteinheterodimenizationactivitygrowthfactoractivitylipidbindingproteinkinaseactivitytranscriptionactivatoractivityproteinhomodime

44、rizationactivitycytokineactivitypeptidaseactivity,actingonL-aminoacidpeptidesendopeptidaseactivitypeptidaseactivityenzymebindingproteindimerizationactivityidenticalproteinbindingexternalsideofplasmamembraneinsolublefractioncytoplasmicvesiclemembrane-boundedvesiclesolublefractionendomembranesystemmit

45、ochondrionvesiclecellsurfaceorganellemembraneintrinsictoplasmamembraneintegraltoplasmamembraneorganellelumencellfractionextracellularspaceextracellularregionpartcytosolplasmamembranepartextracellularregionplasmamembranepositiveregulationofmolecularfunctionpositiveregulationofsignaltransductionpositi

46、veregulationofcellularbiosyntheticprocessapoptosispositiveregulationofcellcommunicationpositiveregulationofbiosyntheticprocessprogrammedceildeathdefenseresponseintracellularsignalingcascadedeathcelldeath徒因本体写信分析332200111167762824151552382020212199955-33543325233333immuneresponsecellsurfacereceptorli

47、nkedsignaltransductionresponsetoorganicsubstancepositiveregulationofmacromoleculemetabolicprocessresponsetowoundingregulationofcellproliferationregulationofcelldeathregulationofprogrammedcelldeathregulationofapoptosis9994,3336n144434344441456664440102030405060708090基因总数/个图4醒脑静潜在作用靶点的GO富集分析Fig.4GOenr

48、ichmentanalysisofpotentialtargetsofXingnaojingApoptosisHumancytomegalovirusinfectionInfluenzaAEpstcin-barrvirusinfectionPathogenicEscherichiacoliinfectionHepatitisCTNFsignalingpathwayToxoplasmosisCelladhesionmolecules(CAMs)NecroptosisHepatitisBEGFRtvrosinekinaseinhibitorresistanceRheumatoidarthritis

49、Toll-likereceptorsignalingpathwayHIF-1signalingpathwayAutoimmunethyroiddiseaseViralmyocarditisPlatinumdrugresistanceAllograftrejectionTNFSIGNALINGPATHWAY505050.2.5.p.adjustIle-082e-083e-084e-080.040.16Generatio(a)KEGG通路分析LeukocyterecruitrneniApoptosisrccTTlIIMBcIAPl/2degradation|I

50、TCH|MAPK、+pTpl21NIKI、NF-kBITAK1MKK4/V?JNKI/2hMEK1旬Cg2|Cxc13|Cxcl5|CxcI10|Cx3cIl|LcukocyluactisalionApoptosisdAPTIJ%满MSK1/2HCREBIObiquitinmediatedlJ-proteolysis>1iSurfacereceptors|FaslITTit同|JagI|InflammatorycytokinestDcubiquitinationbirRiP3|-rMLkLl-JIkBaubiquitination:anddegradationiIntracellularsignaling(ncgativc)|Rcl3|Nflbia|Soc；3|rraTnIntracellularsignaling(positive)I1(147|TranscriplionfactorsIFos|Jun|JunR|Remodelingofextracellularmatrix|Mmp3|Ktmp9Mmpl4|VasculareffectsNccrosomc(Limitedexpression)IT