马免疫血浆的稳定性研究.docx

1、论著马免疫血浆的稳定性研究段丽娟，李育合,谢小荣，柳州，孟祥玉，金学敏，杨俊杰，高建军兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心，甘肃兰州,730046摘要：目的了解不同温度条件对马免疫血浆外观和效价的稳定性影响,为马免疫血浆的采集、分离、贮存、运输及抗毒素生产提供数据支持。方法将破伤风类毒素及肉毒A、B、E、F型类毒素制备的马免疫血浆，分别放置于28V、20r、37T3种温度下，并分别于0、1、3、6、12个月取样，依据中国药典三部（2010版）的检测方法和标准，对样品进行外观检查及效价检测。结果破伤风及肉毒A、B、E、F型马免疫血浆在28弋条件下，放魇12个月稳定性良好，外观

2、及效价均符合中国药典三部（2010版）规定要求。20Y与37龙下放置的马免疫血浆随着时间的延长,外观会发生不同程度的浑浊，效价也均有不同程度的降低,低效价组比中、高效价组的效价下降明显，且温度越高效价降低幅度越大。结论马免疫血浆在2-8X条件下质量:稳定。关键词:破伤风类毒素；肉毒类毒素;马免疫血浆；肉毒马免疫血浆;效价;稳定性中图分类号：R372.7文献标志玛：ADOI：10.13309/ki.pmi.2014.06.008InvestigationofstabilitiesforimmunizedequineplasmaDUANIj-juan,LiYu-he,XieXiao-rong,Li

3、uZhou,MengXiang-yu,JinXue-min,YangJun-jie,GaoJian-junLanzhouinstituteofBiologicalProductsCo.lad,CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch,Ijanzhou730046,GansuProvince,ChinaCorrespondingauthor:GaoJian-jun,E-mail:gao5369Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofdifferentstoragetemperatureson

4、immunizedequineplasma,andprovidebasisforcollection,separation,storage,andtransportaiontheimmunizedplasmausedinproduction.MethodsThetetanustoxoidsandbotulinumserotypeA,B,E,Ftoxoidsimmunizedequineplasmawerestoredat2-8龙，20龙，37Tfor12months,thestabilityforpotencyandappearanceweretestedat0,1,3,6monthsand1

5、2months,respectively,basedontherelatedrequirementsin(ChinesePharmacopoeia.ResultsThebiologicalactivitiesandappearancewerekeptinstableafterstoredfor12monthsat2-8X.,whichweremetwiththerelatedrequirementsinChinesePharmacopoeia.Ontheotherhand,theplasmabecameturbidandformedflocculeindifferentlevelsat20Ta

6、nd37°C,andthepotenciesweredecreasedsignificantly.ConclusionTheimmunizedequineplasmacouldbepreservedat2-8幻tomaintainstablequality.Keywords：Tetanustoxoids；Botulinumtoxoids;Immunizedtoxoidsequineplasma;Immunizedbotulinumequineplasma:Potency;Stability人用动物来源的免疫球蛋白或免疫血清是由免疫动物血浆（清）制成,用于防治特定病原或毒素引起的疾病。

7、应用动物免疫血清进行防治某些疾病可追溯到20世纪初，目前使用动物免疫血浆生产的抗毒素制品有破伤风抗毒素、肉毒抗毒素、抗狂犬病血清、抗蛇毒血清等。马免疫血浆作为生产免疫球蛋白或免疫血清的主要原料，其外观性状以及效价的作者简介:段丽娟.医学生物学工程师，主要从事抗毒素类制品纯化及检测工作。通讯作者：高建军，E-maiLgao5369稳定性对抗血清制品的质量起着决定性的作用，在影响其稳定性的众多因素中，温度条件尤为关键。为了解不同温度条件对马免疫血浆外观和效价的影响，试验以破伤风及肉毒A、B、E、F型马免疫血浆为研究对象，观察不同温度对其外观和抗体效价稳定性的影响。为马免疫血浆的采集、分离、贮存、运

8、输及抗毒素生产提供数据支持。1材料与方法1.1材料1.11马免疫血浆破伤风类毒素以及肉毒A、B、E、F型类毒素制备的马免疫血浆，由兰州鹏程生物技术开发有限责任公司提供。分别选取高、中、低效价的破伤风马免疫血浆及肉毒A、B、E、F型马免疫血浆各3批样品，破伤风马免疫血浆批号为：匚20120301.T-20120502.T-20120601；肉毒A型马免疫血浆批号为：A-20120301、A-20120302、A-20120501；肉毒B型马免疫血浆批号：为B-20120301、B-20120302、B-20120501；肉毒E型马免疫血浆批号为：E-20111201、E-20120301、E-2

9、0120501；肉毒F型马免疫血浆批号为：420120201.F-20120401.F-20120501o1.1.2主要仪器SP-02型生化培养箱和BCD-268型海尔冰箱均购自恒丰医疗器械有限公司。1.2马免疫血浆稳定性将破伤风及肉毒A、B、E、F型马免疫血浆样品，放置于28T.20X.37Y条件下12个月，并于0、1、3、6、12月取样，按中华人民共和国药典（简称中国药典）三部（2010版）中破伤风抗毒素及肉毒抗毒素的检测方法和标准，分别对样品进行外观检查及马免疫血浆抗体效价测定。1.3判断标准1.3.1外观均应为无色或淡黄色的澄明液体，无异物。1.3.2破伤风抗毒素原料血浆效价按中国药典

10、三部（2010版）附录XIF破伤风抗毒素效价测定法（小鼠试验法）对破伤风抗毒素原料血浆进行效价测定，应不低于1000IU/mLo13.3肉毒抗毒素原料血浆效价按中国药典三部（2010版）附录XIH肉毒抗毒素效价测定法（小鼠试验法）对肉毒抗毒素各型原料血浆进行效价测定。肉毒A型原料血浆效价应不低于1000IU/mL,B型应不低于600IU/mL,E型应不低于600IU/mL,F型应不低于200IU/mL。14统计学分析使用SigmaPlot软件对各马免疫血浆效价下降的趋势进行分析。2结果2.1破伤风免疫血浆稳定性2.1.1外观及效价检测结果由表1所列可见，破伤风马免疫血浆28T条件下稳定性良好。

11、28勾条件下放置12个月，外观及效价均符合标准要求。20无条件下放置12个月，外观在3个月均出现轻度混浊,12个月均呈浑浊状，并可见团块絮状物;效价在1、3、6、12个月时均有不同程度的下降，中、高效价组的效价仍在合格标准范围内，但低效价组在12个月时，效价已降至950IU/mL，不符合标准要求。37T条件下放置12个月，外观在1个月时就出现轻度混浊;效价在1、3、6、12个月时均有下降，中、高效价组的效价虽有下降，但仍在合格范围内;低效价组的免疫血浆在6个月时，效价已降至950IU/mL，不符合标准要求。表1破伤风免疫血浆稳定性Tab.1Thestabilityofimmunizedplas

12、mawithtetanustoxoids时28T20r37°C间T-20120601T-20120502T-20120301T-20120601T-20120502T-20120301T-20120601T-20120502T-20120301（月）外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价0-1500-2250-2500-1500-225025001500-2250-25001-1500-2250-2500-1500-22502500+1500+1900+22503-1500-2250-2500+1400+2250+2500+1250+1500+205

13、06-1250-2250-2250+1050+2050+2250+950+1250+190012-1250-2050-2250+950+1700+2050I700+1050+1600注:外观-：澄清，+:轻度浑浊,+:浑浊;效价单位：IU/mL。2.1.2破伤风免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势如图1所示，随着时间的延长,破伤风免疫血浆效价均有不同程度的降低，且温度越高效价降低幅度越大。2.2肉毒各型免疫血浆稳定性2.2.1外观及效价检测结果由表2所列可见，肉毒各型马免疫血浆在28Y条件下，放置12个月稳定性良好，外观及效价均符合标准要求。20T条件下放置12个月,3个月时各型外观均出现轻度混

14、浊;效价在1、3、6、12个月时均有不同程度的下降;其中低效价组比中、高效价蛆的效价下降明显。37幻条件下放置12个月，1个月时各型外观就都出现轻度混浊,12个月时外观呈黏稠糊状,无法进行效价检测,判定为失效°效价在1、3、6、12个月时均有下降,6个月时高、中、低效价组的效价均低于合格标准要求。图1破伤风免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势Fig.1Thetrendsoftetanustoxoidsimmunizedplasmapotencyatdifferenttemperatures表2肉毒各型免疫血浆稳定性Tab.2Thestabilityofimmunizedplasmaby

15、differentserotypesbotulinumtoxoids时间（月）2-8r2or37V.A-201203Q外观效价A-20120302外观效价A_2O12O5O外观效价A-201203Q外观效价A-20120302外观效价A-2O12O5O1外观效价A-201203Q外观效价A-20120302外观效价A_2O】2O5O外观效价0-1100-1500-2000-11001500-200()-1100-1500-20001-1100-1500-1980-1100-500-1800+1080+1350+16203-1100-1440_1980+1080+1440+1800+950+10

16、80+14006-1180-1400_1800+1080+1350+1500+720+900+108012-1080-1300-1800+855+1215+1260+/+/+/时28V20X.37T间B-20120301B-20120302B-20120501B-20120301B-20120302B-2012O5O1B-2O12O3O1B-20120302D-2D12O5O1（月）外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价0950-1100-1350-950-1100-1350950-1100-13501_950-1100-1350-950-950-1350+8

17、20+800+11003-950-1100一300+935+950+1260+700+600+8006-935-1000-1200+850+920+1120+360+360+45012800935-1035+715+800+950+/+/+/时28r20T37r间E-20111201E-20120301E-2012O5O1E-20111201E-2D120301E-2D12O5O1E-2DH1201E-2D12O3O1E-2D12O5O1（月）外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价0650-900-1080650-900-1080650900-10801_65

18、0-850-1000_650-850-1000+540+800+8003-650-850-990+540+800+900+500+600+6006_600-800-900+500+600+800+360+450+45012600800850+450+503+540+/+/+/时28°C2or37r间E-20I20201F-2012D40IF-20120501F-20120201F-20I21M01F-2012050)F-2O12O2O1F-20120401F-2D12O5O1（月）外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价外观效价0220310400220310

19、-400-220310-4001_220-310-400-220-310+400+200-310-3153-220310-400+220+305+400+180+240+2406-220-305-400+210+305+375+100+100+21012215305400+205+295+360+/+/+/注:外观-：澄清,+：轻度浑浊，+：浑浊,+极度混浊,/：血浆凝固无法检测;效价单位：IU/mL。2.2.2肉毒各型免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势如图2所示，随着时间的延长，肉毒各型免疫血浆效价也均有不同程度的降低，且温度越高效价降低幅度越大。时间（月）b肉毒B熨免疫血浆在不同温度条件下

20、的效价趋势(串)场送B-时间（月）a肉毒A型免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势-l(M)1''*口013612时间(月)(8)辞蹬H-8t*_()01-013612时间(月)c肉毒E型免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势d肉毒F型免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势图2肉毒各型免疫血浆在不同温度条件下的效价趋势Fig.2Thetrendsofpotenciesforimmunizedplasmabydifferentserotypebotulinumtoxoidsatdiflerenttemperatures3讨论马免疫血浆的采集、分离、贮存、运输等通常由血浆场来完成，在此期间对马免疫血浆的温度控制很大程度上决定着抗毒素类制品的质量。中国药典三部（2010版）规定马免疫血浆应“保存于冷暗处”，对具体的存放温度区间并未进一步明确说明。血浆场若对马免疫血浆保存温度掌控的不适当，会引起免疫血浆效价的降低，不但给抗毒素生产厂家增加后期纯化负担，而且会造成抗毒素类产品的质量波动。实验结果表明:破伤风及肉毒A、B、E、F型马免疫血浆在28Y条件下，放置12个月稳定性良好,外观