阿尔茨海默病的疫苗研究进展.docx

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4、涛(北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院，北京thelialgrowthfactorinadvancednon-smallcelllungcancer(J).ClinChemt2003；49：523-4.31谢田刖，李志.杜彬,等.血曾内皮生长因子在肺癌患者血清及体液中的表达J.检验医学与临床，2004；1(1)：60-3.32 MatKuyamaW,HashiguchiT,MizoguchiT,etal.SerumlevelofvascularendothelialgrowthfactordependentonthestageprogressionoflungcanccrfJ).Che

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6、pulmonaryadenocarcinoma(J).AnticanccrRes,1997；17：2811-4.35 OhtaY,OhtaN,TarnuraM.clal.Vascularendothelialgrowthfactorexpressioninairwaysofpatientswithlungcancer(J).Chest,2002；121：1624-7.36田辉,曹丙振，王善政VEGF在非小细胞肺癌中表达的意义J).实用癌症杂志J998；13(2)：206-7.(2007-03-25收稿2007X)6-19修回(编辑张慈)100044)关键词）阿尔茨海默病;B-淀粉样哉白；疫苗中

7、图分类号）R749.1文献标识码）A文童编号1005-9202（2009）12-1577-04阿尔茨海默病（AD）,由德国医师AloisAlzheimer于1906年育先发现,并以其名字命名。这是一种渐进性的神经退行性疾病，其临床特虑是逐渐出现记忆力减退、认知功能障碍、行为异常和社交障碍:最终丧失独立生活能力，发病后10-20年因并发症死亡。在病理方面，该病有三大特征：大脑皮层及海马区的P淀粉样蛋白（A0）在胞外积累井形成老年斑（SP）、脑神经细胞内lau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结（NFT）、神经元突触功能异常及锥体神经细胞丢失。目前人们普遍认为Ap是AI）发病机制的核心。Ap来源于其前

8、体物质淀粉样前体蛋白（APP）。APP是一种瘠膜债白质，在体内各种组织广泛存在，在脑组织的表达最高。APP代谢产生Ap的过程是APP被。和分泌酶裂解为具有40.42或43个氨基酸的分子。A。分子具有自发聚合的能力，它能够在细胞外聚集成基金项目：国家863计划项R（2006AA02A247）通讯作者:何金生（1964-）,男，教授，硕士生导师.主要:从事抗体工程药物和病毒基因工程疫苗研究。第一作者：王食（1985-）,男，硕士，主要从事抗体工程药物研究。寡聚体、纤维和斑块等淀粉样沉积物。淀粉样沉积物可以诱导细胞凋亡,导致神经细胞损坏。已经发生异常积聚的A。蛋白还诃以启动mu蛋门的过磷酸化过程。经

9、过异常过磷酸化修饰的tau蛋白，将构成神经原纤维缠结的核心。新的研究显示，不仅已经发生沉积的AP蛋白，A0分子的寡聚体也可通过干扰大鼠脑部海马区神经元突触问的长时程增强作用而影响突触的可塑性，干扰学习记忆。以清除A。斑块为目的的A。疫苗，是治疗AD的页要方法。1A。肽疫苗、治疗机制1999年Schenk等用分子为多肽疫苗免疫PDAPP转基因小鼠，经过治疗，幼年小鼠脑组织没有产生AP沉积、神经细胞萎缩等AD的典型病变。已经发病的老龄鼠，治疗后病变明显减轻。此后，众多学者开始采用AO*肽疫苗免疫TgCRND8.Tg2576.APP/PSl和PDAPP等转基因模型小鼠，取得了不同程度的疗效，大脑组织

10、内A。沉积减轻°-幻。这些研究表明，A。肽疫苗诱导机体产生Ap特异性抗体是清除或抑制脑组织内A3沉积及改善认知的主要因素。目前推测抗体的作用机制主要有四个方面。Bard等认为A0抗体穿过血脑屏障结合在A。,通过其Fc部分与小胶质细胞的Fc受体相互作用介导小胶质细胞吞噬A。抗体直接作用于Ap并使其解聚和降解"°）。“外周血沉槽”假说,认为抗体与外周血中A0结合使外周血中A3大*减少，进而改变了AB在大脑组织和外周血中的动态平衡，使大脑组织中过多的小分子量的AR穿过血脑屏障进入外周血，减轻中枢的A。负担近期研究认为,抗体对患者脑组织内A。斑块的清除，可能是上述各种因素

11、共同作用的结果，同时抗体对炎性细胞因子及补体的抑制作用也是其中页要的因素（四。基于AQ疫苗在动物实验的良好结果和一期临床实骑中安全剂仙的确定,2001年对372名中度AD病人进行临床Ha实验。使用的疫苗是人工合成的ABf（AN】792）,免疫佐削为皂角昔（QS-21）,它是一种Th型佐剂。300名患者接受治疗,72名作为对照。不幸的是在接受治疗的患者中有18名出现了脑膜炎。由于治疗可能存在的副作用，该疗法在2002年1月被全面停止）。有关A0疫苗导致脑炎发生的机制，认识尚不一致。由于尸检时,在患者的脑膜内发现大量的T细胞乂润，说明可能是抗原引起的T细胞介导的自身免疫反应引发了脑膜炎。因此，一般

12、认为AN1792的毒副作用可能是由于ApM2包含较多的T细胞抗原决定筑，疫苗引起了较强的T细胞和小胶质细胞反应,而且所用佐剂QS-21主要引起Th-1型免疫反应，增强了T细胞反应，促进脑膜炎症的发生。其他可能的机制包括:抗体激活小胶质细胞的异常活化，抗体介导的补体活化，以及抗体错误的识别了正常神经细胞表面的APP蛋白从而启动了半胱氨酸蛋白酶所依赖的细胞凋亡途径。在免疫治疗中，抗体不仅能清除脑内的Ap斑块，对沉积在血管壁上的斑块同样具有清除作用，从而导致脑血流异常患者的症状加重，导致血管病变的发生。针对APP23转基因鼠的被动免疫试验的研究发现负载AP的脑血管内有很多小的出血点。可能的原因是随着

13、衰老，脑血管平滑肌丢失，血管壁变脆。而沉积在血管壁上的A。斑块正好起到了密闭剂的作用。应用免疫治疗后，产生的抗体清除了脑血管内沉积的A从而导致血管壁通透性加大，发生了脑出血。2新型疫苗:表位疫苗由于全长ApM2含有可引起应答的T细胞表位（ABg），是肽免疫治疗引起无萌性脑膜炎的主要原因，因此许多研究采用合成的A3M端115个/基酸或由部分嬴基酸构成的B细胞表位作为疫苗，以提高安全性。Frenkel等用噬菌体展示Ap分子N端的EFRH或AEFRH表位治疗各种模型小鼠，取得了与全长A°y疫苗相似的治疗效果（M'，6,OSeabrook等将16个串联的Ap,_15偶连在分枝状的赖氨

14、酸核心上,免疫J20APP-tg小鼠产生体液免疫应答，大脑组织内斑块明显减少5）。除了以转基因鼠进行的实验外，也有使用与人类更接近的灵长类动物进行实验的报道。Gandy等对2只15岁的恒河猴免疫A0y，产生抗A|3抗体,血液中Ap增加，大脑组织中Ap水平无变化。Lemere用A。*与的混合物免疫长尾黑领猴，产生的抗A3抗体町以识别AD病人尸体大脑组织中的Ap斑块，可以识别A0单体和寡聚体，不识别APP。脑背液中有低滴度的抗体，脑肯液中A0*与减少质。李少兵等分别使用A&与邮邱免疫恒河猴，血清中均产生抗AQg抗体,分别诱导了Th-1型和Th-2型的免疫应答。免疫组化方法观察抗血清可以识别

15、Tg2576转基因鼠小脑脑组织中的Ap斑块函气3病毒栽体疫苗张建民等使用腺相关病毒载体表达霍乱毒素B与A0y的融合蛋白，经滴鼻、口服或肌肉注射途经一次给药，诱导PDAP-P'F转基因小鼠产生特异性抗体，小鼠记亿力与认知能力有较大改善，大脑组织中A0沉积减少向二Kim等将串联重复11次的A0”与假单胞菌外毒素受体结合结构域融合的蛋白PE-DI-（Ap14）的基因连人腺病毒载体及真核表达质粒中，采用质粒初免-腺病毒加强的免疫策略可诱导Tg2576小鼠产生较强的Th-2型免疫反应，显示异源初免加强免疫策略更加安全、有效。4核酸疫苗核酸疫苗其有安全性好、成本低、纯化方便等优点。在AD的免疫治疗

16、研究中，受到高度重视。Qu等使用基因枪将编码与A。*的质粒接种到双转基因AD模型小鼠APPswe/PSEN1体内，仅诱导小鼠产生具有保护作用的体液免疫反应，避免了细胞免疫应答的产生3）。He等构建了4种PV-GE质粒分别编码Ap的4个不同的抗原表位与小鼠lg分子重链的融合蛋白,经肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,研究表明表达ApDAEFGH表位的质粒疫苗可以诱导BALB/c小鼠产生最有效的体液免疫，作为分子佐剂,BCG-DNA具有较好的免疫增强作用,但不会改变质粒疫苗诱导的免疫应答类型作）。Okura等8在不使用佐剂的情况下，用可分泌表达ABy或表达ApM2与人Ig分子Fc段融合蛋白的裸DNA

17、疫苗，通过肌肉注射途径，诱导APP23模型小鼠产生了低到中等水平的Ap特异性抗体反应，脑蛆织内A。负荷诃降低50%,没有出现脑膜炎和针对Ap的T细胞反应。Qu等：”）构建了可表达全长ApM2的表达质粒，并用基因枪导入APPswe/PSME9转基因模型小鼠及恒河猴中，产生了Th-2型抗体（IgG】），大脑组织中Ap水平降低41%,血液中Ap上升43%,大脑皮层和海马区Ap沉积分别减少51%和52%，股质细胞活性下降。5问题和展望抗Ap抗体被动免疫疗法能够降低大脑组织中Ap含量并提高认知能力，说明细胞免疫反应并不是清除A。所必需的，因此设计疫苗时的靶点应该只瞄准Th-2型反应，提高Th-2型反应，

18、尽可能降低Th-】型反应。这就需要减少T细胞的抗原决定簇,只保留B细胞抗原决定藤，同时选用Th-2偏向型佐剂。许多研究表明经过A。疫苗免疫过的小鼠，猴子和人所产生的抗体绝大多数是识别A。分子的氨基末端（Ap,.l6）,这说明Ap分予的B细胞抗原决定簇存在于氨基末端。因此国内外许多学者使用各种只包含A3分子氛基末端的抗原（如Ap.15）进行免疫治疗，结果动物脑组织内Ap水平降低，沉积斑块减少，这说明可以用A0表位疫苗代替全长Ap分子用于主动免疫治疗。A。表位疫苗往往需要与外源性T细胞表位偶连形成多聚抗原肽，以产生高效价的抗体，并能避免T细胞将A0分子或APP分子作为自身抗原响活化，然而在人体内这

19、能否避免T细胞性脑炎的发生还需要做大笛的研究匚作。还有人提出所用的抗原不应该剌激机体产生强烈的体液免疫反应，而是产生较为温和的体液免疫反应。设计DNA疫苗也同样应该遵循提高Th-2免疫反应，降低Th型反应的原姻。.以前使用各种转基因小鼠作为动物模型来评价免疫治疗效果及疫苗的安全性，但由于小鼠的血脑屏障的结构以及产生抗体的类型与人类的存在差异，无法完全模拟人体的真实状况，没有表现出人体试验中所出现的自身免疫反应性脑炎以及脑萎缩等并发症.因此转基因小鼠作为评价疫苗安全性的动物模型存在巨大缺陷。而使用与人类遗传更加接近的灵K类动物进行治疗效果及安全性的评价更准确更具说服力°尽管临床实验中少

20、数患者出现了副作用，但应该看到绝大多数的患者症状得到明显的改善，说明免疫疗法具有一定疗效。相信随着对AD发病机制认识的逐浙深入，免疫治疗作用机制的不断明确，疫苗制备技术的发展，更加可毒的灵长类动物模型的建立以及评价体系的完善，将来会制备出疗效更好而且无毒副作用的疫苗。6参考文献WalshDM,KiyubinI,EadeevaJV,etal.Naturallysecretedoligomersofamyloidbetaproteinpotentlyinhibithippocampallong-termpotentiationinvivo(J).Nature,2002；416(6880)：535-

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34、(长春市口腔医院，吉林长春130042)关键词)辛伐他汀;新骨生成中图分类号R782.1文献标识玛A文章编号1005-9202(2009)12-1580Q2由于先天性畸形、外伤、肿瘤及失牙后废用性萎缩等原因，需要进行不同程度的骨缺损修复或骨增豪治疗。目前新骨生成的方式很多，像骨块移植、各种骨代用品的运用、骨引导再生技术以及微观领域的细胞因子、转基因工程等多方面,但总的来说都存在技术复杂、费用高、周期於、甚至有生物学不安全性等缺点。近年来国内外研究发现，辛伐他汀(simvastatin,Sim)可影响骨组织的生长代谢，促进新骨生成，而旦加速新骨生成，具有廉价、方便等诸多优点。现将Sim在口腔应用

35、的最新研究做一综述。1 Sim的结构和特性Sim是羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂家族中的一员。从70年代起至今临床广泛用降低血清胆固酵，预防心血管疾病。除降低血脂的作用之外,Sim还有很多其他作用，如可以减少平滑肌细胞的移行和增殖，抑制肿瘤生长和转移.导致细胞周期停滞和程序性死亡,影响细胞外基质的表达等。有研究还发现Sim表现出调控骨形成发生蛋白-2(BMP-2)基因的表达，调节骨代谢、炎症和血管发生等作用。Mundy等于1999年从可激活BMP-2基因启动子的小分子物质入手，测试了超过30000种样品后,确定他汀类药物是唯一一类能有效启动BMP-2基因表达增加的物质;并从促BMP-2niRNA表达，小鼠颅顶骨皮下注射促新骨形成，去势大鼠,口服给药骨合成增加三方面进行实验论证.均有明显的阳性结果。国内叶伟胜等也做了相关研究，发现SimA有刺激骨形成的作用，促使人们对Sim有了新的认识。Sim大部分被肝脏摄取，由胆汁排泄，95%可与血浆蛋白结合。2 Sim促进新骨形成作用及其机制他汀类作用骨组织的机制目前还不明确，但最诃能通过以下几个途径。2.1通过启动BMP-2基因表达的成骨细胞途径目前已知