中药尿酸利仙含药血清对TNF

1、中药尿酸利仙含药血清对TNF a诱导的人血管内皮细胞VCAM ImRNA表达的影响一【摘要】目的：观察中药尿酸利仙含药血清对肿瘤坏死因子 ctTNF ct诱导的人血管内皮细胞ECV血管细胞黏附分子 1VCAM lmRNA表达的影响。方法：体外培养人血管内皮细胞，分别用不同浓度12.5、25、50卩g/ml的 TNF d刺激；体外培养人血 管内皮细胞，培养液中参加TNF Q至终浓度为25 a g/m,分别孵育细 胞& 16、24、48小时。用25 a g/ml的TNF Q孵育细胞16小时， 同时用含不同浓度2.5% 5%、10%中药尿酸利仙含药血清的培养液进 行干预，用逆转录聚合酶链式反

2、响RT PCR技术测定血管内皮细胞VCAM ImRNA表达。结果：低、中、高浓度TNF q刺激均可显著上 调血管内皮细胞VCAM ImRNA表达po.o1,各刺激组间差异无统计 学意义P>0.05o 25 a g/ml的TNF Q在16、24和48小时均可显著上调 血管内皮细胞VCAM ImRNA表达po.o1,各干预组间差异无统计学 意义P>0.05>低、中、高浓度的中药尿酸利仙含药血清干预均可显著 降低VCAM ImRNA表达po.o5, po.01。结论：中药尿酸利仙含药血 清可抑制VCAM ImRNA过度表达，可能是减轻TNF q诱导的人血管 内皮细胞炎症损伤及抑制炎

3、症反响的机制之一。【关键词】中药尿酸利仙血管细胞黏附分子1TNF Q人血管内皮细胞AbstractObjective:Toi nv estigatetheeffectofNiaoSua nLiXia neon tai nin gserumonexpressionofvascularcelladhesionmolecule(VCAM l)mRNAinvasculare ndothelialcellsinducedbyTNF a.Methods:Vascularendothelialcellswascult uredandstimulatedwithdifferentdensityfn.SS.an

4、dSOg/mlJofTNF ainvi tro,.Atthesametime,theceiiswe reco incubatedwith25pg/iriIdensityofTNF afor8J16/24/and48hours.Theywereintervedbydifferentdensity(2.5%;5%Ja ndlO%)oflliaoSuanLiXiancontainingserum.TheexpressionofVCAM ImRN AinvascularendothelialcellswasdetectedbyRT PCR.Results:Theexpression ofVCAM Im

5、RNAinvascula rendothelialcellsinducedbyTNF aincreasedsig ni fica ntly(P0.01),but no differe ncewas no tedbetwee ndiffere ntde nsitygroups. TheexpressionofVCAM lmRNAinvascularendothelialcellsinducedbythe25 pg/mldensityofTNF aincreasedsignificantlyafterl6,24;and48hourincubati on (P0.01).NiaoSua nLiXia

6、 neon tai nin gserumatallexperime ntalde nsitysig nific antlydown regulatedtheexpressionofVCAM lmRNA(P0.05,P0.01)<onclusion:Down regulatingtheexpressionofVCAM linvasculare n dothelialcellsmaybe on eofthemecha nismsofNiaoSua nLiXia nreduci ngthei n flammatoryinjures.KeywordsherbalNiaoSuanLiXianvas

7、cularcelladhesionmoleculeTNF avascu laren dothelialcells高尿酸血症是除高胆固醇血症、高血压、糖尿病、吸烟等冠心病 (coroaryheartdisease,CHD主要危险因素外的又一被公认的高危因子。 如今控制高危因素的意义不仅在于调控目标值，而是通过抗血管壁的炎症来控制动脉粥样硬化atherosclerosis,As,减少心脏事件的发生。 笔者用中药尿酸利仙颗粒剂治疗高尿酸血症，在临床应用多年取得较 好的效果。本文旨在探讨中药尿酸利仙含药血清抗黏附、抗血管壁慢 性炎症的分子机制。1实验材料1.1主要试剂RPMI1640培养液、胎牛血清F

8、CS和青霉素、链霉素为英国 GibcoBrl公 司产品;二性霉素B、胰蛋白酶均为美国Sigma公司产品;RNA提取试剂 Trizol、逆转录和PCR扩增试剂盒、引物合成均购自上海生物工程公司。1.2内皮细胞株血管内皮细胞株endotholialcellofvessels,ECV由浙江中医药大学友情提 供。1.3内皮细胞培养将细胞复苏后，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液内含青链霉 素各100u/ml培养，消化传代采用0.25%胰酶，0.02%EDTA培养条件 为 5%CO2 37C。1.4人血清制备正常人血清制备选择体检合格的年轻志愿者 4名，晨各抽空腹血15ml,共60ml,离心，

9、 取血清，超滤，置-40 C冰箱保存备用。含药血清制备 以上4名志愿者，给服尿酸利仙颗粒剂，每天 2次定点、定时服用， 第5天晨空腹将2次的药并一次服下，2小时后抽血各15ml,共60ml。 离心，取血清，超滤，置-40C冰箱保存备用。2实验方法2.1不同浓度TNFQ对人血管内皮细胞VCAM linRNA表达的影响分为4组，空白对 照组用io%正常人血清的RPMI 1640培养液培养，TNF q低、中、 高浓度刺激组在空白对照组根底上分别参加TNF Q,浓度分别为12.5、 25、50 卩 g/ml2.2不同时间TNFQ对人血管内皮细胞VCAM lrnRNA表达的影响分为5组，空白对 照组10%正常人血清的RPMl 1640培养液培养，8、16、24、48小时 TNF Q刺激组培养液中参加TNF Q至终浓度为25 a g/ml，分别孵育 细胞& 16、24、48小时。2.3中药尿酸利仙含药血清对 TNFQ诱导的人血管内皮细胞VCAM ImRNA表达的影响分为5组，空 白对照组用