实验四玉米须中黄酮和多糖的提取

1、实验四 玉米须中黄酮和多糖的提取 、鉴别与含量测定（设计性实验）一、目的与要求通过对玉米须中黄酮和多糖的分步提取、 鉴别和含量测定， 掌握天然产物的 提取、鉴别和含量测定的方法。二、基本原理黄酮类化合物多为结晶性固体，少数 （如黄酮苷类 ）为无定形粉末。黄酮类化 合物多为黄色，其颜色的深浅与其是否具有交叉共扼体系、助色团的多少有关， 一般具有交叉共轭体系的黄酮类化合物 （如黄酮、黄酮醇、查耳酮 ） 多呈黄色或颜 色较深，而不含有交叉共轭体系的黄酮类化合物 （如二氢黄酮、二氢查耳酮、异 黄酮 ）多为无色或颜色较浅。黄酮类化合物在紫外光下一般具有荧光，荧光的颜 色与分子的结构有关。 黄酮类化合物的

2、溶解度因其结构及存在的状态 （苷或苷元、 单糖苷、双糖苷或三糖苷 ）不同而有很大的差异。一般的游离黄酮苷元难溶或不 溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈等有机溶剂及稀碱中。黄酮类化合 物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于热水、甲醇、乙醇及稀碱溶 液，而难溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂。游离黄酮和黄酮苷一 般都含酚羟基，故都可溶于碱中，加酸后又沉淀出来，可利用此性质提取、分离 黄酮类化合物。玉米须中含黄酮类物质，能清除羟基和DPPH自由基，有调节小鼠脂质代谢、 抗衰老和抗疲劳作用。 研究结果表明低浓度的玉米须提取物也有很好的抗氧化能 力。多糖又称多聚糖（polysacc

3、haride）,由单糖聚合成聚合度大于10的极性大分 子，分子量为数万至数百万， 是构成生命活动的 4 大基本物质之一， 与生命的多 种生理功能密切相关。 多糖是自然界含量最丰富的生物聚合物， 几乎存在于所有 生物体中。多糖的种类繁多， 传统水提法是研究和应用的最多的一种方法。 水提 法可用水煎煮提取，也可用冷水浸提。玉米须多糖在玉米须中含量14%,是玉米须最主要的水溶性成分之一。 大 量试验证明多糖具有抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、抗凝血 等多种功效。三、仪器和试剂1. 仪器圆底烧瓶、冷凝管 烧杯2只，10mL、50mL量筒各1个，滤布，滴管，蒸 发皿， pH 试纸，玻璃棒，

4、恒温槽，减压装置一套。紫外分光光度计，容量瓶。2. 试剂玉米须10.0g（干燥至恒重，过40目筛，精密称取）乙醇、蒸馏水、浓盐酸、 浓硫酸、苯酚、三氯化铝、锌粉、萘酚四、实验步骤1g玉米须放入150ml的圆底烧瓶中，以30倍水量、恒温水浴锅加热至90 °C， 开始计时，反应1h，离心3min （3500转/min），上清液抽滤，1. 提取（1）黄酮苷取玉米须柱头2.0g放入圆底烧瓶中，以1 : 20为料液比，用60%乙醇于80C 水浴内提取1h;倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取 液过滤后，置 50mL 容量瓶中定容。（2）多糖取玉米须柱头2.0g放入圆底

5、烧瓶中，以1 : 20为料液比，用蒸馏水于90C 水浴内提取1h，倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取 液过滤后，置 50mL 容量瓶中定容。2. 鉴别（1）a萘酚试验（Molisch紫环反应）取检品的水溶液1ml，加5%萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入5- 6滴浓硫 酸，使成两液层，待 23 分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或甙类）。多糖类遇浓硫酸被水解成单糖， 单糖被浓硫酸脱水闭环， 形成糠醛类化合物， 在浓硫酸存在下与a萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。（ 2）盐酸一镁（或锌）粉试验取检品的乙醇溶液1ml，加放少量镁粉（或锌粉），然后加浓盐酸4-5滴，

6、 置沸水浴中加热 2-3分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加 镁或粉做一对照， 如两管都显红色则有花色素存在。 如继续加碳酸试液使成碱笥 即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素） 。黄酮类的乙醇溶液， 在盐酸存在的情况下， 能被镁粉还原， 生成花色甙元而 呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色） 。这是由于酮类化合 物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即锌 盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身在酸性下（不需加镁粉）呈红 色，应加以区别。3. 含量测定方法（ 1 ）黄酮含量测定2g玉米须40mL乙醇，提取出来的提取液浓缩至接近 50m

7、L （小于50mL）， 然后用60%乙醇定容至50mL，摇匀，过滤， 精密移取续滤液4mL于10mL容 量瓶中，精密加入0.1mol/L三氯化铝甲醇显色剂溶液4ml，摇匀，定容，放置 10 分钟。以 60%乙醇为空白，测定吸光度，代入上述回归方程中，计算出百分 含量。Y=29.302X+0.0213相关系数：r=0.9999。黄酮在4ug-20ug/mL范围内，吸 收度和糖含量呈良好的线性关系。（ 2）多糖含量测定取玉米须柱头2.0g放入圆底烧瓶中，以1 : 20为料液比，用蒸馏水于90E 水浴内提取1h，倒出，加入10mL溶剂提取30min，共提取2次，合并两次提取 液过滤后，置50mL容量

8、瓶中定容。取滤液5mL，定容于25ml容量瓶，摇匀。从25ml容量瓶中移液0.5ml至10mL具塞试管，加1ml5%苯酚，3.5ml浓硫酸， 40C恒温水浴30min，自然冷却15min至室温，在490nm处测吸光度，在标准 曲线上计算出浓度， 最后计算出得率。 同时精密吸取蒸馏水 0.5ml, 于 10ml 试具 塞试管中，加入5%苯酚溶液1 mL,迅速加入3.5ml浓硫酸，迅速摇匀，同法做空 白在 490 nm 波长处测定吸收度 （A） 值如下：y=0.0038+5.91x相关系数尸0.9999,在糖含量60140卩g/mL范围内，吸收度和 糖含量呈良好的线性关系。模块二实验五 高锰酸钾法

9、测定蛋壳中 CaO 的含量 （设计性实验）一、实验目的1. 学习间接氧化还原测定 CaO 的含量。2. 巩固沉淀分离、过滤洗涤与滴定分析基本操作。3. 培养学生理论联系实际， 独立进行 实验的能力二、实验原理鸡蛋壳的主要成分为CaCQ,其次为MgC03、蛋白质、色素以及少量的 Fe、 Al。利用蛋壳中的Ca2+与草酸盐形成难溶的草酸盐沉淀，将沉淀经过滤洗涤分离 后溶解，用高锰酸钾法测定C2O：含量，换算出CaO的含量，反应如下：22Ca2 C2O42CaC2O4CaC 2O 4 H 2SO4 CaSO 4 H 2C 2 O 425H2C2O4 2MnO4 6H 2Mn2 +10CO2 8H2O

10、2某些金属离子（Ba2+，Sr2： Mg2+，Pb2+, Cd2+等）与C2°4能形成沉淀对 测定Ca2+有干扰。三、实验步骤1. 蛋壳的处理。2. CAO 含量的测定。四、思考题1. 用高锰酸钾滴定草酸根时，应注意哪些事项？2. 用 （NH4）2C2°4沉淀Ca2+，为什么要先在酸性溶液中加入沉淀剂，然后在7080C时滴加氨水至甲基橙变黄，使 Ca2C2°4沉淀？3. 为什么沉淀要洗至无 Cl 离子为止？4. 如果将带有Ca2C2°4沉淀的滤纸一起投入烧杯，以硫酸处理后再用KMn°4 滴定，这样操作对结果有什么影响？实验十一 三草酸根合铁（

11、III ）酸钾的制备、性质和组成分析综合性实验）、实验目的1掌握三草酸根合铁（III）酸钾的制备方法。2. 熟悉化学分析、热分析、电导率测定等方法在化合物组成分析中的应用。3了解三草酸根合铁（III）酸钾的光化学性质。二、实验原理三草酸根合铁（III）酸合成工艺有多种，例如，可采用氢氧化铁和草酸氢钾 反应；也可用硫酸亚铁铵与草酸反应得到草酸亚铁，再在过量草酸根存在下用过氧化（）本实验采用三氯化铁和草酸钾直接反应制备。K3Fe（C2O4）3 3H2O 为亮绿色晶体，溶于水（0°C时 4.7g/100g水，100C时 117.7g/100g水），难溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。110C失去结

12、晶水，230C分解。 该配合物对光敏感；可进行下列光反应：2 K3Fe（C2O4）3 :2FeC2O4+3K2C2O4+2CO2f因此，在实验室中可用碱草酸根含铁（III）酸钾作成感光纸；进行感光实验。 另外，由于它具有光的化学性质，能定量进行化学反应，常用作化学光量计材料。用稀H2SO4可使三草酸根合铁III酸钾分解产生F0和C2O2-用高锰酸钾标准溶液滴定试样中的C2O2-此时Fe'+不干扰测定滴定后的溶液用锌粉还原为。过滤除去过量的锌粉，使用高锰酸钾标准溶液滴定Fe2+通过消耗高锰酸钾标 准溶液的体积及浓液计算得到C2o4-和Fe3%£含量。用电导体测定配合物的摩尔电导

13、体 Km可确定阴，阳离子数目之比，从而确 定配合物离子的电荷数，进一步确定化学式和原子结合的方式三、主要仪器和试剂天平，台秤，电导率仪，抽滤瓶，布氏漏斗循环水泵，棕色容量瓶，烧杯, 量筒蒸发皿。草酸钾（k2c2o4 H2O,化学纯）三绿化铁（FeCl3 6H2O,化学纯）,K3 Fe（cn）6（化学纯）,NaoH（2mol/L）,H 2SO4（2mol/L,0.2mol/L）, kMno4 标准溶液（0.0200mol/L）锌粉（分析纯）,丙酮。四、实验内容与步骤1. 三草酸根合铁（III）酸钾的制备称取12g草酸钾放入100mL烧杯中，加20mL水，加热使全部溶解.在溶液近沸 时边搅拌加入8

14、mL,三氯化铁溶液（0.4g/mL），将此溶液在冷水中冷却既有绿色 晶体析出，析出完全后减压过滤得粗产品。将粗产品溶解在约20mL热水中，趁热过滤。将滤液在冰水中冷却，待结 晶完全后抽滤晶体产物先用少量冰水和丙酮洗涤，晾干，称重，计算，产率2. 配合物的组成分析 C2O4的测定准确称取约1g合成的三草酸合铁（III）酸钾绿色晶体于 烧杯中，加入 25mL 3mol/L 的硫酸使之溶解再转移至 250mL 容器瓶中，稀释至 刻度，摇均。移取25mL试液于锥形瓶中加入 20mL3mol/L硫酸，在7080C水浴中加热5min 后，趁热用高锰酸钾标准溶液滴定到溶液呈浅粉色，且 30s 不褪色即为终点

15、，计下读 数。平行测定三次，每次滴定完后溶液保留。 F0的测定往上述滴定后的每份溶液中加入 1g锌粉、5mL3moL/L硫酸 振荡 810min 后，过滤除去过量的锌粉，滤纸用另一个锥行瓶承接。用40mL0.2mol/L 的硫酸溶液洗涤原锥行瓶和沉淀，然后用高锰酸钾标准溶液滴定 到溶液呈浅粉色， 30s 不褪色即为终点计下读数平行测定三次。 配离子电荷的确定，称取产品0.1g，配成100mL溶液。在电导率仪上测 其电导然后求出摩尔电导率 km 值 根据上述结果分析配合物的组成3. 光化学性质 将少量产品放在表面皿或点滴板上， 在日光下放置一段时间， 观察晶体颜 色的化与放在暗处的晶体比较。 称

16、取0.5g产物和0.4K3 Fe(cn)6,加5mL水配成溶液，用玻璃棒或毛笔 取在纸上涂画，在日光直照下，观察变化。或者将此混合液均匀涂在纸上，放 暗处晾干后，附上图案，在强光下照射，观察变化。五、注意事项制备三草酸根合铁(III)酸钾时，可以往溶液中加入少量丙酮或乙醇，促使 晶体析出完全。六、思考题写出Fe(C2O4)33-的结构式。1. 三草酸根合铁( III )酸钾固体和溶液应如何保存？2. 用化学式表示本实验卩£+和C2O4-的测定原理。3. K3Fe(C2O4)3与K3Fe(CN)6混合物为什么在光照产生蓝色物质？4. 设计实验方案，定性说明产物中的 FeT和C2O?是处

17、在配合物的外界还是 内界。5. 产物中的K+可以用什么方法进行定性和定量分析？实验十二 彩色固体酒精的制备及燃烧热测定一、实验目的1. 了解彩色固体酒精的制备原理、用途，掌握其制备方法。2. 了解燃烧热的定义、氧弹量热计的结构、工作原理，学会用氧弹量热计测定固体酒精的燃烧热。二、实验原理固体酒精制备过程中涉及的主要化学反应式为：C17H35COOH+NaOH=C17H35COONa+H2O 反应后生成的硬脂酸钠是一个长碳链的极性分子，室温下在酒精中不易溶， 在较高的温度下， 硬脂酸钠可以均匀地分散在液体酒精中， 而冷却后则形成凝胶 体系，使酒精分子被束缚于相互连接的大分子之间， 呈不流动状态而

18、使酒精凝固， 形成固体酒精。三、主要仪器与试剂1. 仪器三颈烧瓶（100mL）,回流冷凝管，电热恒温水浴锅，天平，电动搅拌器， 氧弹量热计，贝克曼温度计或数字精密度 /温差测量仪，容量瓶。2. 试剂硬脂酸（化学纯） ，酒精（工业品， 90%），氢氧化钠（分析纯） ，酚酞（指 示剂），硝酸铜（分析纯） ，苯甲酸（分析纯） ，棉纱，引火丝，氧气钢瓶。四、实验步骤安全预防：酒精易燃，避免明火。1. 彩色固体酒精的制备用蒸馏水将硝酸铜配成 10%的水溶液，备用。将氢氧化钠配成 8%的水溶液， 然后用工业酒精稀释成1:1的混合溶液，备用。将lg酚酞溶于100mL60%的工 业酒精中，备用。分别取2.5g工业硬脂酸、50mL工业酒精和两滴酚酞置于100mL 三颈烧瓶中，水浴加热，搅拌，回流。维持水浴温度在70C左右，在冷凝管上方滴加上述 1: 1 的混合溶液，直至溶液颜色由无色变为浅红又立即褪掉为止。 继续维持水浴温度在70T左右，搅拌，回流反应10min后，一次性加入1.5mL10% 硝酸铜溶液再反应5min后，停止加热，冷却