高效液相法测定斯诺普利原料的含量(精)

1、高效液相法测定斯诺普利原料的含量更新日期： 2011-09-26 杨正管刘锡钧摘要本文建立了高效液相色谱法测定斯诺普利的色谱条件。以Shimpack CLC-ODS 为固定相，甲醇： 0.1的磷酸溶液（ 3565v v）为流动相，流速1.0 ml min，柱温 40，紫外检测波长 220nm，内标物苯巴比妥，内标法定量，在所检测的浓度范围内（ 3.3841692gml ），峰高比与样品浓度之间的线性关系良好（ r 0.9999）。日内差 5.41，日间差 6.39，原料药中杂质峰与药物峰分离良好，方法的重现性好。由测定结果表明，该方法操作简便，灵敏度高，分析速度快，可以作为斯诺普利的含量测定方

2、法。关键词斯诺普利高效液相色谱Determination of S-nitrosocaptopril by HPLC Yang Zhengguan，Liu Xijun（ Department of Clinical Pharmacology，Fuzhou General Hospital of NanjingMilitary ，Fuzhou）AbstractThe HPLC method was founded to determination ofS-nitrosocaptopril.The chromatographic condition：stationary phase was Shi

3、mpackCLC-ODS，mobile phase was a mixture of methanol：0.1 phosphate acid in a ratio of 365（vv）at flow rate of 1.0 ml.min 1， detector was set at 220 nm， internal standard was barbiphenyl.There is linear relationship between concentration of 3.384 ml and 1692 gml.The precision of method were5.4（ inter-d

4、ay） and 6.39（ intra-day） .The raw material and impure material of S-nitrosocaptopril was wellseparated.The results show that the method is simple，fast and accurate.Key wordsS-nitrosocaptoprilHPLC斯诺普利（ S-nitrosocaptopril，简称 CapNO）是以卡托普利（Cap）为化学母核，将后者的巯基改造为亚硝酰巯基（SNO）后形成的一种在体内既可释放一氧化氮（NO），又具有血管紧张素转化酶抑制

5、剂（ ACEI ）双重性质的一类新化合物1。其可抑制血管紧张素转化酶，减少血管紧张素的生成和防止缓激肽酶的降解；具有的NO 特性，可直接对抗已生成的血管紧张素、肾上腺素等体内缩血管物质的作用，因此，斯诺普利具有良好的抗高血压作用 2。文献检索表明，美国、日本、韩国等国家关于本品的原料药合成、生化作用和药理作用的研究较多，但是，由于无法获得其纯净的晶体，尚未开发成产品。福州总院留美学者贾力博士在国际上首次采用简易的水相合成方法合成了斯诺谱利并获得了该物质较纯的结晶物，有关方法已经获得中国专利3。本文采用高效液相色谱法研究了测定其原料含量的色谱条件。1仪器、试剂和药品UV-2201 紫外分光光度计

6、（日本岛津）；惠普-1100 高效液相色谱仪（美国惠普公司）； pHS-3C 数字式 pH 计（上海理达仪器厂）；斯诺普利（福州总院药理科合成）；甲醇（分析纯上海试剂四厂昆山分厂）；磷酸（分析纯广州化学试剂分公司）；异丙醇（分析纯福建师范大学附属试剂厂）；乙酸乙酯（分析纯蚌埠化学试剂厂）；蒸馏水为双重蒸馏水，新鲜使用。 2方法 2.1紫外吸收光谱精密称取 1.34 mg 斯诺普利，置于50 ml 容量瓶中，配成 26.8 gml 的溶液，于 UV-2201 紫外分光光度计上，在200 600 nm之间绘制光谱，未见明显的吸收峰；再称取30 mg 斯诺普利于 100ml 容量瓶中，配成 300

7、gml 的溶液，在 200 600 nm 之间绘制光谱。由图可知其最大吸收峰在331.90 nm，吸收度为 1.030。由此可见，如选择331.9 nm 作为检测波长，若浓度为纳克级就因响应值太低而检测不出信号。参考卡托普利的色谱条件4，将检测波长选在 220 nm 处。 图 1斯诺普利测定的液相色谱图A 苯巴比妥 B 斯诺普利C 斯诺普利苯巴比妥2.2高效液相色谱法色谱条件色谱柱为 C18，15×6.0 mm 不锈钢柱，流动相为甲醇：0.1磷酸溶液（ 3565），固定相为Shimpack CLC-ODS，流速 1.0 mlmin，检测波长 220 nm，灵敏度为 0.05 AUFS

8、，柱温40，进样量5 l，色谱记录时间30 min。测其保留时间tR 12.32 ±0.23min，内标物保留时间tR 10.09 ±0.14 min（见图2）。 图2HPLC测定斯诺普利的标准方程曲线系统适用性试验5色谱柱的理论塔板数（n）在上述操作条件下，注入5 l CapNO（16.92 gml ）共进样 3 次，量出 CapNO 的 tR和半高峰宽（Wh2）后，求出其理论塔板数为：n1799分离度（ R）在上述操作条件下，定量注入5 l配制的混合样品（含斯诺普利和苯巴比妥），求出二峰之间的分离度R 4.24。拖尾因子（T）依药典规定（附录VD ），配制 3 种不同浓

9、度的 CapNO 溶液（ 33.84， 169.2，1692 gml），分别进样 3 次后，均为： 0.9T1.0。标准曲线的建立标准贮备液的配制精密称取斯诺普利 169.2 mg，置于 50ml 容量瓶中，用流动相溶解，稀释至刻度，摇匀，制成浓度为3384 gml的溶液，放置冰箱中备用。内标物的配制精取苯巴比妥0.019 g，置于50 ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。再从中吸取5 ml，置于 50 ml 容量瓶中，稀释到刻度，摇匀后，作为内标物备用。标准曲线分别精密量取斯诺普利贮备液5 ml ，2.5 ml， 0.5 ml，0.1 ml，0.05 ml，0.01 ml 置于 10 ml 容量瓶后，各分别加入2 ml 内标物液，以流动相稀释至刻度，摇匀，分别取5 l进样，用3 次测得的峰高比平均值（Y ）对溶液的浓度（C）作图。在3.3841692gml浓度范围内，峰高比和溶液的浓度呈线性关系，其回归方程为：Y 0.0137053C0.00232754 r 0.99996（n6）（见图 2）。精密度试验日间差分别取斯诺普利贮备液5 ml，0.5 ml，0.1 ml， 0.01 ml 置于 10 ml 棕色容量瓶后，各分别加入 2 ml 内标物液，以流动相稀释至刻度，摇匀，每隔24 h 进样 1 次，每次 5