实验室常用溶液配制

1、实验室常用溶液的配置Amp +/Kan +:贮存液浓度为 50mg/mL称取500mg于10mL超纯水中溶解，抽滤后1mL分装到离心管中，于-30°C 冻存X-gal :贮存浓度为20mg/mL称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中，-30C中用锡箔纸包裹后避光保 存，不需要过滤除菌IPTG :贮存浓度为 L称取2g IPTG溶于8mL超纯水中，用水定容到10mL，用的一次性滤过器过 滤除菌，1mL分装到离心管中并于-30C保存CaCl2 :贮存浓度为1mol/L称取 CaCl (或者CaCI:2H2O )溶于8mL超纯水中，定容到10mL，用0,22um 的一次性滤过器过

2、滤除菌，1mL分装到离心管中，并于-30C保存LB 培养基 :胰蛋白胨( Tyrtone)10g/L酵母提取物( Yeast Extraction)5g/L氯化钠 10/L根据经验用 NaOH 调节 PH 为，然后高压蒸汽灭菌，注意及时从灭菌锅中取出 无 DNA 酶的 RNA 酶:将胰 RNA 酶(RNA 酶 A)溶于 10mmoI/L Tris-CI ()、15mmoI/L NaCI 中, 配成10mg/mL的浓度，于100C加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保 存于-20 CBradford 贮存液95%乙醇 100mL88%磷酸 200mLG 250室温下可储存，一般 4CBra

3、dford 工作液Bradford 贮存液 30mL 双蒸水 425mL 95%乙醇 15mL 88%磷酸 30mL 储存于 4C超声破碎缓冲液KCI 300 mM gKH 2PO4 50 mMgEDTA 1 mMg(EDTA-2Na-2H 2O)g定容至1 L，调pH至包涵体洗涤液KCl 300 mMgKH 2PO4 50 mMgEDTA 5 mMg(EDTA-2Na-2H 2O)g尿素 2 M 120 gTriton X-100 % 5 ml 脱氧胆酸钠盐 % 1 g 定容到1 L 调pH至匀浆缓冲液( pH= )成分：20mM HEPES = 加入MgCl2 = 加入EDTA = 加入N

4、aCl =0. 58g 加入钒酸钠 = 加入加 100mL 水进行溶解， NaOH 调 pH 至DTT 总体积500 Z加入PMSF 总体积500 Z加入20 yL1%SDS 力卩入 50 yL10% SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入，SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液，溶于乙酸钠(pH=)中，过滤除菌PMSF 配成 10mM 母液，溶于异丙醇10*PBSNaCl gKCl gNa2 H PO4gKH2PO4g水定容至1L，使用时稀释10倍，用NaOH调pH至Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts.

5、Adjust the pH to with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a 3?final concentration of 10 mM PO43?, 137 mM NaCl, and mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized by autoclaving (20 min, 121 °C, liqu

6、id cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should be kept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.转膜缓冲液（含有 SDS）1L 剂

7、量甘氨酸TrisSDS甲醇 200mL水 800mL 10Xg白电泳缓冲液1L 剂量Tris 碱（Mr甘氨酸（Mr 188gSDS （Mr 10 g加水至 1L用时稀释 10 倍即可30丙稀酰胺1L 剂量丙烯酰胺 290gN,N'-亚甲基双丙稀酰胺10g溶于600ml蒸馏水中，加热至37C溶解，补足体积至1L,过滤，且pH不大于1 M Tris-Cl （）g Tris 碱溶解于 400ml 蒸馏水，溶解后调 pH 值，总体积为 500mlM Tris-Cl （）Tris碱溶解于400ml蒸馏水，溶解后调pH值，总体积为500ml。加约浓盐酸， 再调整到 500ml 体积1M DTT用2

8、0mL L乙酸钠溶液（pH=）溶解DTT，过滤除菌后分装考马斯亮蓝 R-250 染液在90mL甲醇：水（1:1）和10mL冰乙酸混合液中溶解考马斯亮蓝 R-250，过滤后室温保存蛋白酶 K（20mg/mL）灭菌的 50 mM Tris（ pH ）， mM 乙酸钙溶解， 配置成浓度为 20 mg/mL 的溶液，-20C保存流式缓冲液 PBS+5% FBS+% sodium azideWater 45 mL20%叠氮钠 50 Z10*PBS 5 mLFBS mL文献常见配方： PBS+% BSA(5-10% FBS)+% sodium azide酸酐称取50 g重铬酸钾（KCrO4）溶于80mL双

9、蒸水中，90C中溶解2h，每半小时 搅拌促进溶解，溶解完成后，加入 1000mL 硫酸，分装于 2 个瓶子中。注意使用 过程中，如果其中一瓶的效果不好，不要混合使用。使用 5次，就要重配。滴管酸酐中浸泡24h，自来水冲洗至无明显可见颜色，自来水正反面各20遍，双蒸水正反面各 20 遍，复印纸中包裹，烘干，加棉花塞和胶头，单独包装，灭菌， 烘干。双抗（青霉素和链霉素）g链霉素和80W U青霉素，一起溶于8ml PBS,单位分别为10A5 ug/ml和10A5 U/ml，然后稀释10倍，分别为10A4 ug/ml和10八4 U/ml，使用时，按照1%加入， 分别为 100 ug/ml 与 100

10、U/ml严去甘 I培养基 I2% FCS， 1%双抗， 128uL/40mL 肝素钠， RPMI 1640严去甘 II培养基 II% FCS， 1%双抗， 128uL/40mL 肝素钠， RPMI 1640完全培养基10% FCS（5% FCS+5% 鱼血清）， 1%双抗LPS称取2mg LPS溶于1mL PBS中，叩滤膜过滤，硅化离心管，-20C保存1*Turk 染液Gen tian Violer （结晶紫）50mgAcetic Acid （冰乙酸） 5mLWater 495mL1% 巴比妥钠1g巴比妥钠溶于100mL的PBS中，充分混匀，避光保存（80 ug/g用量）诱导小鼠腹腔巨噬细胞所

11、需溶液硫代硫酸盐肉汤培养基 （Thioglycollate broth） ：称取3 g,加入到100 ml纯水中，高温121 C灭菌15 min,然后冷却到室温, 再重复 2 次，进行老化操作。此时已经溶解，呈现透明溶液。冲洗液：RPMI 1640 +1%双抗培养基：RPMI 1640+10% FBS+1% 双抗氯化铵红细胞裂解液(10X的储存液)参考流式中文网g NH4Cl M)g NaHCO3 (100 mM)g EDTA 二钠 (10 mM)加水至900 ml,然后用1M的HCI或1M的NaOH调节pH值至。最后加水至1 升。该10*的储存液可在4C保存6个月。工作液的配制：在使用前蒸馏

12、水稀释 10 倍即可。(1 份储存液加上 9 份水)。工 作液用来裂解红细胞。不能以 <10*的浓度储存,否则会形成碳酸铵而失效。ACK 裂解液参考文献 Dynamic variation in cycling of hematopoietic stem cells in steady state and inflammation, JEM, 2011ACK (Ammonium-Chloride-Potassium) Lysing BufferAmmonium Chloride 150 mM MwPotassium Bicarbonate 10 mM MwEDTA mM MwACK Ly

13、sis Buffer (1L)Component Amount Final ConcentrationNH4Cl gKHCO3 g 10mMEDTA 200 uladd ddH2O to 800 ml, adjust pH to - , finalize volume to 1L with ddH20Red Blood Cell Lysis Using ACK Lysing Buffer1) Collect whole blood by venipuncture in EDTA-treated collection tubes.2) Pipette 1mL EDTA-treated whole

14、 blood into a tube containing 10-20 mL of ACK Lysing Buffer at room temperature.3) Allow the blood sample plus ACK Lysing Buffer to incubate at room temperature for 3 5 minu tes. Lysis of the red cells should be evide nt duri ng this in cubati on.4) Collect the white blood cells by centrifugation at 300 x g for 5 minutes at room temperature.5) Aspirate the supernatant, leaving approximately 50 uL to avoid disturbing the pellet.6) Gently mix the cells and the remaining fluid, then add 5 mL cold phosphate buffered saline.7) Mix the cells and phosphate buffered saline, and then collect the cell