(完整word版)WatersXevoTQS液相色谱质谱操作

1、文件类型研究所作业指导书化学所文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第1页共6页Waters Xevo TQ-S 液相色谱 /质谱联用仪(三重串连四级杆质谱 )操作指南1. 适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S 液相色谱 /质谱联用仪 (三重串连四级杆质谱 )。2. 仪器设备的主要技术指标：1) 梯度性能： 保留时间标准偏差（ SD） 0.047min。2) ESI 正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度： 0.1pg/ l指标要求：平均信噪比（ S/N）3000:1；平均峰面积 60000；

2、峰面积相对标准偏差（ %RSD）3.0%；保留时间标准偏差（ SD）0.047min测试结果：信噪比（ S/N）:4500psi；峰面积： 120000；峰面积相对标准偏差（ %RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（ SD）： 0.00min，均符合指标要求。3) ESI 负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素 (chloramphenicol)，浓度： 0.05pg/ l指标要求：平均信噪比（ S/N）400:1；平均峰面积 1000；峰面积相对标准偏差（ %RSD）3.0%；保留时间标准偏差（ SD） 0.047min测试结果：信噪比（S/N） :520psi；峰面积： 1500；峰面积相

3、对标准偏差（ %RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（ SD）： 0.00min，均符合指标要求。4) 系统精密度（ TUV/PDA ）：峰面积相对标准偏差（ %RSD） 0.5%；峰高相对标准偏差（ %RSD） 0.9%。5) NanoFlow 正离子灵敏度7指标要求：峰强（ m/z =785.8） 1 10，测试样品：Glu-Fibrinopeptide B ，浓度： 100fmol/ l测试结果：峰强度（ m/z =785.8）： 1.48 107；符合指标要求。6) TRIZAIC 正离子模式 MS 说明：测试样品： ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59,

4、 ENL T43, ADH T17, BSA编写李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型研究所作业指导书化学所文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第2页共6页T10, PHO T88指标要求：保留时间标准偏差：0.25%测试结果： ADH T19 ：标准偏差为0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为 0.03% (25.12min)；ENL T4 ：标准偏差为 0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为 0.01% (21.58min)；ENL T43 ：标准偏差为 0.04% (22.33min)；ADH T17 ：标准偏差为 0.0

5、3% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为 0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为 0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试： 测试样品 17-OHP。一维保留时间重复性 (PDA) 指标：保留时间标准偏差 (SD): 1.0s；一维峰面积重复性 (PDA) 指标：峰面积相对标准偏差 (%RSD): 0.5%；一维峰高重复性 (PDA) 指标：峰高相对标准偏差 (%RSD): 0.9%；二维系统精密度测试： 测试样品 17-OHP。二维保留时间重复性 (PDA) 指标：保留时间标准偏差 (SD): 1.0s；二维峰面积重复性 (PD

6、A) 指标：峰面积相对标准偏差 (%RSD): 0.5%；二维峰高重复性 (PDA) 指标：峰高相对标准偏差 (%RSD): 0.9%；所有检测方式的回收率指标： 90.0%3. 仪器设备的使用环境要求：1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。2) 工作温度： 19-22 度，不要超过 25，保持恒温。3) 相对湿度： 50%-70%4. 操作程序：4.1 开机打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。UPLC各选择 Instrument MS Tune进入调谐界面

7、。从调谐界面选择Vacuun编写李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型研究所作业指导书化学所文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第3页共6页pump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作。质谱上的真空灯开始闪烁， 当系统达到真空状态， 灯变为绿色， 不再闪烁，同时观察调谐界面 Diagnostics Turbo Speed泵转速达到 100%即可，达到实验状态大约要抽真空 4小时（注意：真空规，测量工具，无异常状况通常无需打开，尤其在刚开始抽真空时不要打开。）气源压力设置：氮气： 90-100psi。氩气： 0.05Mpa，不超过 0.1Mpa（实验前确认氩

8、气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。）4.2 准备 UPLC 系统准备流动相： 用0.22 m的膜过滤缓冲液， 所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。 缓冲盐一定要可挥发的， 而且浓度在 2mM-5mM 之间，不要超过 10mM （注：若流动相含有缓冲盐，用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱，若流动相含有酸，必须为挥发性酸， 浓度范围为 0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求 PH2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂）。有机相要使用原装进口的色谱纯。（ 2） SW+Purge（弱洗：10%ACN+90% 纯水或者与流动相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和

9、密封清洗；Wash（强洗： 90%ACN+10% 纯水）；（3）准备样品：所有样品最好都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22 m的膜过滤。初始化 UPLC 泵：在 Masslynx主页面上点击 MS Console，进入系统控制界面，点击左边 Quaternary Solvent Manager选择 CONTROL Prime A/B/C/Dsolvent，选择 A/B/C/D 输入 1min，如果更换了流动相则输入3min，按 start。初始化 UPLC 自动进样器： UPLC控制台上选择 Sample Manager，选择Control Prime syrings，灌注进样器

10、和洗针系统。选择 Sample syringe and syringes， Number of cycles 一般选 1，但在更换洗针溶液后选 3。完成后， UPLC 自动进样器准备好。灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。4.3 建立一个 Project如果在已有的 Project 下进行试验，此步可以不做。编写李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型研究所作业指导书化学所文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第4页共6页从 Masslynx 主窗口选择 FileProject Wizard，出现对话窗口，点击 Yes，输入 Project Name，选择 Create u

11、sing existing project as template.点击 Browse 选择project 的模板。4.4 准备质谱如果在已有的 Project 下进行试验，此步可以不做。MS Tune，首先打开氮气，再开高压（红色表示高压已关，绿色表示高压已开）。（注：一定要打开氮气和高压才能开流动相，关闭流动相后才能关高压和氮气 ）。点击 ES+ Source. 输入以下各参数 : Capillary (kV): 3；Cone (V): 30；DesolvationTemp ( ): 550；Desolvation(L/hr): 800 ；Cone (L/Hr): 50 ；以下参数最好直接

12、使用 intellistart 自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resolution 1: 3；HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15；Ion Energy 2: 0.5； Collision: 2 。4.5 ESI 调谐调出目标化合物的最佳质谱参数。把调谐液放入 A/B/C 号位（注： 浓度在 0.1-1ppm 之间，根据实际的灵敏度调整样品浓度 ）。把流动相的流速设为 0.2ml/min ，有机相和水相比例为 1:1。点击 Tune 界面下的 Fluidics，点击 P

13、urge syringe 灌注注射器。 设置 Infusion 流速 5uL/min ，根据灵敏度可适当调整。设置 Flow State 模式（ Infusion:直接进样； Combined: 液相和样品混合进样； LC: 液相进样； Waste:废液）。选择 Xevo TQ-S MS Detector 下面的 IntelliStart ：Sample Tune and Develop Method 点击 Start，调出界面，输入各参数，系统开始自动优化目标化合物的质谱参数。4.6 建立质谱的 MRM 方法。选择 InstrumentMS Method 进入质谱方法编辑界面。 打开新建质谱

14、方法窗口，再点击 MRM ，按调谐结果输入下列参数：离子模式、化合物名称、母离子质量编写李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型研究所作业指导书化学所文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117 第5页共6页数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和MRM运行时间等。4.7 建立UPLC方法。选择 Instrument Inlet Method 进入 UPLC 方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。最后把UPLC 的方法命名保存。4.8 建立样品运行序列表，运行采集数据。在 Masslynx 主界面上点击 FileNew，新建序列表，输入文件

15、名、注释、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最后把编辑好的序列表命名保存。4.9 处理数据。4.10 关机一般质谱仪部分不需要关机，不用时只要保持在Standby 状态下即可。但如果长时间不用，或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。首先停止液相色谱流速， 如果还需要冲洗色谱柱， 可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。点击 MS Tune进入调谐窗口，点击 Standby，关闭高压，让 MS进入待机状态时，指示灯会由绿色变成红色。等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。选择 OptionVent ，这时质谱开始泄真空，待机械泵停止运行，同时观察调谐界面 Diagnostics Turbo Spe

16、ed泵转速为 0时即可关闭质谱电源。5. 仪器基本维护与使用注意事项：5.1 仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。5.2 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。5.3 溶剂和流动相的要求，所有的流动相都要用 0.22 m的滤膜过滤，水相要用前新配，并不得超过两天。 样品必须使用 0.22 m的滤膜过滤 。5.4 ESI 离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA ）多用于蛋白质和多肽分析， 但对 ESI 离子化有抑制效应：三乙胺（TEA ）在 m/z 102 处有较强的 M+H+ 峰，有可能会抑制某些碱性化合物编写李秀琴审核人批

17、准人日期2009.1文件类型作业指导书文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-117研究所化学所第6页共6页在正离子ESI 条件下的离子化，也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下的响应。注意！下列的溶剂添加剂会产生严重的离子化抑制，建议禁用：强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐（如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等）、表面活性剂、离子对试剂。5.5 定期清洗样品锥孔：关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：水：甲酸（ 45:45:10）的溶液超声清洗 20min，然后分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟，待晒干后再安装到仪器上。当灵敏度下降时，需要清洗Ion Block 、二级锥孔和 RF lens。5.6 实验完毕要清洗进样针、进样阀等，用过含酸的流动相后，色谱柱、离子源都要用甲醇 /水冲洗，延长仪器寿命