(完整word版)发酵与酶实验考试题目111

1、1 培养基配好后，为什么必须马上进行高压蒸汽灭菌？如不能及时灭菌，应将培养基暂时放至何处？为什么？答：如果不马上进行高压蒸汽灭菌的话， 在配制培养基过程中落入培养基中的微生物，即我们说的杂菌就会开始利用培养基中的营养物质开始生长繁殖， 这是我们不想要的，因为这就造成了培养基的污染。 所以我们一般要在配制完培养基之后马上灭菌。暂放在冰箱里，低温保存，延缓了杂菌的生命活动。2. 在发酵罐使馆灭菌结束时，为什么在温度没有降到常温就要通入无菌气体？答：通常降到常温容易再次被染菌 灭菌不彻底3.在分批发酵中， 单细胞微生物的生长一般经历那四个时期？各个时期的特点有什么？其中，第一个期是什么原因造成的？答

2、：延滞期、对数生长期、稳定期、衰亡期延滞期的特点是：分裂迟缓，代谢活跃。对数生长期的特点是：细菌数量以几何级数增加。稳定期的特点是：新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等。衰亡期的特点是；活菌数按几何级数下降。延滞期出现的原因， 可能是为了重新调整代谢。 当细胞接种到新的环境后， 需要重新合成必需的酶类、 辅酶或某些中间代谢产物， 以适应新的环境而出现生长的延滞期。4. 在发酵液糖的测定中，我们配置了什么显色液，如何配制，简述配制过程？答：将 50ml 浓硫酸缓缓加入 10ml 水中冷却至室温，加入 0.6g 苯酚晶体搅拌使其溶解配成显色液。5. 乙醇沉淀纯化蛋白质的原理是什么？操作过程中应该

3、注意什么问题？据你所知还有其他粗分离蛋白质的方法吗？答： 1、有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子上不同电荷的引力，使蛋白质溶解度下降； 2、有机溶剂与水作用，能破坏蛋白质的水化膜，使蛋白质的溶解度下降。此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。盐析法、等电点沉淀法6. 简要说明本实验固定化蔗糖酶原理和步骤？答：原理：通过物理或化学的方法，将水溶性的酶与水不溶性载体结合，使酶固定在载体上，并在一定的空间范1. 壳聚糖载体的制备及戊二醛的偶联（ 1）称取 3 g 壳聚糖溶于 98 mL蒸馏水中，搅拌均匀，再滴加2 mL冰醋酸，搅拌至均匀的粘稠状。（ 2）称取 8 g NaOH

4、 置大烧杯中，加入 180 mL 蒸馏水及 20 mL 甲醇。（ 3）将拔出推塞的注射器架在铁架台上，倒入粘稠状的壳聚糖溶液，使壳聚糖溶液从 20 cm 高的注射器出口滴入大烧杯中，以制备壳聚糖微球载体。（ 4）壳聚糖溶液滴加完毕后，静止片刻，待微球完全沉入烧杯底部时，反复水洗多次至 pH 值中性，沥干水分。加入 1%戊二醛溶液 100 mL，静置 2 h ，使戊二醛偶联于壳聚糖载体上。2. 固定化酶的制备（ 1）将静置 2 h 后的壳聚糖微球载体中的戊二醛溶液倒掉，再用蒸馏水洗涤5次，以除去多余的戊二醛。（ 2）将实验一纯化得到的酵母蔗糖酶酶液1 mL 用蒸馏水稀释至100 mL, 与偶联戊

5、二醛的壳聚糖载体混合， 静置偶联过夜。围内进行催化反应的酶称为固定化酶。7. 人们进行酶的化学修饰的一般目的是什么？本实验的化学修饰剂对蔗糖酶的修饰作用呈现什么样的效果？从实验结果你能得出什么样的结论？答：目的： 1. 研究酶的结构与功能的关系。 2. 认为改变天然酶的某些性质，扩大酶的应用范围。 提高酶的生物活性增强酶的稳定性消除抗原性产生新的催化能力N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）能特异地修饰蛋白质分子中色氨酸残基的吲哚基团，使吲哚基氧化成羟吲哚衍生物， 从而改变吲哚基的化学性质。 若色氨酸残基是酶活性中心的必需基团， 那么经 NBS修饰后，酶活性丧失的程度与修饰剂的浓度有化学计量关系，且在底

6、物存在的情况下，修饰剂 NBS不影响酶的活力。不同浓度的 NBS对酵母蔗糖酶活力影响不同。8. 你认为该如何评价一种固定化酶的效果？分别测游离酶、固定化酶以及残留酶液的酶活力活力回收 =固定化酶总活力数×100% 、相对活力溶液酶总活力数固定化酶总活力数=×100%9. 进行温度对酶活性影响测定时，操作上有什么要注意的？答：顺序为：底物、控制温度、酶，低温不会导致酶失活，只是酶活性极低甚至可以为零，但温度升高仍可复性，也就是说一旦先加酶，后加常温的底物，在低温下的酶在常温的底物作用下就可以复性，仍可催化淀粉水解。10. 酶学性质研究一般要做哪些相关参数的测定？答：酶活力的测定、酶比活力、酶活回收率、酶比活力提高比也就是纯化倍11. 回收率和纯化倍数怎样计算得到？答：总活力的回收率纯化后总活力 / 纯化前总活力 *100%。纯化倍数 =酶制剂的比活力 / 抽提液的比活力12. 假设测定酶活时得到的吸光值大于 1，将如何改进实验，使得