寨卡媒介伊蚊监测指引

1、国境口岸伊蚊专项监测方案为有效落实国家质检总局关于寨卡病毒病和黄热病传播媒介伊蚊及携带病原体专项监测的要求， 标准国境口岸范围内及输 入性伊蚊监测操作，特制定本方案。一、监测 目的一掌握国境口岸伊蚊种类构成、 密度、分布及季节消长 和长期趋势。二掌握国境口岸媒介伊蚊及输入性伊蚊携带寨卡病毒、 黄热病度的情况。三为寨卡病毒病和黄热病风险评估、预测预警、控制规 划提供科学依据。二、监测对象国境口岸及输入性伊蚊，以及所携带病原体。三、监测范围国境口岸及周边 400 米环境范围， 各检验检疫机构可根据本 口岸实际适当扩大监测范围。 入境交通工具 包括船舶、 航空器、 列车等、集装箱、货物、快件及邮包等

2、。四、监测时间2021 年 4 月-11 月，每月中旬监测 1 次。五、监测方法一诱卵器法1. 器具 ：无盖黑色诱卵器、白色滤纸、标签纸等。2. 方法 ：每个监测点放置 50 个诱卵器，各诱卵器间隔不少 于 10 米，连续放置 7 日，于第 4、 7 日分别检查、收集诱到的 成蚊及蚊卵，记录阳性容器数。3. 密度计算：诱蚊诱卵器指数=阳性容器数/回收有效的容器数X100%二BioDiVector BDV 帐诱法1. 器具：选用BDV蚊帐外层：长X宽X高：2.2m X1.9m x 1.8m ;内层：长x宽x高：1.0m X0.7m xi.8m 该蚊帐可自制或 定制，见图 1 、计数器、电动吸蚊器

3、等。2. 方法：在上午 9 时和下午 4 时各 1 小时伊蚊活动顶峰时段 内，将蚊帐悬挂，诱集者位于内部封闭蚊帐中，在诱蚊开始前， 诱集者通过操作装置将外帐下摆降低至地面; 诱蚊开始时通过该 装置将外帐下摆升至离地面 300mm 高，在监测时间内任由蚊虫 飞入外帐内;诱蚊结束后再通过操作装置将外帐下摆降低至地 面，阻止进入帐内的蚊虫逃逸。 此时，诱集者可涂抹驱避剂或穿 戴防蚊设备， 出内帐， 用普通电动吸蚊器捕获帐内蚊虫， 捕获的 蚊虫带回实验室分类计数， 进行种类鉴定和病原体检测。 并记录 诱蚊开始与结束的时间、地点、温度、湿度和风速。3. 密度计算：蚊密度【只/ 顶小时】=雌蚊数量/ 蚊帐

4、数诱蚊时间六 、 风险评估 根据国家标准和国家疾病预防控制中心的风险评估数据， 建 议诱蚊诱卵器指数大于 5，或 /和帐诱蚊密度大于 3 为有传播风 险;诱蚊诱卵器指数大于 10，或/和帐诱蚊密度大于 6 有爆发风险 ; 诱蚊诱卵器指数大于 20，或 /和帐诱蚊密度大于 12 有区域流行 风险，需要持续去除孳生地和杀灭成蚊。七 、 输入性伊蚊监测 采集通过入境交通工具、集装箱、货物、行李、邮包等带入 境内的伊蚊， 分类计数，并送实验室进行种类鉴定和病原体检测。 船舶输入性伊蚊重点监测的货物为原木、 活动物和废旧物品， 重 点监测的部位为旧轮胎、缆绳堆、绞缆机底座、溢油池、对外开 放的仓库、 舱

5、口及生活区外围、 大型设备包装物和甲板的小型积 水、驾驶台和底层的走廊及房间等。八、 种类鉴定捕获到的成蚊均应进行种类鉴定， 具备条件的实验室应对蚊 幼虫进行种类鉴定或对其幼虫进行饲养， 待其羽化为成虫后进行 种类鉴定。九 、 病原体检测一 生物平安病毒 RNA 提取和扩增操作应符合生物平安要求。二操作环境消毒实验完毕后， 所有可用高压消毒的物品均应在实验室内做高 压消毒，不能用高压消毒的物品及实验台面和污染设备外表用有 效的消毒剂消毒，实验室用紫外线灯消毒。三病毒检测1. 实时定量逆转录聚合酶链式反响 RT-PCR 本方案病毒检测采用 RT-PCR 法。2. 仪器设备荧光定量PCR仪，生物平

6、安柜，普通冰箱， -70 C超低温冰 箱，普通台式离心机，高速冷冻离心机转速可达 20000g ，微 量可调移液器10 d、100山、1000 M及配套带滤芯吸头， EP 管 1.5mL ，涡旋器。3. 试剂各检验检疫机构可根据本口岸实际选取适宜的 RNA 保存液、 病毒核酸提取试剂盒和 RT-PCR试剂盒。MEM和Hank '液可采 用商业化产品，也可自行配制参见表 1 。标本处理液：在新鲜配制的 95mL MEM中参加56 C热灭活 30min 的胎牛血清 2mL、 1mL 庆大霉素 5000dg/mL、 1mL 两 性霉素B 250 pg/mL 和1mL青链霉素青霉素 G 100

7、00U/mL、 链霉素10000 pg/mL ，用7.5%碳酸氢钠溶液调至 pH7.2.4. 检测程序 1 标本保存和运输低温法：将采集的活体蚊虫直接放入-20 C冰箱冻死后取出，在冰盘上分类，编号，按 30 只一份，装入 2mL 螺口塑料管内， 用耐低温油性记号笔记上编号，于-70 C以下保存待检。已死亡蚊虫必须要在 4 小时以内完成上述操作。 样 本使用液氮或干冰运 送，干冰需完全覆盖送检样本。RNA保存液法：将采集的活体蚊虫直接放入 -20 C冰箱冻死 后取出，在冰盘上分类，编号，按 30 只 1份，装入盛有 RNA 保 存液的 2mL 螺口塑料管内，用耐低温油性记号笔记上编号，于 -2

8、0 C或以下温度保存待检。已死亡蚊虫必须要在4小时以内完成上述操作。 RNA 保存液中的蚊虫样本可使用常规冰袋运送。2标本处理在冰上操作。从-70 C容器或RNA保存液中取出蚊虫标本， 倒入研磨器中，参加 Hank 's 液 1mL 吹洗，弃去液体后参加 1mL 标本处理液，反复研磨至组织碎片根本消失，随后将研磨液吸入 1.5mL EP离心管，配平后置预冷 4 C离心机上，20000g离心 10min 。取上清液进行核酸提取，剩余的蚊标本研磨液需保存在 -70 C冰箱以备复查。3病毒核酸提取 直接采用病毒核酸提取试剂盒，按照说明书操作。4实时荧光 RT-PCR 检测实时荧光 RT-PCR 的检测操作和结果的判读按照相应商品试剂盒说明书进行表1. MEM配方成分用量 / mg/L氯化钙200氯化钾400无水硫酸镁97.67氯化钠6800无水磷酸二氢钠121.74L-精氨酸盐酸盐126L-胱氨酸盐酸盐31L-谷氨酰胺292L-组氨酸盐酸盐42L-异亮氨酸52L-亮氨酸52L-赖氨酸盐酸盐72.5L-蛋氨酸15L-苯丙氨酸32成分用量 / mg/LL-苏氨酸48L-色氨酸10L-酪氨酸36L-缬氨酸46D-葡萄糖1000酚红6D-泛酸