医学专题—细菌的生长和遗传变异-1课件

1、医学专题细菌的生长和遗传变异-1第三章第三章 细菌细菌(xjn)的生长和的生长和遗传变异遗传变异第一页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1主要(zhyo)内容n3-1 细菌的生长及特性细菌的生长及特性(txng)n3-2 细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异第二页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1一、生长与繁殖一、生长与繁殖(fnzh)的概念的概念二、细菌生长的测定方法二、细菌生长的测定方法三、细菌的生长特性三、细菌的生长特性四、微生物膜的生长特性四、微生物膜的生长特性第三页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-13-1-1 生长生长(shngzhng)与繁殖与繁殖同化

2、作用大于异化作用时，细胞质的量增加，表现在细胞体积或重量(zhngling)的不断增加，这种现象称生长。生长一定程度后细胞分裂，这就是(jish)繁殖。个体的生长和繁殖体现为群体的生长。（微生物重量或数目的增加）。 群体生长个体生长个体繁殖群体生长个体生长个体繁殖在微生物学中“只有群体的重复”才有意义，因此“生长”一般指群体生长。第四页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-13-1-2 细菌细菌(xjn)的生长测定方法的生长测定方法计数法l直接计数法借助显微镜l间接(jin ji)计数法平板计数生长量测定法l测定重量、体积、含氮量来反映(fnyng)细菌的生长第五页，共六十八页。医学专题

3、细菌的生长和遗传变异-1（一）（一） 计数法计数法1、直接(zhji)计数法（显微镜）涂片染色法：一定量样品涂布在载玻片上，染色后计数。滤膜染色法：一定量样品过滤到滤膜上，然后染色计数。比例计数法将已知颗粒(kl)浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自的数目。第六页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1涂片涂片(t pin)(t pin)染色法染色法第七页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1第八页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1计数器计数器( (血球血球(xuqi)(xuqi)计数板）计数板）测定法测定法 第九页，共六十八页。医学专题细菌的生长和

4、遗传变异-1数了数了80个小格中有个小格中有120个细菌，样品个细菌，样品(yngpn)中的细菌浓度是多少？中的细菌浓度是多少？(120个个80)400 / 110- 4 ml =600104个个/ml适用范围：适用范围：细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数数数(sh sh)细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数165=80个小格），个小格），折算折算样品细菌浓度；样品细菌浓度；第十页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1滤膜染色

5、法滤膜染色法l一定量样品过滤一定量样品过滤(gul)到滤膜上，然后染色计数。到滤膜上，然后染色计数。l需要知道滤液的体积和滤膜的面积。需要知道滤液的体积和滤膜的面积。l在显微镜下计数，方法相同。在显微镜下计数，方法相同。第十一页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1比例比例(bl)(bl)计数计数法法n比例比例样品菌液与等体积（或成一定样品菌液与等体积（或成一定(ydng)比例）的血液混合，比例）的血液混合，观测二者比例观测二者比例平均每个视野中细菌平均每个视野中细菌(xjn)(xjn)数量数量/ /红血球的数红血球的数量比例为量比例为5.55.5：1 1，则细菌，则细菌(xjn)(x

6、jn)数量数量= =？5.55.5400400万个万个/m l =2.2/m l =2.210107 7个个/ /mLmL样品样品n红血球红血球数已知数已知(男性男性，女性，女性)，平均平均400400万个万个/m/m比例计数法将已知颗粒浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自的数目。（特点：不要求记体积）第十二页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1DAPI:46-diamidino-2-phenylindole,dihydrochloride4,6-4,6-二二脒脒基基-2-2苯基苯基(bn j)(bn j)吲哚吲哚DNA2Cl-H2N+NH2CNHH2N -C NH

7、2Measurement of total cell counts全细胞染色法（死活(shu)不分）：DAPI染色染色，DTAFDAPI:无毒性荧光染料(rnlio)，能够与DAN双链强力结合并产生荧光。采用358nm紫外光照射能发射明亮的蓝色荧光。第十三页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-15-DTAF : 5-(4,6-dichlorotriazinyl) aminofluoresceinDNAOOHOOHOOHNHNNClNClMeasurement of total cell counts全细胞染色法（死活(shu)不分）：DAPI染色染色，DTAF第十四页，共六十八页。医学

8、专题细菌的生长和遗传变异-1有必要区分(qfn)细菌的死活吗？n饮用水中卫生细菌学标准是TBC 接种量：特别是X0/S0，即初期微生物浓度与基质浓度的比。产生延滞(yn zh)期的原因： 缺乏分解新环境中有关基质的酶； 缺乏充足的代谢中间产物。总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数底物特点：底物充足第四十六页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-12）指数期（exponential phase） 对数(du sh)期、生长率上升阶段细胞数（量）以指数形式增加的时间段。 细菌 特点：生长速率最大，世代时间（generation time）最短 酶系活跃、代谢(dixi)旺盛细胞进行平衡生长

9、，体内各成分最为均匀 底物特点：底物充足，大量被细菌消耗(xioho)，降解速率最高总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数第四十七页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1指数(zhsh)期数学描述1dxrkXdt10lnXKtX10KtXXe世代(shdi)时间0t tGnn 世代(shdi)数02nXX0lglglg2XXn第四十八页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-13）稳定期（stationary phase）： 恒定期、静止期、生长(shngzhng)下降期细菌(xjn)特点：净增长速度为零繁殖与死亡速度相等正生长与负生长相等底物(d w)特点： 底物被大量消耗，不能

10、够维持对数期细菌高生长速率所需要的有机物质，导致细菌生长率下降出现稳定期的原因： 营养物尤其是生长因子耗尽 营养物比例失调 pH、DO、氧化还原电位的变化总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数第四十九页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1数学(shxu)表达生长(shngzhng)下降阶段 S很低，其浓度(nngd)对微生物影响大2dsk Sdt即有机物分解速度与其浓度成正比第五十页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-14）衰亡期（decline phase, death phase）内源呼吸期（endogenous respiration phase）内源呼吸：体内贮藏物质

11、酶等一部分细胞物质的氧化。细菌特点：细胞会发生自溶现象（autolysis），蛋白质水解酶活力 往往产生芽孢出现死亡(swng)期的原因： 营养物不足(bz) 外界条件恶化底物特点(tdin)：底物被微生物大量耗尽，微生物因得不到营养 而进行内源呼吸总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数第五十一页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1细菌生长的数学(shxu)描述生长与基质浓度(nngd)的关系微生物比增长速度(zn chn s d)：单位时间，单位微生物量的增加量1dxdtxmax基质浓度s第五十二页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1maxssksKs: 饱和常数，与ma

12、x12的s值相等KsS时maxmaxssSk SkkSmaxsKsMonod公式(gngsh)（莫诺特公式(gngsh)）经验公式(gngsh)（微生物增长）第五十三页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1对于(duy)像活性污泥这样的混合微生物群，也有类似的生长曲线。细菌生长期与废水生物细菌生长期与废水生物(shngw)处理：处理： 水处理中如何(rh)避免缓慢期接种对数期或代谢旺盛的污泥增加接种量污泥驯化 微生物维持到对数期可获得高的处理能力， 即分解速度高，但处理效果不一定好菌活力大，不易凝聚和沉淀需要充足的营养物，故得不到好的水质第五十四页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传

13、变异-1 处于稳定期污泥虽然生长(shngzhng)速度有所下降，但有一定的代谢活性，絮凝沉降性能好。 故传统的活性污泥法常运行在这个范围。 衰亡期只出现在某些(mu xi)特殊的水处理场合， 如延时曝气及污泥消化，出水水质好。第五十五页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1食料/微生物代谢速率内源呼吸阶段生长率下降阶段生长率上升阶段（沉降性能好）（沉降性能差）大多数活性污泥处理系统运行范围延时曝气，污泥消化微生物代谢速率与食料微生物代谢速率与食料/微生物的关系微生物的关系注意：各个阶段的食物/菌量比发生变化，相当于活性污泥中的负荷。F/M（食稀比）第五十六页，共六十八页。医学专题细菌

14、的生长和遗传变异-1连续培养（continuous cultivation）是一种连续进料又连续出料的培养方式(fngsh)根据控制因素的不同分为恒浊连续培养（turbidostat）：培养基提供足够量的营养元素，细菌保持最大速率生长，通过(tnggu)控制进料流速保持细菌浊度一定，使其处于对数生长期。恒化连续培养（chemostat）：固定恒定的进料流速，同样的流速排出，反应器中营养物质浓度不变，为限制性营养因子控制生长。3. 半连续培养（semi-batch cultivation）、半间歇式Fill and draw第五十七页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-14. 分批补料式

15、培养（fed batch）以低速(d s)把高浓度的营养物质连续加入培养器中，但不出料。体积是随时间变化的特点：能任意控制培养液中的底物浓度，所以没有流出。供应速度与微生物消费速度达到平衡(pnghng)，所以能保持一定的浓度。主要(zhyo)用于： 有抑制作用的底物 生长因子添加 高浓度菌体培养第五十八页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-13-1-4 微生物膜的生长微生物膜的生长(shngzhng)特性特性1. 生物膜的生长(shngzhng) 液体培养基中加入固体物质（载体），微生物在其表面吸附、生长、繁殖(fnzh)形成形成膜，这种膜叫微生物膜。微生物膜的生长膜厚的增加，密度也

16、将发生变化从单位固体表面积上的微生物量（mg/cm2）上看可分为6个阶段延滞期、加速增长期、恒速增长期、减速增长期、安定期、脱落期第五十九页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1延滞延滞(yn zh)期期加速增长期加速增长期恒速增长期恒速增长期减速增长期减速增长期安定期安定期脱落期脱落期第六十页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1第六十一页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1（1）延滞期：细胞吸附(xf)在固体表面上的过程（沉降）影响吸附速度的因子：材质、表面性质、形状、细胞(xbo)的性质、操作条件（2）加速增长期：还没有形成(xngchng)完整的膜（3）恒速增

17、长期： 活性细胞量达到最大，形成完整的膜。膜表面凹凸不平。第六十二页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1（4）减速(jin s)增长期： 恒速增长期与安定期的过渡期，持续时间短。（5）安定期： 增长速度(sd)与脱落速度(sd)相平衡，膜量及膜厚达到最大值。（6）脱落期： 外因：流体的剪切力 内因：细菌的死亡、气泡的形成，细胞(xbo)外高分子量的变化。第六十三页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-12. 生物膜的特性(txng)（1）有效(yuxio)膜厚并不是全部有活性基质的扩散细胞的死亡70200m（平均(pngjn)100 m），并不是越厚越好。（2）密度（与膜厚有关

18、） 微生物膜的湿密度：密度有时小于水，一般接近于1。（因为有气泡的存在）第六十四页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1湿生物膜组成（体积比）： 细胞(xbo)5-15%，气泡2-18%，水7090%（3）组成(z chn)： （g-/g-生物膜）COD：0.47TOC：0.46T-N：0.11T-P：0.22生物膜干组成(z chn)： （g-/g-生物膜）第六十五页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1膜厚膜体积(tj)/载体表面积生物膜湿重/表面积生物膜湿重（载体膜）载体生物膜生物量的测定方法：超声波脱落，按照细菌数量测定。生物膜的测量方法第六十六页，共六十八页。医学专题细菌的生长和遗传变异-1第一次作业(zuy)n请绘制间歇培