三聚氰胺试剂盒说明书1ppbVer1403

1、 三聚氰胺（MEL）ELISA检测试剂盒说明书产品编号：HE09037/HE12003一、概要 三聚氰胺(melamine)是一种低毒、无味的纯白色单斜棱晶体，形似蛋白粉，属于三嗪类含氮杂环有机化合物，广泛应用于塑料、染料、化肥的生产和纺织行业。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在检测中造成蛋白质含量较高的假象。目前在饲料、牛奶、奶粉、饼干、奶糖等相关产品均发现有三聚氰胺残留现象。动物实验结果表明，三聚氰胺的摄入可能会导致繁殖障碍、膀胱炎、慢性肾炎、肾结石、甚至膀胱癌。现有的检测三聚氰胺方法如液相色谱-质谱联用法、质谱电喷射离子技术其样品前处理复杂、所需仪器昂贵、操作复杂、耗费时

2、间。而使用三聚氰胺ELISA试剂盒能够既快速又准确的分析样本中三聚氰胺残留。 本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点，操作时间为45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。二、实验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被三聚氰胺抗原，样本残留的三聚氰胺和微孔上预包被的抗原竞争三聚氰胺抗体（抗试剂），同时加入酶标二抗（酶标物）反应，再加入TMB底物显色，样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。三、适用范围可定性、定量检测奶粉、牛奶、酸奶等乳制品

3、、鸡蛋及饲料样本中三聚氰胺的残留量。四、交叉反应率三聚氰胺100五、使用单位需自备的设备及试剂设备：微孔板酶标仪450/630nm涡旋仪天平：感量0.01g聚苯乙烯离心管微量移液器：单道 10L100L、100L1000L、多道 30L300L试剂：-去离子水-乙腈（分析纯）-氢氧化钠（分析纯）-三氯乙酸-浓盐酸（分析纯）六、提供的材料与试剂组份名称96T装量48T装量酶标板96T48T标准品×6瓶*1 mL 0.5 mL 高浓度标准品(10 ppm)1 mL 0.5 mL 三聚氰胺酶标物6 mL3 mL三聚氰胺抗试剂6 mL3 mL底物液A液6 mL3 mL底物液B液6 mL3 m

4、L终止液6 mL3 mL浓缩洗涤液（10×）40 mL×2瓶40 mL三聚氰胺浓缩样本稀释液12mL6 mL试剂盒说明书1份1份检测报告1份1份盖板膜2个1个*注：标准品浓度为0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81 ppb。七、溶液的配制配液1：样本稀释液I用去离子水将浓缩样本稀释液按1 : 15体积比进行稀释，即1份浓缩样本稀释液加15份去离子水；用于酸奶、生鲜奶、成品纯牛奶样本的稀释，样本稀释液I在4 环境可保存一个月。配液2：样本稀释液II用去离子水将浓缩样本稀释液按1 : 7体积比进行稀释，即1份浓缩样本稀释液加7份去离子水；用

5、于乳饮料、鸡蛋样本、饲料样本的稀释，样本稀释液II在4 环境可保存一个月。配液3：饲料提取液 量取86L盐酸，加入100mL去离子水中。配液4：鸡蛋提取液称取3g三氯乙酸，加蒸馏水溶解并定容至100 mL。配液5：洗涤液用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1 : 9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水；用于酶标板的洗涤，以及奶粉样本的稀释，洗涤液在4 环境可保存一个月。配液6：1M NaOH溶液（现配现用）称取4g NaOH，加入蒸馏水100 mL，搅拌溶解即可。8、 样本前处理步骤 样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意：(a) 实验中必须使用一次性

6、吸头，在吸取不同的试剂时需更换 吸头。(b) 实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁 净实验器具，以避免污染干扰实验结果。(c) 未处理的生鲜奶样本需冷冻环境保存,牛奶等样本需要 冷藏环境保存。(d) 处理好的样本应立即用于检测。（一）奶粉-称取1.0g奶粉样本，加4.5 mL洗涤液（配 液5），充分涡动1min，至样本充分溶解；-取100L奶粉溶液，加入900L洗涤液（配 液5），涡动1min混匀；-取50L用于分析。稀释倍数：50（二）生鲜奶、成品纯牛奶：-移取1mL牛奶样本，加入1mL 去离子水，涡动1min 混匀；-取40L样本溶液，加入960L样本稀释液I（配液1）， 涡动1

7、min混匀；-取50L用于分析。稀释倍数：50（三）液态酸奶-称取1.0g酸奶样本，加入1 mL去离子水，涡动1min混匀，4000r/min离心5min；-取200L上清，加入800L样本稀释液I（配液1）， 涡动1min混匀；-取50L用于分析。稀释倍数：10（四）乳饮料-移取50L乳饮料样本，加入950L 样本稀释液II(配液2)，涡动1min混匀；-取50L用于分析稀释倍数：20（五）饲料-用均质器均质饲料样本；-称取1.0 g均质的样本于50 mL离心管中， 加5 mL 饲料提取液（配液3）,再加入5mL乙腈，充分振荡5min，4000r/min离心5min。-取200L上清液加到8

8、00L的样本稀释液II（配液2），混匀后取50L用于分析。稀释倍数：50（六）鸡蛋-称取2.0g均质后的鸡蛋样本于50mL离心管中， 加4mL 鸡蛋提取液（配液4），充分振荡5min，4000r/min离心5min。-取150L上清液，再加入350L 样本稀释液II（配液2）混匀，用1M NaOH溶液（ 配液6） 调pH至 6.0-8.0（约510L） ，混匀取50L分析。稀释倍数：10九、检测步骤 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（2025 ）平衡30 min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于28 。3、洗涤液在使用前也需回

9、温。4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5、加标准品/样本：加标准品/样本50L到对应的微孔中，再加入酶标物50L /孔，再加入抗试剂50L /孔轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25避光环境中反应30 min。6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液300L /孔，充分洗涤5次，每次间隔10 s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。7、显色：加入底物液A液50L /孔，再加底物液B液50L /孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25避光环境反应15min。8、测定：加入终止液50L /孔，轻

10、轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630 nm检测，请在5 min内读完数据），测定每孔OD值。（若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定）。十、 结果判定结果判定有两种方法，定性判定可用第1种方法，而定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含三聚氰胺成负相关。1、 定性分析 用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围（ppb）。假设样本1的吸光度值为0.569，样本2的吸光度值为1.325，标准液吸光度值分别是：0 ppb为1.85；1 ppb为1.483；3 ppb为1.112；9 ppb为0. 746；27 ppb为0.367;81ppb为0.018。

11、则样本1的浓度范围是927 ppb；样本2的浓度范围是13 ppb。再乘以其对应的稀释倍数即可得出样本中三聚氰胺的浓度范围。2、定量分析（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光率（%）B×100%B0B标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B00（ppb）标准溶液的平均吸光度值（2）标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以三聚氰胺标准品浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即

12、为样本中三聚氰胺实际残留量。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）十一、试剂盒参数试剂盒灵敏度：1 ppb样本最低检测限：奶粉50ppb酸奶10ppb纯牛奶、生鲜奶50ppb乳饮料20ppb饲料50ppb鸡蛋10ppb回收率：奶粉100±20%酸奶100±20%纯牛奶、生鲜奶100 ± 20%饲料100±20%鸡蛋100±20%精密度：试剂盒的变异系数均小于10%十二、注意事项1、室温低于20或试剂及样本没有回到室温（2025）会导致所有标准的OD值偏低。2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出

13、现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3、每加一种试剂前需将其摇匀。4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。6、储存条件 保存试剂盒于28，不要冷冻，将不用的酶标板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。8、 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min，但不得超过20min。反之，则减短反应时间。9、 浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。10、该试剂盒最佳反应温度为25，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。十三、贮藏条件及保存期 贮藏条件：保存试剂盒于28。保存期：该产品有效期为12个月。14、 本公司其他检测产品检测类别检测产品检测类别检测产品真菌毒素黄曲霉毒素总量4项抗生素氯霉素黄曲霉毒素总量6项甲砜霉素黄曲