X-STR及侧翼序列SNPs的遗传多态性并在特殊亲缘关系及混合斑鉴定中的意义.doc

1、X-STR及侧翼序列SNPs的遗传多态性并在特殊亲缘关系及混合斑鉴定中的意义目的 : 在法医物证鉴定工作中 , 二人混合斑的个人识别与某些复杂亲缘关系鉴定 ( 如母 / 子或女、父/ 女、祖母 / 孙女、同父姐 / 妹等 ) 是亟待解决的难题。 目前 ,二人混合样品的个人识别主要采用似然率法对混合样品的DNA分型图谱的统计学分析并考虑等位基因峰高或峰面积, 又可以分为无限制组合的似然率法和限制组合的似然率法。这种方法受样品浓度和样品混合比例的影响比较大, 另外还需要考虑结巴带、等位基因丢失和低拷贝数模板等对混合斑分型结果造成的影响,无法实现对混合样品中不同个体的同一认定的目的。建立针对不同个体

2、分别进行DNA分型检验的方法将是根本解决混合样品个人识别问题的关键。在上述复杂亲缘关系鉴定中, 当两份样品 X-STR分型结果有超过 50%以上等位基因相同时 , 不能排除同时也不能肯定亲缘关系。如能判断两份样品相同的等位基因是随机所致或是遗传获得, 则会极大的提高排除或肯定亲缘关系的机率。X 染色体在女性为双倍体 , 男性为单倍体。 X-STR在个人识别特别是涉及X染色体遗传的某些复杂亲缘关系鉴定中具有重要意义。本研究拟选择包含DXS7423基因座上、下游约2000bp 的 DNA片段 , 对其进行核苷酸序列分析, 检测SNPs位点及群体分布。探讨根据个体 SNPs的差异 , 应用 PCR-

3、SSP技术 , 建立针对不同个体分别进行DNA分型的方法 , 以解决混合样品中不同个体的同一认定问题; 在亲权关系鉴定中 , 根据 X-STR基因座上、下游的SNPs位点的异同 , 能否在判断两份样品相同的XSTR等位基因是随机所致或是遗传获得方面成为依据, 为某些复杂亲缘关系鉴定提供新的指标 ; 调查辽宁地区满族人群十二个X-STR基因座的遗传多态性 , 为法医学的个人识别和亲子鉴定及群体遗传学研究提供基础数据。材料与方法: 辽宁地区满族 772 例 ( 男性 514 例 , 女性 258 例 ) 健康无关个体血液样品 , 一个三代四口家系 ( 祖母、父亲、母亲、孙女) 和一个三代五口家系

4、( 祖母、父亲、母亲、两个异卵双生孙女 ),DNA 标准品 (9947A) 和灭菌去离子水分别作为阳性对照和阴性对照。采用酚氯仿方法提取基因组DNA。扩增含有 DXS7423基因座及上、下游约 2000bp 的 DNA片段 , 通过测序获得其SNPs位点的分型结果并进行男女组间比较。 分别计算 SNPs位点的等位基因频率、单倍型频率、法医学参数等 ; 两两比较 SNPs位点差异及 DXS7423基因座相同型别可能为随机所致或是遗传获得的机率; 根据 SNPs分型结果不同 , 应用 PCR-SSP技术分别扩增混合样品中不同个体的DXS7423基因座。使用 Investigator ArgusX-

5、12 试剂盒调查了辽宁地区满族人群十二个X-STR基因座的遗传多态性 , 分别计算等位基因、单倍型频率和法医学参数。结果 : 在 DXS7423基因座的上、下游约2000bp 的 DNA片段内检出四个SNPs位点 rs762822 、 rs546652 、rs17279108 和 rs529211, 分布符合 Hardy-Weinberg平衡 , 男性和女性中的分布无显著性差异, 位基因频率分别为G0.3067/A0.6933 、0.2333/G0.7667 、A0.7867/T0.2133 和 C0.7400/G0.2600 。四个位点的多态性较好 , 可以应用于法医学个人识别和亲子鉴定中。

6、利用 PCR-SSP方法可以将二男性混合样品根据 SNP分型不同而进行区分 , 分离组分该位点试剂盒检测结果一致 ,表明该方法可能用于区分混合样品中的不同组分。根据 SNPs的个体差别 , 经两两比较 , 有 53.52%的可能性区分不同个体。 推测根据此原理 , 可筛选到足够的 X-STR,经复合扩增可能实现对混合样品不同个体的同一认定。家系检验结果比较显示, 母/ 子或女、父 / 女、祖母 / 孙女、同父姐 /妹对在相同 STR等位基因侧翼序列均有相同的SNPs,支持此等位基因是由遗传获得的。将可能提供子代相同STR等位基因的无关女性和无关男性作为嫌疑母( 或祖母 ) 或嫌疑父 , 两两比较 STR侧翼序列 SNPs,有 46.67%的可能性排除父女之间亲缘关系 , 有 11.36%的可能性排除母 ( 或祖母、姐妹 ) 女之间亲缘关系。 772 例个体十二个 X-STR基因座的多态性分布符合 Hardy-Weinberg 平衡 , 具有很高的个人识别能力及父权排除能力。 结论 : 根据 X-STR基因座侧翼序列的 SNP位点的差别 , 应用PCR-SSP方法可以对已知嫌疑人的混合样品进行区分, 获得个体的 X-ST