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文档简介

1、PC 阪应中遇到的几个常见问题与对策问题 1:1:无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无M 样品 A 样品 B 正对照原因分析:1 1 .模板：含有抑制物，含量低2 2 .Buffer.Buffer 对样品不合适3 3 . .引物设计不当或者发生降解4 4 .反应条件：退火温度太高，延伸时间太短对策：1 1 . .纯化模板或者使用试剂盒提取模板 DNAEDNAE 加大模板的用量2 2 . .更换 BufferBuffer 或调整浓度3 3 .重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物4 4 .降低退火温度、延长延伸时间问题 2:2:非特异性扩增现象：条带与预计的大小不一致或

2、者非特异性扩增带原因分析：1 1 .引物特异性差2 2 .模板或引物浓度过高3 3 . .酶量过多4 4 .Mg2+.Mg2+ 度偏高5 5 . .退火温度偏低6 6 . .循环次数过多对策：1 1 .重新设计引物或者使用巢式 PCRPCR2 2 .适当降低模板或引物浓度3 3 . .适当减少酶量4 4 .降低镁离子浓度5 5 . .适当提高退火温度或使用二阶段温度法6 6 . .减少循环次数问题 3:3:拖尾现象：产物在凝胶上呈 SmearSmear 状态。M12原因分析：1.1.模板不纯2.Buffer2.Buffer 不合适3 3 . .退火温度偏低4 4 . .酶量过多5 5 .dNTP.dNTP、MgMg2+度偏高6 6 . .循环次数过多对策：1 1 . .纯化模板2 2 . .更换 BufferBuffer3 3 . .适当提高退火温度4 4 . .适量用酶5 5 . .适当降低 dNTdNT 可口镁离子的浓度6 6 . .减少循环次数问题 4:4:假阳性现象：空白对照出现目的扩增产物原因分析：靶序列或扩增产物的交差污染对策：1 1 .操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；2 2 . .除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒

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