PCR产物Smear原因_第1页
PCR产物Smear原因_第2页
PCR产物Smear原因_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、电泳出现拖尾现象电泳出现拖尾现象，英文成为 smear-,就是弥散。其原因，主要从以下两个方面考虑：拖尾：产物在凝胶上呈 Smear 状态。原因：1 .模板不纯2 .Buffer 不合适3 .退火温度偏低4 .酶量过多5 .dNTP、Mg2 然度偏高6 .循环次数过多对策：1 .纯化模板2 .更换 Buffer3 .适当提高退火温度4 .适量用酶5 .适当降低 dNTPffi 镁离子的浓度6 .减少循环次数1、PCRT 物自身原因：往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP度过高，Mg2 袱度过高，退火温度过低，循环次数过多，而造成 PCR 勺非特异性产物过多。对策：减少 Taq 酶的量，或调换另

2、一来源的酶。减少 dNTP 的浓度。适当降低Mg2 然度。增加模板量，减少引物的用量，减少循环次数，提高退火温度。2、电泳体系的问题：（1）电泳缓冲液 TAEc 者 TBE 的污染，建议更换缓冲液。（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。（3）电压太高。（4）适当把你的胶的浓度加大。 （根据你的片断大小而定）（5）观察你的 marker 是否也存在拖尾现象，作为对照。PCRfi 尾及假阳性的原因及对策拖尾现象：产物在凝胶上呈 Smear 状态。原因：1 .模板不纯2 .Buffer 不合适3 .退火温度偏低4 .酶量过多5 .dNTP、Mg2 然度偏高6 .循环次数过多对策：1 .纯化模板2 .更换 Buffer3 .适当提高退火温度4 .适量用酶5 .适当降低 dNTPffi 镁离子的浓度6 .减少循环次数假阳性现象：空白对照出现目的扩增产物原因：靶序列或扩增产物的交*污染对策：1 .操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；2 .除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。

人人文库> 全部分类> 应用文书 > 作业报告

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论