TLR4、MyD88mRNA在胆脂瘤型中耳炎中的表达及意义.doc

1、TLR4、MyD88mRNA在胆脂瘤型中耳炎中的表达及意义研究背景中耳胆脂瘤是一种位于中耳内的囊性结构，而非真性肿瘤， 但它具有类似肿瘤的持续生长及破坏能力，常引起一系列严重的颅内外并发症，危及生命，因此一直受到国内外专家的广泛关注。后天性胆脂瘤发病机理存在争议已有一个世纪，至少已证实存在有四个方面证据, 但现在唯一达成共识的是机体为防御慢性炎症而产生的一系列异常免疫应答，造成胆脂瘤持续发展及骨质破坏。Toll样受体（toll-likereceptors ，TLRs）是先天性免疫模式识别受体 （patternrecognition receptor， PRR）之一，通过识别病原微生物及其病原相

2、关分子模式（ pathogen associatedmolecularpatterns，PAMPs）快速激活天然免疫系统。现 M Szczepanski ，WSzyfter 等研究发现 TLR（TLR-2， TLR-3，TLR-4）在胆脂瘤微环境中表达丰富，提示 Toll 样受体 4 有可能参与了中耳胆脂瘤的发生发展过程。本实验拟采用 SYBR Green实时定量反转录聚合酶链反应（ SYBRRT-PCR）方法 , 观察炎症反应程度不同的中耳胆脂瘤组织中TLR4的表达及其下游传导分子 MyD88的表达，进一步探讨TLR4信号转导途径在中耳胆脂瘤发生发展过程中的作用， 深入了解中耳胆脂瘤发病机制

3、，并为找寻中耳胆脂瘤有效的保守治疗方法提供新的途径。方法选择中耳胆脂瘤组织标本35 例，均来自山西医科大学第二医院耳鼻咽喉 - 头颈外科住院患者35 例（男 13 例，女 22 例，年龄 16 62 岁）平均 37.12 岁，耳流脓史 1 个月 30 年，平均 5.14 年；其中听骨无破坏者 8 例，破坏一个听骨者 8 例，破坏两个听骨者 13 例，破坏三个听骨者 6 例。然后我们根据显微镜下所见上皮下基质炎症反应的程度， 在手术中取标本时即分为炎症组与非炎症组， 其中炎症组占 13 份，非炎症组占 12 份。对照组标本取自中耳乳突根治术中正常外耳道皮肤组织10 例。上述所有标本在收集后立即在

4、显微镜下仔细剔除中耳胆脂瘤鳞屑及其他坏死组织，置于-80 冰箱保存，以备用作 RT-PCR检测。所有选取患者术前均行颞骨高分辨CT检查，术后病理活检均证实为后天继发性胆脂瘤。采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR ）直接检测炎症组、非炎症组、正常对照组TLR4、MyD88 mRNA的表达。结果 1、Real time -PCR方法直接检测三组实验样本TLR4mRNA，炎症组 TLR4平均 2-CT值为0.689 （0.200,2.050），非炎症组 TLR4平均 2-CT值为 0.291（ 0.020,0.990），正常对照组 TLR4、平均 2-CT值为 0.163（ 0.001

5、,0.990）。2、Real time -PCR 方法直接检测三组实验样本MyD88mRNA的表达显示：炎症组为 MyD88平均 2-CT值 0.777（0.320 ，1.84 ）；非炎症组 MyD88平均 2-CT值为 0.320 （0.01,0.990 ），正常对照组 MyD88平均2-CT值为 0.224 （0.002,0.990 ）。3、炎症组 TLR4、 MyD88mRNA表达水平较正常外耳道组分别上升了4 倍和 3 倍，且差异有统计学意义（ p 值均<0.05）; 炎症组 TLR4、 MyD88mRNA表达水平较非炎症组分别上升了2 倍和 1倍，且差异有统计学意义（p 值均 <0.05）。4. 我们将 TLR4与 MyD88做 spearman秩相关性分析，相关系数为r=0.955 ，P 值 <0.05。表明在胆脂瘤型中耳炎发病过程中，在基因水平，TLR4与 MyD88是呈正相关的。结论 1、中耳胆脂瘤组织中有TLR4mRNA、MyD88mRNA的表达。 2、中耳胆脂瘤组织中，尤其是炎症反应明显的胆脂瘤组织，TLR4及其下游信号转导分子的表达量发生改变，提示胆脂瘤型中耳炎的发病确实与炎症程度密切相关。3、炎