氯芬黄敏片(薄膜衣)检验方法验证记录

1、氯芬黄敏片（薄膜衣）检验方法验证记录【依据】 WS-10001-（HD-1030）-2002、中国药典2010年版二部 仪器：高效液相色谱仪 型号： 电子天平 型号： 马来酸氯苯那敏对照品 中国药品生物制品检定所 批号：100047-200305 双氯芬酸钠对照品 中国药品生物制品检定所 批号：100334-2003021 色谱条件色谱条件与系统适用性试验 色谱柱填充剂：用十八烷基硅烷键合硅胶； 流动相：庚烷磺酸钠溶液(庚烷磺酸钠15.2mg,加三乙胺0.8ml,加水800ml,用冰醋酸 调pH值至3.3±0.1,加水至1000ml)-甲醇-乙腈（253018） 检测波长：为262n

2、m 2 线性关系考察 对照品贮备液的制备：精密称取马来酸氯苯那敏对照品 g，置50ml量瓶中，加流动相 使溶解并稀释至 刻度，摇匀，作为对照品贮备液，（每1ml中含0.25mg）；精密称取 双氯芬酸钠对照品 g，置25ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀， 作为对照品贮备液，（每1ml中1.5mg）。 线性测定 1、精密量取对照品贮备液、各0.5mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀； 2、精密量取对照品贮备液、各1mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀； 3、精密量取对照品贮备液、各3mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀； 4、精密量取对照品贮备液、各

3、5mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀； 5、精密量取对照品贮备液、各10mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀； 按以上述色谱条件,分别精密量取20ul，注入色谱仪，记录色谱图。 马来酸氯苯那敏 12345对照品稀释浓度（mg/mL）对照品进样量（ug）对照品谱图主成分面积平 均 结果以进样量（g）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回 归方程为：Y = X + r = 结果显示： 。 双氯芬酸纳 12345对照品稀释浓度（mg/mL）对照品进样量（ug）对照品谱图主成分面积平 均 结果以进样量（g）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，

4、得回 归方程为：Y = X + r = 结果显示： 。3 稳定性试验 取上述线性关系项下的每1ml中含马来酸氯苯那敏0.05mg与双氯酚酸钠0.3mg对 照品溶液；按以上述色谱条件,分别于样品制备后0、2.5、5、7.5、10小时，精密量 取20ul，注入色谱仪，测定峰面积.记录色谱图。 马来酸氯苯那敏 进样时间0h2.5h5h7.5h10h平 均 RSD 结果显示： 双氯芬酸纳 进样时间0h2.5h5h7.5h10h平 均 RSD 结果显示： 4 重复性试验 对照品溶液的制备：精密称取马来酸氯苯那敏对照品 g，置50ml量瓶中，加流动相使溶 解并稀释至刻 度，摇匀，作为对照品贮备液，（每1m

5、l中含0.5mg）。精密称取双氯芬酸 钠对照品 g，置50ml量瓶中，加流动相使溶解，并精密量入上述马来酸氯苯那敏 对照品贮备液5ml，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1ml中含双氯酚酸钠 0.3mg与马来酸氯苯那敏0.05mg）。重复性试验:取氯芬黄敏片（批号：070401）20片，精密称定： g，平均片重： g/片，研细，精密称取6份，： g，： g，： g， ： g，： g，： g，(约相当于双氯芬酸钠15mg)，分别置50ml 量瓶中,加流动相适量,超声使溶解,加流动相至刻度,摇匀,滤过,即得。） 测定法 精密量取上述溶液各20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；计算，即得。 马来

6、酸氯苯那敏 供试样品序号峰面积平均峰面积样品进样浓度（mg/ml）对照品溶液供试样品1供试样品2供试样品3供试样品4供试样品5供试样品6计算： 平均含量为 %，RSD 为%。 结果显示： 。 双氯芬酸纳 供试样品序号峰面积平均峰面积样品进样浓度（mg/ml）对照品溶液供试样品1供试样品2供试样品3供试样品4供试样品5供试样品6计算 平均含量为 %，RSD 为%。 结果显示： 。5 加样回收率试验对照品溶液的制备：取重复性试验项下的对照品溶液； 加样回收率试验： 取已知含量的氯酚黄敏片适量，精密称取9份 ： g，： g， g， ： g，： g，： g，： g，： g， ： g，分别置50mL量瓶

7、中，分别精密加入马来酸氯苯钠敏对照品： mg， ： mg， ： mg，： mg， ： mg，： mg， ： mg，： mg， ： mg； 再分别精密加入双氯芬酸钠对照品 ： mg，： mg， ： mg， ： mg， ： mg，： mg，： mg，： mg， ： mg， 照重复性试验项下方法制成每1mL含马来酸氯苯钠敏约0.04mg、0.05mg、0.06mg、含双 氯芬酸钠约0.24mg、0.3mg、0.36mg的溶液各3份，按重复性试验项下方法测定， 马来酸氯苯那敏 供试样品序号 峰面积平均峰面积进样浓度（mg/ml） 对照品溶液低浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3中浓度 供试样品1

8、供试样品2 供试样品3高浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 按计算，底、中、高3种浓度的回收率、RSD值供试品序号 称样量称样含量加样量实测含量回收率 RSD值 低浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 中浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 高浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 9份溶液的回收率平均值为 %，RSD为 %。 双氯芬酸钠 供试样品序号 峰面积平均峰面积进样浓度（mg/ml） 对照品溶液低浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3中浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3高浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 按计算，底、中、高3种浓度的回收率、RSD值 供试

9、品序号 称样量称样含量加样量实测含量回收率 RSD值 低浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 中浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 高浓度 供试样品1 供试样品2 供试样品3 9份溶液的回收率平均值为 %，RSD为 %。6 破坏试验辅料干扰试验 按处方量制备不含马来酸氯苯那敏和双氯芬酸钠原料药的样品，照上述实验条 件，保留至样品峰保留时间的2倍，记录色谱图。热稳定性试验 取本品适量，置120加热6h，取出放冷，研细，精密称取 ，置 50ml量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得（每1ml约双氯芬酸 钠0.3mg），照上述试验件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱

10、图。光照试验 取本品适量，置5000Lx光照24h，取出放冷，研细，精密称取 ，置50ml 量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得（每1ml约双氯芬酸钠 0.3mg），照上述试验条件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。强酸破坏试验 取取本品适量，加1molL-1 盐酸溶液 5mL溶解，放置2h，用1molL-1 氢氧化 钠溶液中和，用流动相转移稀释至一50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，同法做空白试 验，照上述试验条件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。强碱破环试验 取本品适量，加1molL-1 氢氧化钠溶液5mL溶解，放置2h，用1molL-1 盐酸 溶液中

11、和，用 流动相转移稀释至一50mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，同法做空白试 验，照上述试验条件试验，保留至样品峰保留时间2倍。记录色谱图。 结论： 。7 有关物质方法学研究 参考双氯芬酸钠原料项下的【有关物质】制定如下： 取本品10片，除去包衣后,研细,精密称取 g(约相当于双氯芬酸钠0.1g )，加 乙醇20ml，超声处理10 、20、30分钟或加热回流30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇 10ml使溶解，作为供试品溶液（1ml 中约含10mg 的溶液）精密量取适量，加乙醇稀释制成 每1ml 中含0.1mg 、0.2mg、0.4mg、1mg的溶液作为对照溶液，照薄层色谱法试验，分别 吸取上述溶液各10ul，分别点于硅胶GF254薄层板上以乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸(25： 25：0.2)为展开剂，展开后， 晾干，置紫外灯（254nm）下检视，供试溶液如 显杂质斑点与 对照溶液的主斑点比，不得更深。 序号样品处理方法试验结果备注1超声处理10分钟2超声处理20分钟3超声处理30分钟4加热回流30分钟 结论： 。 空白试验 称取干预胶化淀粉5.0g、干淀粉8.0g、硬脂酸镁0.1g分别过80目筛网， 得空白样品。（辅料比例同处方）分别取氯芬黄敏片样品10片和上述空白样品0.