利巴韦林注射液的细菌内毒素检查

1、利巴韦林注射液的细菌内毒素检查一、 试剂和样品：鲎试剂（批号：0508031 , 灵敏度：0.25EU/ml 湛江博康海洋生物有限公司生 产）细菌内毒素工作标准品（内毒素工作标准品 2005-6 ，100EU/支，中国药品生物 制品检定所提供）利巴韦林注射液（规格：100mg/ml，批 号：050302 生产厂家：广 东南国药业有 限公司）二、 灵敏度复核：2-1、标准品的准备取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在 瓶颈上部轻轻划痕，用 75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。 根据鲎试剂灵敏度的标示值（0.25EU/ml ），将细菌内毒素工作标准品

2、 2005-6 用细 菌内毒素检查用水 1ml 溶解，在旋涡混合器上混匀 15 分钟，然后通过稀释制备成 0.50EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml 和 0.06EU/ml 四 个浓度 的内毒素标准溶液， 每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀 30 秒钟1、取 1ml 细菌内毒素检查用水溶解工作标准品，得 100EU/ml ；取规格为 0.1ml/支的鲎试剂 18 支，放在试管架上，排成 5 列，其中 4 列 4 支， 1 列 2 支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用 75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃 屑落入瓶内。每支加入 0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。

3、2-4、加样4 支 4 列每列分别加入 0.1ml 的 0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml 和、 取第步溶液ml+细菌内毒素检查用水ml，得EU/ml ；、 取第步溶液ml+细菌内毒素检查用水ml，得EU/ml ；、 取第步溶液ml+细菌内毒素检查用水ml，得EU/ml :细菌内毒素检查用水 0.5 ml取第步溶液 0.5ml+、，得 0.06EU/ml ；2-2、待复核鲎试剂的准备、 取第步溶液0.2ml+细菌内毒素检查用水 1.8 ml，得10、 取第步溶液0.2ml+细菌内毒素检查用水 1.8 ml，得1.0EU、 取第步溶液1.0ml+ 细菌内毒素检查用水 1.

4、0 ml，得 0.50EU/ml ；、 取第步溶液1.0ml+ 细菌内毒素检查用水 1.0 ml，得 0.25EU/ml ；取第步溶液1.0ml+ 细菌内毒素检查用水 1.0 ml，得 0.125EU/ml ；0.06EU/ml 的内毒素标准溶液，另 2 支加入 0.1ml 的检查用水作为阴性对照。加样 结束后，将鲎试剂用医用胶布封口，轻轻振动混匀，连同试管架放入 37C水浴或 适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温 60 分钟。2-5、结果记录及计算方法内毒素浓度0.50.250.125 0.06NC反应终点平 1行 2管 3数 41 _ -入 c=1g （刀 X/4）1=1g(lg + l

5、g + lg + lg )/4)= EU/ml三、样品常规检查1、 限值L=0.15EU/mg (中国药典 2005 版)。2、 计算 MVDMVD=CL/入=100X0.15-0.25=603、 供试品溶液的制备将样品利巴韦林注射液稀释到 30 倍和 60 倍备用。1、取原溶液 0.2ml+细菌内毒素检查用水 1.8 ml ，得 10 倍；2、取第步溶液 0.5ml+细菌内毒素检查用水 1.0ml，得 30 倍；3、取第步溶液 1.0ml+细菌内毒素检查用水 1.0ml，得 60 倍；4、鲎试剂的准备取规格为 0.1ml/支的鲎试剂 8 支，放在试管架上，排成 4 列，每列 2 支。轻 弹瓶

6、壁使粉末落入瓶底，用 75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。 每支加入 0.1ml 检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。4、 操作加样4-1、样品阳性对照：（做 2 管）取利巴韦林注射液的 30 倍稀释液和浓度为 1.0EU/ml 的内毒素稀释液各 0.3ml 混 合均匀，取该混合液 0.1ml 加入已经复溶好的鲎试剂（入=0.25EU/ml ）中即可。4-2、阳性对照：（做 2 管）取 0.1ml 浓度为 0.5EU/ml 的内毒素稀释液加入已经复溶好的鲎试剂（入=0.25EU/ml）中即可。4-3、样品检查：（做 2 管）取利巴韦林注射液的 60 倍稀释液加入已经复溶好的鲎试剂（入=0.25EU/ml）中即 可