维生素B2对五氟尿嘧啶抗结肠肿瘤活性的影响

1、维生素B_2对五氟尿嚅咤抗结肠肿瘤活性的影响由于现代生活节奏的加快、饮食习惯的改变,结肠癌在我国的发病率逐年升高并且向低龄化发展。结肠癌的死亡率较高仅次于常见的肺癌和肝癌,五氟尿嘧啶(5-fuorouracil,5-FU)是常用的治疗药物之一。但是,临床数据表明,单独使用5-FU治疗中晚期结肠癌患者成功率仅为10%-15%同时还会伴随产生耐药性和较强的毒副作用。为了提高药物治疗效果,近年来将药物与活性物质联用已成为研究的一个热点方向。维生素,食物来源广泛,作为人体生命活动必不可少的物质之一,承担多样的生理功能,近来研究表明其具有潜在的抗癌性。而临床上,癌症患者膳食补充维生素又是一个比较普遍的现

2、象。因此本实验将常见的14种维生素与5-FU联用探究其对5-FU抗结肠肿瘤活性的影响,并筛选出具有提高5-FU疗效潜力的维生素,通过体内外实验探究其能否协同5-FU抑制结肠肿瘤活性,从而减少5-FU用量、缓解其毒副作用,为临床上给予结肠癌患者科学的饮食建议提供理论依据。主要得到以下结果:(1)14种维生素对5-FU在两种结肠癌细胞中细胞毒性作用影响比较采用MTTM胞增殖毒性试验,比较三种浓度下14种维生素(VB₁、VB₂、VB₃、VB<sub>5

3、</sub>、VB₆、VB₉、VC、DL-a硫辛酸、VEVD<sub>3</subxVK<sub>1</subxGSHVB<sub>12</subx生物素)单独以及联合5-FU对两种类型2肠癌细胞HCT11劭及C26的生长、增殖的影响。结果发现,5-FU对C26和HCT116M月fiIC₅₀(半数致死浓度)分别为1.13±0.80叱mol/L和15.20±2.28叱mol/

4、L。三种浓度下14种维生素与IC₅₀浓度的5-FU复配后,在C26和HCT116ffl胞毒性试验中,VB₂是单独和联用后抑制率均最高的。故选取VB₂与5-FU联用进行后续体内外抗月中瘤活性实验。（2）维生素B₂与5-FU体外抗结肠月中瘤活性的联用效应采用Chou-TalalayMethod法定量评价维生素与5-FU联用对细胞抗结肠肿瘤活性的影响。通过CompuSy软件和细胞毒性试验2果得到维生素与5-FU相对HC

5、T11吸C26细胞的联用指数（CI）（CI=1加和作用；CI&lt;1协同作用；CI&gt;1拮抗作用）以及二者最佳浓度配比。结果发现,5-FU与VB<sub>2</sub岷用，对C26HCT116细胞抑制率为50%、75%及90%时,对应的CI值分别为0.52、0.26、0.13及0.91、0.77、0.68,CI值均小于1因而二者联用具有协同效应，并确定二者对C26以及HCT116a胞的最佳浓度比分别为1:20和1:2。（3）维生素B₂与5-FU联用对其体内抗结肠月中瘤活性的影响采用Balb/c结肠癌荷瘤小鼠模

6、型观察维生素与5-FU联用对5-FU抗小鼠结肠肿瘤活性的影响。通过检测不同药物处理后荷瘤小鼠的瘤体积、瘤体比指数、抑瘤率、肝脾指数的变化探究药物联用对小鼠肿瘤生长和免疫功能的影响,并采用Elisa酶联免疫吸附实验检测小鼠血液中炎症因子水平的变化探究联用对小鼠免疫及炎症水平的影响。结果发现,5-FU与VB₂®用后小鼠月中瘤抑制率从51.53土2.32%提高至76.18±4.37%;瘤体比指数从0.16±0.03下降为0.07±0.01,且差异均具有显著性（p&lt;0.001）;脾脏指数联用组与5-FU

7、单用组相比显著降低;肝肾指数以及血尿尿素氮和血浆肌酐含量各组并无统计学差异;与5-FU治疗组血液尿酸含量108.50±18.66叱mol/L相比，联用组尿酸含量仅为59.75±11.51叱mol/L,显著下降(p&lt；0.001);与VB<sub>2</sub源用后,5-FU组小鼠血液炎症因子白介素1(IL-1)、白介素3(IL-3)、月中瘤坏死因子(TNF-a)水平降低。(4)维生素B₂影响5-FU抗月中瘤活性的分子机制采用细胞流式PI单染实验检测维生素与5-FU联用对结肠癌细胞HCT11劭及C26

8、的周期影响，并采用蛋白免疫印迹方法检测二者联用对细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果发现，单用5-FU或VB₂土匀使PARP5白发生切割，但联用组切割条带增强显著，同时联用后引起LC3B蛋白上调，Bad蛋白表达增加，p53蛋白磷酸化诱导下游周期蛋白p21蛋白上调,促进癌细胞凋亡。周期实验,在C26细胞中联用组G₁ffl比例为75.12±4.90%较5-FU单用组64.02±2.54%明显提高，而在HCT11住田胞中G₁ffi比例从61.09±0.15%±升至U70.44±0.75%,且差异具有显著性(p&lt;0.001)。因此本文的结果表明不同维生素对5-FU的抗结肠肿瘤活性具有影响,其中VB<sub>2</subt5-FU抗月中瘤活性影响显著。VB<sub>2</sub内5-FU联用能通过增强5-FU促凋亡、自噬作用引起细胞G₁期阻滞从而协同降低C26和H