HIV实验室SOP文件-新版

1、HIV实验室SO四件-新版3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 0 页共 70 页目录HIV 筛查实验室的设置及人员情况3HIV 筛查实验室工作治理程序4HIV 筛查实验室工作流程图6HIV 筛查实验室规章制度7一、实验室工作制度 7二、岗位责任制 7三、标本治理制度 8四、试剂治理制度 11五、污染区工作守那么 12六、清洁区工作守那么 13七、环境消毒隔离制度 13八、实验台消毒举措 14九、废弃物处置和实验室消毒 15十、消毒液的配置及使用举措 16十一、消防平安制度 16十二、生物平安防护制度

2、16十三、职业暴露的防护及处理举措 17十四、筛查检验程序 18十五、检测结果的判定方法 25十六、检测结果报告规程25十七、检测结果的判定方法 26十八、检验结果的解释 27十九、检测数据的记录与保存 28二十、呈阳性反响标本的处理程序 28二十一、检测数据季报方案和程序 29二十二、感染追踪处理方案 30二十三、保密程序制度 31二十四、质量治理制度 323 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 1 页共 70 页二十五、室内质控分析治理制 33二十六、外部质控血清的制备和保存 34二十七、仪器的使用维

3、护 35人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒酶联免疫法36程序 HIV-抗体初筛试验标准操作酶联免疫法37人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒酶联免疫法38人类免疫缺陷病毒抗体检测胶体金法39科华酶标仪的标准操作程序SOP40科华全自动洗板机标准操作规程40加样器的维护保养程序41力口样枪校准记录41生物平安柜的标准操作程序SOP42离心机操作维护规程47室内质量限制的标准操作程序48室间质量评价的标准操作程序EQA55实验室意外和事故处理58艾滋病的职业暴露后预防60附表 1HIV 抗体筛查报告61附表 2HIV 抗体复检检测单62附表 3HIV 抗体检测数季报表65附表 4 艾滋病职业暴露个案登记表6

4、6附表 5 艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表 703 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 2 页共 70 页HIV筛查实验室的设置及人员情况为了更好发挥艾滋病检测在艾滋病防治工作中的作用,根据?全国艾滋病检测技术标准?对于艾滋病的检测要求,我院检验科设置了独立的 HIHIV V 筛查实验室.为了使检测工作能够正常进行,保证 HIVHIV检测结果的正确性和准确性,我们不仅对工作环境条件和检测设施加以整改,而且建立了完整的实验室标准化操作规程,以保证 HIVHIV 检测结果的准确有效.HIVHIV 检测实

5、验室分为清洁区、半污染区和操作区,配备了专用的的生物平安柜、电脑、冰箱、酶标仪、洗板机、恒温培养箱、离心机、高压消毒锅等设备和平安防护用品等.根据HIHIV V 检测实验室工作的需要,我科配备从事 HIHIV V检测工作人员4 4 名,其中专职工作治理人员 3 3 名,副高级技术人员 1 1 名,中级卫生技术职称人员 3 3名,所有人员从业年限均在 7 7 年以上.并积极参加省级、市级举办的 HIVHIV 检测技术培训,不断提升质量意识、技术水平和业务水平,保证 HIVHIV 检测工作的质量.HIVHIV 筛查实验室负责人：贾向东人员：孟晓虹吕华郭长城3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实

6、验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 3 页共 70 页HIV筛查实验室工作治理程序一、目的对 HIV 筛查实验室工作全过程进行限制,保证检验工作符合规定要求,提供可靠的检验数据和有效的检验报告.二、范围适用于本实验室开展的各类医学检验工作的各个环节.三、责任1、工作人员负责门诊检验样品的采集.2、工作人员负责住院检验样品的接收.3、负责人负责组织协调完成检验任务,并负责对检验工作质量的监督.4、工作人员负责执行检验任务,做好检验记录,填报检验数据.5、报告授权审核人负责检验报告的签发、发放.6、实验室负责人负责检验资料的归档保管计算机工作.四

7、、工作程序一、检验工作分类本实验室的检验工作,根据标本的来源不同分为采样检验和送样检验,根据工作性质分为常规标本检验和检验质量抽检委托复检.二、委托复检工作需按以下程序执行：1、当面核对标本姓名、性别、年龄及标本质量等资料；2、按要求进行检验；3、必要时委托方可全程参与检验过程；4、其余程序与常规检验标本相同.三、采样及样品治理3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 4 页共 70 页采样执行本科程序文件?标本采样治理程序?.样品接收、分发和保管处理,执行本科程序文件?标本治理程序?和?标本采样治理程序?

8、.样品一旦受理即给予受理编号.四、标本检验检验执行本科程序文件?标本检验治理程序?和?检验工程标准操作规程?五、检验依据1、国家标准方法；2、部颁标准方法和检验标准；3、卫生技术部门推荐使用方法；4、有关科技文献或杂志上发表的方法；5、自编规程的使用执行?检验方法确认程序?.六、检验实施检验人员按检验标准或作业指导书的要求按时完成检验任务,并按程序文件?记录档案治理程序?做好原始记录.七、检验报告的编制、复核和签发按本科程序文件?检验报告治理程序?执行.八、检验方法限制检验必须按?全国临床检验操作规程?规定的方法或标准检验方法进行,也可用经本科技术负责人批准的非标准检验方法进行.其他检验方法不

9、得采用.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 5 页共 70 页HIV筛查实验室工作流程图3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 6 页共 70 页HIV筛查实验室规章制度一、实验室工作制度1 .实验室保持清洁整洁,仪器设备要摆放整洁,说明书手册要妥善保管,原始记录不得擅自修改和销毁.2 .进入实验室前要摘除首饰修剪指甲,以免投手套.3 .严禁在艾滋病实验室进食,饮水,吸烟和化装.4 .不要将与工作无关的物品带入实

10、验室.5 .进入实验室要穿隔离衣,戴手套必要时戴双层手套和防护眼镜.6 .认真对待样品,严格遵守操作规程.7 .采血时一定要注意平安,使用一次性注射器,谨慎操作预防刺伤皮肤以免造成污染.8 .严格执行实验室工作人员年度采血和备案年度,工作人员从事工作必须进行 HIV 抗体和乙肝,丙肝等肝炎病毒标记物的检测,注射乙肝疫苗,每半年至一年进行一次抗体检测,并保存笑血清样品.二、岗位责任制1 .岗位责任制是保证工作质量和医疗平安,提升工作效率的重要环节.建立岗位责任制,做到人人分工责任明确,事事有人负责,立足本职,团结互助,相互协调,保证各项任务的胜利完成.2 .HIV 筛查实验室由有实践经验的技术人

11、员负责.3 .牢固树立把质量放在第一位的思想,在工作中必须增强检查和复查制度,以保证血液质量及医疗平安.4 .交接工作必须认真负责,须核对实物和记录,对工作一般情况、 存在问题和注意事项应进行具体交待,否那么,发生问题由交班人负责.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 7 页共 70 页5 .职工临时因故离开工作岗位,必须将工作委托给能胜任该项工作的人员,否那么,发生问题由原担任该项工作者负责.6 .新参加工作的职工,在未熟悉和掌握工作前不能独立工作不能顶岗位,在确能掌握经考核合格前方可.7 .建立 H

12、IV 筛查实验室专用的精密仪器和重要设备专责岗位制,其他人不得任意使用.严格根据仪器操作规程操作,不可擅自乱改设置.8 .但凡一物多人使用的,除共同负责外,应指定一人为该岗位责任制负责人,负责指导正确操纵,定期平安检查,经常维护保养,保持正常运转,该负责人有权制止任何违章操作和有害设备平安的行为.9 .人员责任分工：每日值班人员负责样品的采集,接收,执行检验任务,做好检验记录,填报检验数据,签发报告及实验室仪器设备的日常维护和保养.行政班人员负责协助值班人员做好实验室的所有日常工作,并负责对检验工作质量的监督,检验报告的复核、 发放,结果的解释,实验室室内消毒以及每日医疗废弃物的消毒处理.实验

13、室负责人负责检验资料的归档保管计算机工作.三、标本治理制度一、样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液,包括血清、血浆和全血.唾液或尿液有时也可作为测试样品.常用的血液样品的采集和处理方法如下：1、血清样品采集和处理1 、 用一次性注射器 或真空采血管 抽取一定量静脉血,室温下自然放置 12h,待血液凝固、血块收缩后再用 3000r/min 离心 15min,吸出血清备用2 、 如用滤纸片采样,那么手指或耳垂局部严格按常规进行消毒,在刺破皮肤后,迅速把滤纸片沾上,切勿让血液滴落在其它物体外表造成污染.采血后要待血样枯燥后再包装送检.2、抗凝血样品采集和处理3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV

14、 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 8 页共 70 页(1)、用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取静脉血,转移至加有抗凝剂的试管),反复轻摇,别离血浆和血细胞备用.(2)、应根据实验要求选用适当的抗凝剂,如 CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定可选用K3EDTA 或肝素或枸檬酸钠,HIV 病毒别离、核酸定性/定量检测可选用 K3EDTA 或枸檬酸钠.(3)、用于核酸定性检测时,采集的抗凝全血应在 48h 内别离 PBMC 和血浆,否那么应在 2448h 内别离血浆和血细胞.3、采集样品考前须知(1)、采集样品原那么上应按临床采血

15、技术标准操作.(2)、采集样品时应注意平安,建议采用真空采血管及蝶形针具,以预防直接接触血液；直接接触 HIV 感染者/艾滋病(AIDS)病人血液/体液的操作,应戴双层手套.(3)、所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品,均应视为有潜在传染性,都应以平安的方式进行操作.(4)、应象操作未知传染风险样品一样,小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量限制和参考物质.用后的包裹应进行消毒.(5)、 采血时一定要注意平安,采血用一次性注射器,谨慎操作,预防发生刺伤皮肤和造成外界污染.(6)、离心机要使用密闭的罐和密封头,以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶.(二)样品的保存1、用于抗体检测的

16、血清或血浆样品,应存放于-20C 以下,短期(1 周)内进行检测的样品可存放于 2-8C.2、用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20C 以下,进行病毒RNA 检测的样品如需保存 3 个月以上应置于-80C03、用于 CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定的样品不能长期保存,样品采集时间超过 48h 那么不可检测.(三)样品的运送3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 9 页共 70 页1、实验室间传递的样品应为血清或血浆,除特殊情况外一般不运送全血.2、应采用 WHO 提出的三级包装系统：第一层容

17、器： 装样品,要求防渗漏.样品应置于带盖的试管内,试管上应有明显的标记,标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间.在试管的周围应垫有缓冲吸水材料,以免碰碎.随样品应附有送检单,送检单应与样品分开放置.第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器,可以装假设干个第一层容器.将试管装入专用带盖的容器内,容器的材料要易于消毒处理.第三层容器：放在一个运输用外层包装内,应易于消毒.在第三层容器外面要贴标签数量,收、发件人.3、血清和血浆样品应在 28c 条件下由专人运送.用于 CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定的样品应在室温下 1823c 运送.每一包装的体积以不超过 50ml 为宜.4、

18、运送感染性材料必须有记录.5、 如别离血浆仍有困难,可直接将抗凝血-20C 以下冻存,采用冰壶冷藏运输,预防冻融.6、特殊情况下如需对个别样品进行复测,可以用特快专递形式投寄,但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好,预防使用玻璃容器,以保证不会破碎和溢漏.四.样本接收和拒收标准1、签收：实行双签制度,送检者及实验室验收人员均需签名.2、认真查对姓名,性别,年龄,住院号,病区/床号,检测目的及工程等.对不符合要求者记入拒收标本记录表中,并及时通知采样单位,正确及时地补采样本,以免延误病人的检测报告.3、对符合检测要求的标本及时进行唯一性编号详见标本唯一性编号标准操作程序并记入可接收标本记录表中

19、.4、含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训、穿戴防护衣的工作人员翻开,用后的包裹应进行消毒.4.1、核对样品与送检单,检查样品管有无破损和溢漏.如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出,对样品管和盛器进行消毒,同时报告科主任等3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 10 页共 70 页有关领导和专家.4.2、检查样品的状况,记录有无溶血、污染、血脂高及黄疸等情况.如果污染过重认为样品不能接受,那么应将样品平安废弃.并要将样品情况立即通知送样人.4.3、 翻开标本容器时要小心,以防内容

20、物泼溅.样品处理时假设内容物有可能溅出,那么应在生物平安柜中戴手套进行.同时应戴口罩、防护眼睛,以防皮肤或粘膜污染.4.4、 接收样品时应填写样品接收单.五标本检测1、离心机要使用密闭的罐和密封头,以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶.复核标本接收过程中的每一步骤,在检测过程中,应严格根据标准化操作规程.2、在标本足够的情况下,不能浪费、随意丢弃或损坏标本.应象操作未知传染风险样品一样,小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量限制和参考物质.用后的包裹应进行消毒六、标本处理检验标本先用含 2-3g/L 有效氯消毒剂浸泡半小时,再用高压锅高压消毒.然后用双层专用黄色医用垃圾袋专人收集所有废

21、弃医用垃圾.送专门存放医用垃圾处统一焚化处理.四、试剂治理制度一、采购与审批科主任根据需要定期拟定采购方案,交由院领导审批,批核后由科主任交与器械科,有器械科与经销联系二、验收与登记仓管负责人根据供给商提供的试剂及清单对数量、品种、品牌、包装等进行验收,并将入库数据登记.三、贮存3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 11 页共 70 页冷藏试剂统一存放在 HIV 实验室专用的冰箱内,冷箱保管及温度限制由仓管负责人负责.HIV 试剂一般应 28c 避光保存,在有效期内使用.四、出库治理各室提出试剂中领,仓

22、管人填写出库单据,认领人签名后出库.五、其它1、试剂的保存应严格根据要求存放,以保证有效期内能有效地使用,杜绝浪费现象.2、仓管人应对试剂库存定期检查,不使用过期变质的试剂.3、易燃,易爆试剂应分开存放远离火源和电源.4、剧毒试剂必须由科主任和负责科室保卫的同志负责保存,放保险箱内,使用时应有两人在场,并做好登记.五：污染区工作守那么做好污染区实验室废弃物的消毒处理,未经实验室治理人员许可不得进入污染区.1 1、但凡被血液、体液污染的物品要先消毒灭菌后清洗.2 2、严格操作程序,做好各种实验记录,实验阳性标本保存至 5 5年,经过免疫印记确诊的阴性标本也要保存,不得擅自处理.3 3、禁止用口吸

23、液体,必须使用移液器操作.4 4、操作中有标本等外溅时,应及时消毒,对大量溅出的高浓度污染物在清洁前先用 1%1%次氯酸钠溶液浸泡,然后戴上手套擦洗.5 5、每次实验后,要对工作台面消毒,用 0.2%-1%0.2%-1%次氯酸钠溶液喷洒和浸泡.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 12 页共 70 页6 6、离开实验室前要脱去手套,隔离衣等防护物品,放入指定污桶,用肥皂和流水洗手.六：清洁区工作守那么1 1、实验室是检验工作的场所,要保持清洁、安静、物品摆放要整洁.2 2、清洁的防护服置于实验室清洁区内

24、存放处.检验人员工作时应按要求穿工作服、工作衣、帽、专用鞋等.3 3、禁止将与检验工作无关的物品带入检验室,禁止在检验室内会客、抽烟、吃东西.4 4、注意平安,下班后、节假日必须切断水源、气源、电源,关好门窗.5 5、严禁将污染区的物品带入清洁区.6 6、妥善保管仪器、设备的说明书、操作规程、原始记录表、零部件、常用工具、电源线、连接线要排列整洁.7 7、检验室须配置消防设备,并经常检查待用状态,任何人不得擅自挪用或挪动.七、环境消毒隔离制度1、 实验室应分为清洁区和操作区,清洁区要注意保护不受污染.操作有气溶胶可能的标本应配置生物平安柜及其它防护设置,如紫外线灯,排气扇等操作区的工作台及地面

25、每日用消毒液擦拭一次,有污染时随时消毒,每周大扫除一次.2、采血室每日操作前用清水擦拭操作台一次,采血结束用消毒液擦拭操作台、桌子和地面一次,紫外线每日照射消毒二次,每月空气细菌培养一次,紫外线强度定期测定.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 13 页共 70 页3、各种检验标本的收集,送检必须用相应指定的容器留取,不得外溢污染.4、静脉及末稍采血,应严格执行消毒隔离举措,静脉抽血做到一人一针一筒一巾一带一消毒,所用止血带及纸垫每日消毒,末稍采血一人一片一管,杜绝交叉污染.5、一次性医用器具包括采血针

26、,注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管,应严格做好领发登记,注射器先浸泡消毒后由供给室一对一调换,统一处理,其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送燃烧炉燃烧.6、检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术,操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩,操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手,必要时用消毒液浸泡双手,酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次.7、溢出试管外的血液,应立即用碘酒棉签擦拭干净,注意预防玻璃碎片刺伤手,并注意试管有无破裂.8、当针头和碎玻璃刺伤手时,用流水冲洗,挤出血水,应立即用碘酒消毒局部.9、实验室操作时应戴上手套.吸取标本,离心振荡等应严格按操作规程,防止自身和实验室受污染.10、已检

27、查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠2000mg/L中两小时后,标本倾弃,一次性容器送燃烧,重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用,均要有记录.有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理,预防污染环境.11、非科室工作人员不准进入实验室,外来人员参观需经科主任同意方可进入.八、实验台消毒举措1、实验台消毒举措必须符合艾滋病实验室的通用生物平安要求.由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒.2、台面的清洁消毒,保持清洁、湿式清扫.每天开始工作前用湿布抹擦 1次,地面用湿拖把擦 1 次,禁用干抹干扫.抹布和拖把等清洁用具实验室专用,不得混用,用后洗净晾干,下班前用含氯消毒剂次氯酸钠,含有效氯 2000mg/L

28、、0.20.5%过氧乙酸或 75%乙醇抹擦 1 次.也可用便捷式高强度紫外线消毒器近距离照射消毒.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 14 页共 70 页3、应象操作未知传染风险样品一样进行消毒与灭菌,小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的血液、质量限制和参考物质,假设被上述物品明显污染,如具传染性的标本或培养物外溢,溅泼或器皿打破,洒落于台面,应立即用消毒液消毒,用 5000mg/L 有效氯消毒剂、 过氧乙酸或乙醇洒于污染的台面,并使消毒液浸过污染外表,保持 3060min 后再擦,拖把用后浸于上述

29、消毒液内 1h 以上.4、各类在实验室实验台上操作后的废弃物品均应视作物染物分类处理,所有废弃物应视为 HIV 污染物品,根据?传染病防治法?处理.九、废弃物处置和实验室消毒1、废弃物处置废弃物处置应符合?实验室生物平安通用要求?GB19489-2004和?消毒技术标准2002 年版0从艾滋病实验室出来的所有废弃物,包括不再需要的样品、培养物和其它物品,均应视为感染性废弃物,应置于专用的密封防漏容器中,平安运至消毒室,并在高压消毒后再进行处理或废弃.2、HIV 常用的物理消毒方法压力蒸汽消毒,121C,保持 1520min;枯燥空气烘箱消毒干烤消毒,140C,保持 23h.3、HIV 常用的化

30、学消毒方法HIV 最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂次氯酸钠,含有效氯 20005000mg/L、75%乙醇和 2%戊二醛,保持 1030min.4、废弃物缸：5000mg/L 次氯酸钠.5、生物平安柜工作台面和仪器外表：75%乙醇.6、溢出物：5000mg/L 次氯酸钠.7、污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸.器械可用 2%戊二醛浸泡消毒.十、消毒液的配制及使用举措1、HIV 实验室最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂次氯酸钠,含有效氯2000-5000mg/L、75%乙醇和 2%戊二醛,保持 1030min.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO

31、汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 15 页共 70 页2、含氯消毒剂的配制：次氯酸钠原液使用前进行 1:201:50 稀释(2000-5000mg/L)或联昌84使用前进行1:101:25(2000-5000mg/L)稀释后,用于实验室内的消毒.3、乙醇,俗称酒精,能够杀灭多种细菌,对 HIV 病毒有一定的杀灭作用,7075%的效果最好.因此,使用前新鲜配置足量 7075%的乙醇,用于生物安全柜、工作台面和仪器外表的消毒,可以到达最正确的消毒效果.4、过氧乙酸也是目前使用比拟广泛的一种高效消毒剂,新鲜配置 13%的过氧乙酸熏蒸,用于地面、墙壁、实验器材

32、及实验室内资料、文件、书本等物品的消毒.0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡 120 分钟,再用肥皂洗手.5、2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒,医疗器械等.6、 HIV 实验室常用化学消毒剂的配置,本着多用多配,少用少配,现用现配的原那么,保证消毒剂使用时的浓度,保证消毒效果.十一、消防平安制度1、根据谁主管、谁负责的原那么,实行科室负责制.2、主管领导和保卫科对全体职工经常进行消防平安教育,提升思想熟悉,掌握消防知识和消防器材的使用.3、严格执行?平安防火治理制度?各种火种与易燃易爆物品,必须严格分区,保持一定的平安距离.实验室实施单向流向制度,通道不得乱堆放易燃爆物品和杂物.4、严禁

33、在实验室内吸烟.5、电器的安装与撤除,必须由电工进行,严禁乱接电源,乱后电线.6、各种机电设备、高温电器设备、耐高压容器和设施,使用时必须有专人负责,随时检查,消除隐患,严防事故发生.7、各防火区域设置的消防器材和设备,应定期进行检查,维修和更换,随时处于完好状态,并不得随便挪动.8、任何人发现火、水灾等隐患者,必须及时向科领导报告.科主任及时向院领导报告,及时做好善事处理工作.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 16 页共 70 页十二、生物平安防护制度1、上岗工作人员应是经过岗前平安与技术培训,取

34、得合格证,具有独立工作水平的人员.2、进入实验室应穿隔离衣、戴手套,必要时如对筛查阳性标本进行复测或检测高危标本要戴防护眼镜,预防污染暴露的皮肤和衣物.3、严格根据操作规程操作.操作过程中,不得用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等.4、操作时可能发生的触电、失火、玻璃割伤、针头刺伤、烧伤、不慎中毒、传染性标本的污染,有应急处理的方法,有关工作人员均应熟悉.5、操作中手套破损,应立即丢弃,洗手后戴上新手套继续操作,不慎发生泻漏,应立即根据?发生职业暴露后的处理举措?,进行处理.6、预防腐蚀、灼伤、中毒、火灾和爆炸等事件发生.7、实验操作完毕后,应根据实验室清理与消毒程序,进行善后

35、处理.同时记录相关资料与数据并存档.8、工作结束后,应先洗戴手套的手,然后脱去手套丢弃,再脱去工作衣,用肥皂和流动水洗手后离开实验室.9、注意平安,随手关门,做好水,电,门的平安保卫工作,防火防盗防水.十三、职业暴露的防护及处理举措HIV 检测实验室职业暴露是指检验工作人员在从事检测工作过程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、 体液污染了皮肤或者粘膜,或者被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其他利器刺破皮肤,有可能被艾滋病病毒感染的情况.一、防护举措：1 .医务人员进行有可能接触病人血液、 体液的诊疗和护理操作时必须戴手套,操作完毕,脱去手套后立即洗手,必要时进行手消毒.2 .

36、在诊疗、护理操作过程中,有可能发生血液、体液飞溅到医务人员的面部时,医务人员应当戴手套、具有防渗透性能的口罩、防护眼镜；有可能发生血液、体3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 17 页共 70 页液大面积飞溅或者有可能污染医务人员的身体时,还应当穿戴具有防渗透性能的隔离衣或者围裙.3 .医务人员手部皮肤发生破损,在进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴双层手套.4 .医务人员在进行侵袭性诊疗,护理操作过程中,要保证充足的光线,并特别注意预防被针头、缝合针、刀片等锐器刺伤或者划伤.5 .使用

37、后的锐器应当直接放入耐刺、防渗漏的利器盒,也可使用具有平安性能的注射器、输液器等医用锐器,以防刺伤.6 .禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套.禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器.二、处理举措：1 .用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤,用生理盐水冲洗粘膜.2 .如有伤口,应当在伤口旁端轻轻挤压,尽可能挤出损伤处的血液,再用肥皂液和流动水进行冲洗,禁止进行伤口的局部挤压.3 .受伤部位的伤口冲洗后,应当用消毒液,如 75%的酒精或者 0.5%的碘伏等进行消毒,并包扎伤口；被暴露的粘膜,应当反复用生理盐水冲洗干净.4 .在暴露后的 0 周、第四周、第八周、第十二周及六个月时抽血进行检测艾滋病病

38、毒抗体.5 .预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始,最好在四小时内实施,最迟不得超过二十四小时；即使超过 24 小时,也应当实施预防性用药,连续使用 28 天.6 .发生艾滋病病毒职业暴露后立即通知院感科备案、评估.十四、筛查检验程序1、筛查试剂必须是经国家食品药品监督治理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂.推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂.2、筛查方法一,胶体金法3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 18 页共 70 页样品的采集和保存1 .采集静脉的血清、血浆样本必须在

39、无菌条件下,并预防样品溶血.2 .如果血清和血浆样品收集后 7 天内检测,样品须放在 2-8C 保存,如果大于 7 天那么须冷冻保存.操作步骤在使用此测试卡前必须仔细阅读试剂的说明书,需严格根据试剂说明书执行有关操作,否那么无法保证可靠的结果.1 .将待测标本从储存条件下取出,平衡至室温并编号.2 .将所需数量的测试卡从包装盒中取出平衡至室温,翻开铝箔包装袋,平置于台面上.3 .用微量加样器取 50 口样本血清,加到测试卡的加样处.4 .加样后,阳性标本可在 130 分钟内检出.经过试验确证,反响时间 从加样后计算起超过 30 分钟将对实验结果的观察造成影响,因此,建议 30 分钟再最终观察并

40、记录实验结果.结果判断阳性:测试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带.如果检测区的紫红色条带隐约可见,建议对该样本重复试验,并使用其他方法确认.阴性:测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带.失效:对照区未出现紫红色条带,说明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高.在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并将待测样本稀释后用新的测试卡重新测试.注意:测试区T内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象.但是,在规定的观察时间内,不管该色带颜色深浅,即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果.二,酶联免疫法1 珠海丽珠原理及用途：本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒 I 型和 H 型填HIV

41、-1/HIV-2 璘抗原合成肽或基因重组蛋白,包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2 抗原及其他试剂组成.应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 19 页共 70 页的 HIV-1/HIV-2 抗体.试剂盒成分 HIV 抗原包被板 12 孔 X8,HIV 酶标记物 7m1X1 瓶,阴性对照 1mlX1 瓶,阳性对照 1mlX1 瓶,20 倍浓缩洗液 50mlX1 瓶,底物缓冲液 7mlX1 瓶,底物液 7mlX1 瓶,终止液 7mlX1 瓶,封口袋 1 个,说明

42、书 1 份操作方法将试剂盒平衡至室温,取出所需的条板,剩余的即时封存.用去离子水和蒸储水20倍稀释浓缩洗涤液.将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔况每次实验需设外部对照 1 孔阳性对照 2 孔阴性对照 3 孔.在样品孔中参加 50ul 待测样品,阴性、 阳性对照及外部对照每孔参加 50ul,轻拍混匀.置 37c 温育 60 分钟.将孔内液体甩干,置洗板机用洗涤液充分洗涤 5 遍,扣干.每孔参加 50ul酶标记物,轻拍混匀,置 37c 温育 30 分钟.重复步骤.每孔参加 50ul 底物缓冲液和50ul 底物液,轻拍混匀,置 37c 避光温育 30

43、分钟.每孔参加 50ul 终止液终止显色反响,用酶标仪双波长 450nm/630nm 测定各孔 A 值.结果判定临界值况 Cutoff=0.15 十阴性对照的平均 A值 阴性对照的平均A值小于 0.08按 0.08计算,大于0.08按实际值计算 ,样品的 A 值Cutoff 值为 HIV 抗体阳性；样品的 ACutoff 值为 HIV 抗体阴性.2 北京万泰试剂厂家：北京万泰生物工程公司试剂类型：双抗原夹心酶联免疫法仪器：a.洗板机 b.酶标仪 c.恒温箱标本的采集与要求1 病人的准备：无特殊要求.2 标本的类型：无溶血的血清或血浆.3 标本准备： 取无菌试管采集全血 2ml,待血液凝固后离心

44、别离血清,标本应无溶血现象.标本采集后应及时测定,如不能及时测定,将别离后的血泊样本放置于 46c冰箱保存不超过 4 天,-20C 以下保存可延长一个月,-80C 一下可长期保存.不合要求的样本按样本拒收制度执行.操作步骤1、配液：将 50ml 浓缩洗涤液用蒸储水或去离子水 20 倍稀释至 1000ml 备用.2、编号：将样品对应微孔按序编号,每板设阴性对照 3 孔、阳性对照 I型 2 孔,外部对照 1 孔.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 20 页共 70 页3、加样：分别在相应孔中参加待检中品、

45、阴阳对照、外部对照各 100 口.4、温育：封板后 37+1C60min5、洗涤：洗板机洗 5 遍.6、加酶：每孔参加酶标试剂 100J.7、温育：37+1C30min8、洗涤：洗板机洗 5 遍9、显色：各孔参加 A、B 显色液 504,混匀,37+1C30mino10、测定：参加终止液 50 口,450nm/620nm 波长测定各孔 ODfi.结果判断：阴性对照孔 ODfi0,80,试验有效.临界值(CUTOFF 的计算临界值=阴性对照孔 ODi值 Nc+0.12.阳性判定： 样品 OD大于等于临界值(CUTOFF 为 HIV 抗体阳性,样品小于临界值为阴性.(注意：初试阳性标本应重新取样进

46、行双孔复试,复试阳性者应按?全国艾滋病检测技术标准?进行确证实验.3,厦门英科新创【试剂名称】人类免疫缺陷病毒 HIV(1+2 型)抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)【汉语拼音】RENLEIMIANYIQUEXIANBINGDU(HIV1+2XING)KANGTIZHENDUANSHIJIHE(MEILIANMIANYIFA)【英文名】HIV(1+2)AntibodiesELISAKit【检测原理】本试剂盒采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的(HIV1/2)型抗体.采用多种HIV-1 和 HIV-2 的特异性抗原制作预包被板及酶结合物.当待检样本中存在 HIV 抗体时,在反响过程中形成“周相

47、HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原的免疫复合物,参加底物后形成显色反响.【适用范围】人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体辅助诊断及献血员筛查.【试剂组成】序号组分名称数量包装规格序号组分名称数量包装规格1 微孔板 1 包 8X12T6 显色剂 A1 瓶 7ml3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 21 页共 70 页2 酶标抗原 1 瓶 14ml7 显色剂 B1 瓶 7ml3 阳性对照 1 瓶 1ml8 终止液 1 瓶 7ml4 阴性对照 1 瓶 1ml9 说明书 1 份5 洗涤液 2 瓶 25m

48、l10 自封袋 1 个11 封板膜 3 张【样品的采集和保存】1 .采集静脉的血清、血浆样本应在无菌条件下保存,并预防样品溶血及反复冻溶.2 .血清和血浆样品收集后如果无法在当天检测,样品须在 2-8C 保存；如果大于 7天那么须冷冻保存.【操作步骤】:在使用本检测试剂前必须仔细阅读使用说明书.1 .平衡:将试剂盒各组分从盒中取出,平衡至室温18C-25C,微孔板开封后按需要取用,余者及时以自封袋封存.2 .配液:浓缩洗涤液配置前充分摇匀 如有晶体应充分溶解,浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按 1:19 稀释后使用.3 .编号:取所需数量微孔条固定于支架,按序编号.4 .加样:按顺序分别在相应孔参

49、加 50 仙 l 待测样品及阴、阳性对照血清.5 .温育:覆上封板膜,置 37c 温育 30 分钟.6 .洗涤:用洗涤液充分洗涤 5 次,洗涤完后扣干每次应保持 30-60 秒的浸泡时间.7 .加酶:分别在每孔中参加酶标抗原 100 仙 l.8 .温育:覆上封板膜,置 37c 温育 30 分钟.9 .洗涤:用洗涤液充分洗涤 5 次,洗涤完后扣干每次应保持 30-60 秒的浸泡时间.10 .显色:每孔加底物 A、B 各 50 口,轻拍混匀,覆上封板膜,37c 暗置 20 分钟.11 终止:每孔参加终止液 50 仙 l,混匀.12.测定:用酶标仪单波长 450nm 或双波长 450/630nm 测

50、定各孔 OD 值用单波长测定时,需设空白对照一孔,30 分钟内完成测定,并记录结果.【结果判定】|1、阳性对照均值应大于阴性对照均值 0.60 以上且阴性对照均值小于 0.10 方可认3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 22 页共 70 页为本次实验有效.2、 临界值计算：CutoffValue=0.10+阴性对照均值 假设阴性对照均值小于 0.05,以 0.05计.3、 样本 OD 值大于或等于临界值为初筛阳性,小于临界值为阴性.初筛阳性者重新取样双孔复试,复试阳性者应根据“全国 HIV 检测治理标

51、准送 HIV 确认实验室进行确认试验.【考前须知】1、 本检测试剂仅用于体外诊断试验.仅用于人血清或血浆样本,其它体液和样品可能得不到准确的结果.2、本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的 HIV 初筛实验室.3、样本的加样建议使用微量加样器准确参加.酶标抗原需用微量加液器加液,并经常校对其准确性.加酶标记抗原时,注意勿使微量加液器的加样头接触样本以预防样本间相互污染.加试剂前,应先将试剂瓶翻转数次,使液体混匀.4、封板膜为一次性使用,每次使用后请丢弃,重复使用将导致严重污染.5、HIV 检测必须符合 HIV 实验室治理标准和生物平安守那么的规定,严格预防交叉感染,严格健全和执行消毒隔

52、离制度.所有样品、 洗涤液和各种废弃物应按传染物处理.对于那些含有感染源和疑心含有感染源的物质应有适宜的生物平安保证程序,下列为有关考前须知但不仅限于此：* 带手套处理样本和试剂* 不要用嘴吸样* 不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜* 用消毒剂对溅出的样本或试剂进行消毒* 按当地的有关条例来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物*试剂各组份在正当处理和保存的情况下直至效期都保持稳定,不能使用过效期的试剂盒6、HIV 抗体检定结果的判定必须以酶标仪读数为准.样本的酶标仪读值与样本中抗体的滴度没有一定的必然联系.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任

53、部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 23 页共 70 页7、任何一种测试都不能绝对保证样本中没有低浓度的抗体存在,所以阴性结果任何时候不能排除含有 HIV 暴露和感染的可能.8、每板建议设阴、阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样本及酶标抗原,其余各步相同.9、 洗涤液应先取出预先稀释,洗涤时各孔均须加满但应预防溢流,预防孔口内有游离酶未能洗净.10、不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果.【贮藏】储存:2-8C 避光保存【有效期】十二个月【批准文号】3、复检试验：对初筛呈阳性反响的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测.如两

54、种试剂复测均呈阴性反响,那么报告 HIV 抗体阴性；如均呈阳性反响,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行确认见图 1.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 24 页共 70 页送确认实验室确认报告图1HIV抗体筛查检测流程4、初筛试验结果的报告对 HIV 抗体筛查试验,呈阴性反响者可出具“HIV 抗体阴性报告(可用附表 1);对初筛试验呈阳性反响者不能出阳性报告,可出具“HIV 抗体待复查报告(附表 1).8、初筛试验呈阳性反响样品的转送如需送上级实验室进行复测或确认,需要填写“HIV 抗体复测送检单(

55、附表2),经 1 名检验人员和 1 名具有中级以上技术职称的人员审核签字.送当地艾滋病筛查中央实验室,再转送艾滋病确认实验室,或在本实验室复检后直接送确认实验室.9、对筛查阴性和阳性者,均需做好检测后咨询.十五、检测结果的判定方法1、HIV 测定(胶体金法)结果的判定方法(1)、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反响.(2)、阴性：仅出现质控一条红线,那么实验结果为阴性.(3)、无效：如无红线(或只有反响线)出现,说明实验无效,须重新检测.2、HIV 测定(ELISA 法)结果的判定方法(1)、计算临界值 CO(cut-off)值.(2)、临界值=阴性对照 A 均值+0.12(3)、正常情况下,

56、阴性对照孔的 OD 值 00.10 假设 1 孔阴性对照的 OD 值0.1 应舍弃,假设有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的 OD 值0.1,应重复实验.).样品 OD 值(临界值者为 HIV 抗体阴性.(4)、正常情况下,阳性对照孔的 OD 值0.80 假设 1 孔阳性对照的.口值3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 25 页共 70 页0.8应舍弃,假设有 2 孔或 2孔以上阳性对照的 OD 值0.8,应重复实验.样品 OD值可缶界值者为 HIV 抗体阳性.十六、检测结果报告规程1、从事 HIV 检测

57、工作的技术人员必须接受过上岗前的培训和定期复训.2、HIV 检测工作必须在独立的实验室内进行.3、初筛检测试剂必须是经国家食品药品监督治理局注册批准、中国药品生物制品检定所批批检合格且在有效期内的试剂.4、根据?全国艾滋病检测技术标准?的要求建立健全质量治理制度、实验室平安标准操作规程、平安防护工作等.5、检测结果报告前应填写好原始实验记录资料,包括试验日期,试验操作记录,检测样品及空白、阴、阳对照结果,S/CO 值、临界值、试剂厂家、批号、效期,检测人、复核人签名等.6、将试验结果存档保存,处理试验废物,擦净实验台,做好实验室消毒卫生.7、结果报告：对呈阴性反响的样品,可出具“HIV 抗体筛

58、查报告(见附表1)阴性报告；对呈阳性反响的样品,须进行复检,不能出阳性报告.8、复检试验：对初筛呈阳性反响的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测.如两种试剂复测均呈阴性反响,那么报告“HIV 抗体筛查报告(见附表 1)阴性；如均呈阳性反响,或一阴一阳,那么应根据?全国HIV 检测治理标准?的要求送艾滋病确认实验室进行确证试验.十七、检测结果的判定方法1、HIV 测定(胶体金法)结果的判定方法(1)、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反响.(2)、阴性：仅出现质控一条红线,那么实验结果为阴性.(3)、无效：如无红线(或只有反响线)出现,说明实验无效,须重新检测.2、HIV

59、测定(ELISA 法)结果的判定方法(1)、计算临界值 CO(cut-off)值.3 河南省鹤壁市中医院检验科HIV 筛查实验室 SO 汽件责任部门检验科文件编号202105版次/页码第 1 版第 3 次修改第 26 页共 70 页2、临界值=阴性对照 A 均值+0.123、正常情况下,阴性对照孔的 OD 值 00.10 假设 1 孔阴性对照的 OD 值0.1应舍弃,假设有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的 OD 值0.1,应重复实验.样品 OD 值临界值者为 HIV 抗体阴性.4、正常情况下,阳性对照孔的 OD 值0.80 假设 1 孔阳性对照的 OD 侑0.8应舍弃,假设有 2 孔或 2 孔

60、以上阳性对照的 OD 值0.8,应重复实验.样品 OD 值可缶界值者为 HIV 抗体阳性.十八、检验结果的解释HIV 抗体检测的结果有三种,分别是阳性、阴性和不确定,绝大多数情况下都是阳性或阴性,出现不确定结果的情况很少.一、阳性结果的解释1、 说明一个人感染了 HIV,具有传播性当一个人 HIV 抗体检测结果为阳性,说明这个人已经感染了 HIV,具有把 HIV 传播给别人的可能.2、不能判断发病与否,不能判断疾病的进展.HIV 抗体检测结果只能说明一个人是否感染了 HIV,阳性结果并非就意味着一个人已经得了艾滋病,也不能说明患者处于疾病开展的哪个阶段.假设要判断疾病的进展,那么要做另外的实验