细菌个数的测定

1、实验原理七工对返排液杀菌效果的测试方法:推测返排液主要的细菌为硫酸盐还原菌、铁细菌和腐生菌。通过加入不同杀菌剂，测量加入前后细菌含量，得出不同杀菌剂的杀菌率，优选效果最好的杀菌剂。实验仪器：1）硫酸盐还原菌（SRB）测试瓶:2）铁细菌（IB）测试瓶：3）腐生菌（TGB）测试瓶：4）注射器：1ml：5）恒温培养箱：6）电热消毒器。实验步骤：1）将测试瓶排成两组，并编号；这是二次重复法，三次重复法方法类似，不过要把测试瓶分为三组。2）用120C消毒20min的无菌注射器取1.0ml水样注入第一组1号瓶内，充分震荡：3）用另一只无菌注射器从第一组1号瓶中取1.0ml水样注入第一组2号瓶：4）再更换无

2、菌注射器从第一组2号瓶取1.0ml水样注入第一组3号瓶；5）以此类推一只稀释到最后一瓶为止。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶:6）将杀菌剂加入到所测试的水样，用无菌注射器去L0ml杀菌后的水样注入到第二组1号瓶内：7）用另外一只无菌注射器从第二组1号瓶去L0ml水样注入第.组2号瓶：8）以此类推。根据细菌含量决定稀释瓶数，一般稀释到7号瓶：9）将上述测试瓶放入放入恒温培养箱中培养，温度控制在37C,7d后读数；10）用卜列公式计算杀菌率:Bl-B2Y=X100%BlY一一杀菌剂的杀菌率，%：Bl-加杀菌剂前水样中细菌含量，个/ml;B2一一加杀菌剂后水样中细菌含量，个/ml。备注：一

3、、注意事项1）SRB测试瓶变黑或者有黑色沉淀，表示有硫酸盐还原菌；TGB测试瓶由红变为黄或浑浊，表示有腐生菌：IB测试瓶出现棕红色沉淀，表示仃铁细菌。2）杀菌剂的加昼为50mg/L;3）在室温下向水样注入杀菌剂，杀菌时间为4h：4）腐生菌的培养时间是5d7d：铁细菌的培养时间是7d14d,硫酸盐还原菌的培养时间是14d"21do5）测试瓶大概为3元/瓶。二、读数方法：1 .生长指标的确定原则：1）全部呈阳性反应的最后一列平行样应为生长指标的第一位数。2）同一平行样，有X个阳性反应瓶，生长指标即为X。2 .级数的确定原则：1）全部呈阳性反应的最后一列平行样的瓶号数减去1,即为级数n,以

4、10n表示。2 ）1号瓶的2或3个平行样未全部发生阳性反应时,级数为0,即为100。3 .细菌测试瓶测试方法及结果报告示例例：做三个平行样重复试验，每个样稀释5个梯度：123451,r3，4，5，1”23”45”即分别在1、1、1”号瓶中注入1ml水样，摇匀后取出1ml再分别注入2、T、2号摇匀后取出1ml再分别注入3、3'、3”瓶中，以此类推直至注入到5、5'、5号瓶。在恒温下放置一段时间后，观察测试瓶阳性(变色)反应个数。即：1+23-451'+1'+3'+4*5'-1"+2"+3”4”5”一所以读数为:321；级数：10

5、0(14=0)此生长指标为321,级数为100。通过查表可知，321对应的细菌量为15个/ml,此系列报告结果为:15x100=1500个/ml。1+2+3+4+5+1'+2'+3'+4'5'+1"+2"+3+4”5此生长指标为312,级数为102(3-1=2)。通过查表可知312对应的细菌量为11.5个/ml。此系列报告结果为：11.5x102=1173个/mL1+2+3+4+5+1'+2'+3'+4'+5'+1"+2'+3+4"+5'+00此生长指标为30

6、0,级数为104(5-1=4)。通过查表可知，300对应的细菌量为2.5个/ml。此系列报告结果为225x104=2600个/ml。例子11列2列3列4列5列+，+此生长指标为321,级数为100(1-1=0)。通过查表可知，321对应的细菌量为15个/ml。此系列报告结果为15x100=1500个/ml。例子21歹IJ2歹IJ3列4歹IJ5歹IJ+1，+此生长指标为311,级数为2（3-1=2）。通过查表可知，311对应的细菌量为7.5个/ml。此系列报告结果为7.5x102=765个/mL例子31号瓶2号瓶37怅4号瓶5号瓶+11此生长指标为211,级数为1（2-1=1）。通过查表可知，2

7、11对应的细菌量为13个/ml。此系列报告结果为13x101=1313个/ml。例子41号瓶2号瓶3号瓶4号瓶5号瓶+此生长指标为111,级数为0（1-1=0）。通过查表可知，111对应的细菌量为2.0个/mL此系列报告结果为W2xl00=200个/ml注：a）做几个平行样对应查几次重复计数表（即生化检测方法中的MPN表）。b）计算公式为：发生阳极反应瓶号数-级数，即在结果后应xlOn。如1号瓶级数为0级，即在结果后xlOO：2号瓶级数为1级，即在结果后xlOlc）如果第一列（1、1'、1"）未全部发生阳性反应，报告结果应注明“W”；d）如果至最后一列（5、5'、5）

8、全部发生阳性反应，报告结果应注明“2”，此情况卜说明细同量大，应增加测试瓶个数以求得较准确的结果。e）测试瓶注入水样后应用力摇尾，以保证结果的准确性：逐级稀释水样时，应更换无菌注射器，以保证结果的准确性附录细菌量统计表1稀释法三次重更菌量统计见表1:表1稀释法三次重复菌量计数表生长指标细菌量：个/ml生长指标细菌量：个/ml生长指标细菌量；个/ml0000020114302650010.32022.031045010032101531175011062112.03121150200.63.0313160100042202.0320951010.7901303211501021.13.5a”20.011007403233001111.123030330250120112313.533145.01211.5232403321100130163002.533314002000.9301402稀释法二次重亚菌量统计见表2：表2稀释法二次重复菌量计数表生长指标细菌量：个/