基因工程试题8

1、基因工程试题一、选择题(每题1分,共15分)1、以下有关基因的表达,错误的就是AA蛋白质就是基因表达的唯一产物B基因就是DNA链上具有编码功能的片段C基因也可以就是RNAD基因突变不一定导致其表达产物改变结构2、基因工程的单元操作顺序就是【B】A增,转才佥,切,接C接,转,增才佥,切3、生物工程的上游技术就是【A基因工程及别离工程C基因工程及酶工程B切,接,转,增,检D切,接,增,转椅AB基因工程及发酵工程D基因工程及细胞工程4、以下各组专业术语中,含义最为接近的就是CA终止子与终止密码子B基因表达与基因转译CDNA退火与DNA复性D重组子与转化子5、根据酶切活性对盐浓度的要求,限制性核酸内切

2、酶可分成BA2大类B3大类C4大类D5大类6、T4-DNA连接酶就是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起,其底物的关键基团就是【D】A2'-OH与5'-PB2'-OH与3'-PC3'-OH与2'-PD5'-OH与3'-P7、以下有关连接反响的表达,错误的就是AA连接反响的最正确温度为37CB连接反响缓冲体系的甘油浓度应低于10%C连接反响缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMD连接酶通常应过量2-5倍8、原生质体转化方法不大适用于【A】A大肠杆菌B枯草杆菌C酵母菌D链霉菌9、以下各常用载体的装载量排列顺序,正确的就是AACos

3、mid>方DNA>PlasmidB入-DNA>Cosmid>PlasmidCPlasmid>入-DNA>CosmidDCosmid>Plasmid>2-DNA10、假设某质粒带有lacZ标记基因,那么与之相匹配的筛选方法就是在筛选培养基中参加【D】A半乳糖B异丙基琉基-&半乳糖甘(IPTG)C蔗糖D5-澳-4-氯-3-呷咪基-B-D-半乳糖昔(X-gal)11、以下各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中,错误的就是CA大肠杆菌-繁殖迅速B枯草杆菌-分泌机制健全C链霉菌-遗传稳定D酵母菌-表达产物具有真核性12、分子杂交的化学原

4、理就是形成【D】A共价键B离子键C疏水键D氢键13、某一重组DNA6、2kb的载体局部有两个SmaI酶切位点.用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子,其长度总与与数据吻合,该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有DA4个B3个C2个D至少2个14、以下设计的探针中,最正确的就是【D】AACATTAAATTATTBGGGCACACCTTGATAAGGTDCGGACTTGACCATC15、cDNA法获得目的基因的优点就是AA成功率高B不含内含子C操作简便D表达产物可以分泌二、名词解释每题2分,共20分1、Southernblotting:SouthernER迹:Southern创造的一

5、种影印转移物质的方法.2、Cosmidvector:黏粒载体:含有cos位点的质粒载体.3、cDNAlibrary:cDNA文库:就是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合.4、RACE:就是一种通过PCR进彳TcDNA末端快速克隆的技术,就是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3或5端之间未知序列的方法.5、Probe:探针:指被标记物质标记了的核酸.6、RT-PCR:逆转录PCR:先用逆转录酶作用于mRNA,以寡聚dT为引物合成cDNA第一链,然后用一对引物,扩增嵌合分子,这种方法称为逆转录PCR.7、Insertin

6、activation:插入失活,基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点,在该位点用相应的限制性内切酶处理,并将外源DNA片段插入该位点,那么插入的外源DNA片段将破坏原有基因的读码框,往往导致原有的选择标记基因无法译表达,或即使译表达,形成的也就是丧失了原有生物活性的蛋白质,这一现象称为插入失活.8、S-DSequenceS-D序列:在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上,含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3末端碱基互补的序列该序列最初由Shine、Dalgarno发现,故后来命名为ShineDalgarno序列,简称S-D序列.9、Shuttle

7、plasmidvector:穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记,因而可在两种不同宿主细胞中存活与复制的质粒载体.10、MCS:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段.三、简做题每题5分,共25分1、理想质粒载体的必备条件？答：具有较小的分子质量与较高的拷贝数.具有假设干限制性核酸内切酶的单一酶切位点.具有两种以上的选择标记基因.缺失mob基因.插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制与表达2、核酸操作的根本技术有哪些?答:核酸提取与纯化核酸的检测与保存核酸的凝胶电泳核酸分子杂交3、影响核酸保存的关键因素就是什么？怎样保存核酸制品

8、？答:关键因素：保存液的酸碱度保存温度保存方法：一般保存可用浓盐液,NaCL-柠檬酸缓冲液或0、1mol/L醋酸缓冲液.对DNA来说,在pH411的范围分子的碱基较稳定,超出此范围DNA易变性或降解,低温、稀碱下保存DN破低温下保存RNA匀较稳定.固态核酸通常在0c以上低温枯燥保存即可.4、合成cDNA第二链的主要策略有哪些？答:自身引导合成法置换合成法PCR合成法快速扩增cDNA末端法双链cDNA末端的处理cDNA与载体的连接5、基因工程诞生的理论根底就是什么？答:就是现代分子生物学领域理论上的三大发现与技术上的三大创造.理论上的三大发现：证实了DNA就是遗传物质揭示了DNA分子的双螺旋结构

9、模型与半保存复制机理遗传密码的破译与遗传信息传递方式确实定技术上的三大创造：限制核酸内切酶的发现与DNA切割DNA连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用四、问做题每题10分,共40分1PCR技术主要应用在哪些领域？答:核酸根底研究序列分析检测基因表达从cDNA文库中放大特定序列研究片段邻近基因或未知DNA片段进化分析医学应用分析生物学证据性别限制转基因检测.2细菌的限制与修饰系统有什么意义？大肠杆菌K12限制与修饰系统的遗传分析揭示的4种表型就是什么？答：宿主限制的限制与修饰现象广泛存在于原核细菌中,它有两方面的作用,一就是保护自身DNA受限制；二就是破坏入侵外源DNA8之降解

10、.细菌正就是利用限制与修饰系统来区分自身DNAW外源DNA勺.外源DNAT以通过多种方式进入某一生物体内,但就是它必须被修饰成受体细胞的限制内切酶无法辩认的结构形式,才能在寄主细胞内得以生存,否那么会很快被破坏.因此,在基因工程中,常采用缺少限制作用的菌株作为受体,以保证基因操作的顺利完成.大肠杆菌K12限制与修饰系统的遗传分析揭示,它有以下4种表型：rk+mk+野生型rk-mk+限制缺陷型rk-mk-限制与修饰缺陷型rk+mk-修饰缺陷型3试述5'RAC豉术原理与方法.答:PCR用于扩增代表mRNA专录物某一单位点与其3'或5'末端之间区域的部分cDNA$为快速扩增c

11、DNAC端技术RACEb如果mRNA勺一片段链内短序列,据此或设计基因特异引物,用原先存在的polyA尾3末端或附加的同聚尾5'末端互补的序列做末端引物,就可以获得从未知末端直到区域的部分cDNA序列.为获得5'末端局部cDNA克隆需用基因特异引物,产物第一链产物,可用末端脱氧核甘酸转移酶及dATP加polyA尾.通过QT引物与反转录使用的上游基因特异引物生成第二链cDNA4大肠杆菌作为基因工程受体菌具有哪些特点？真核基因在大肠杆菌中表达存在哪些障碍？答:特点:大肠杆菌培养方便、操作简单、本钱低廉,根底生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚,对其基因表达调控的分子机理也比拟了解

12、,而且历经二十年的基因工程实践,大肠杆菌已开展成为一种平安的基因工程实验体系,有多种适用的寄主菌株与载体系列,大肠杆菌易于进行工业化批量生产.存在的障碍：第一,在大肠力f菌的mRNA的核糖体结合位点上,含有一个起始密码子及16S核糖体RNA3'末端碱基互补序列,即S-D序列,而真核上缺泛这个序列.第二,许多真核基因的蛋白质产物需要经过译后的加工修饰,如正确的折叠与组装,而细菌中通常并没有这样的修饰机制,从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的译产物无法产生有活性的蛋白.第三、外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别,并被当做“异已分子降解掉.8、S-D序列：在大肠杆菌mRNA

13、的核糖体结合位点上,含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3,末端碱基互补的序列,该序列最初由Shine、Dalgarno发现,故后来命名为ShineDalgarno序列,简称S-D序列.1、什么就是包涵体？重组蛋白在胞内表达时,常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形式存在,这种晶状体即包涵体.包涵体的形成就是外源蛋白的高效表达时的普遍现象,这就是由于肽链折叠过程中局部折叠的中间态发生了错误聚合,而不就是形成成熟的天然态或完全解链的蛋白.2、什么就是-互补筛选？质粒载体具有B-半乳糖甘酶基因lacZ,当外源DNA雨入到它的lacZ,可造成表达后的B-半乳糖甘酶失活,利用这一点就可以通过大肠杆菌

14、转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子与非重组子.有些大肠杆菌上带有lacZ基因的局部编码序列,质粒载体中含有别一局部编码序列,当质粒转入载体后,可形成具有酶活性的蛋白质.这种lacZ基因上缺失了一局部编码序列的突变体与带有这一局部编码序列的突变体之间实现互补的现象叫a互补.3、限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？酶的纯度.DNA样品的纯度.DNA的甲基化程度.酶切反响的温度与时间.DNA分子的构型.限制性核酸内切酶的反响缓冲液.5、基因工程诞生的理论根底就是什么？就是现代分子生物学领域理论上的三大发现与技术上的三大创造.理论上的三大发现：证实了DNA就是遗传物

15、质揭示了DNA分子的双螺旋结构模型与半保存复制机理遗传密码的破译与遗传信息传递方式确实定技术上的三大创造：限制核酸内切酶的发现与DNA切割DNA连接酶的发现与DNA片段的连接基因工程载体的研究与应用四、问做题每题10分,共40分1如何有效地提升外源基因的表达效率？提升启动子强度缩短启动子同克隆基因间距离高效的译起始序列高效的转录终止区提升质粒拷贝数及稳定性用以下方法提高译水平:调整SD序列与AUGs的距离用点突变的方法改变某些碱基增加mRNA勺稳定性的减轻细胞的代谢负荷：诱导表达表达载体的诱导复制提升表达蛋白的稳定性,预防其降解：克隆一段原核序列,表达融合蛋白采用某种突变菌株表达分泌蛋白质2试

16、述载体构建一般方法A目的基因分析(1)ORF分析(2)酶切位点分析B载体选择与分析(1)多克隆位点分析(2)抗性标记分析(3)启动子与其她筛选标记分析C连接体系与连接时间确定4大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点就是什么？优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、本钱低廉,根底生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚,对其基因表达调控的分子机理也比拟了解,而且历经二十年的基因工程实践,大肠杆菌已开展成为一种平安的基因工程实验体系,有多种适用的寄主菌株与载体系列,大肠杆菌易于进行工业化批量生产.缺点：在通常情况下,细菌的RNAIK合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过译后的加工修饰,如正

17、确的折叠与组装,而细菌中通常并没有这样的修饰机制,从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别,并被当做“异已分子降解掉.二、选择题(每题1分,共15分)1(d)限制性核酸内切酶就是由细菌产生的,其生理意义就是A修复自身的遗传缺陷C强化自身的核酸代谢2(a)生物工程的下游技术就是A基因工程及别离工程C基因工程及蛋白质工程3(a)基因工程操作常用的酶就是聚合酶B促进自身的基因重组D提升自身的防御水平B蛋白质工程及发酵工程D别离工程及蛋白质工程:(I内切酶II连接酶III末端转移酶IVA、I+IIB、I+III+IVC、II

18、+III+IVD、I+II+IV+III4(d)限制性内切核酸酶的星活性就是指A在非常规条件下,识别与切割序列也不发生变化的活性.B活性大大提升C切割速度大大加快D识别序列与原来的完全不同5(d)以下五个DNA片段中含有回文结构的就是A、GAAACTGCTTTGACB、GAAACTGGAAACTGC、GAAACTGGTCAAAGD、GAAACTGCAGTTTC6(c)关于cDNA的不正确的提法就是A同mRNA互补的单链RNAB同mRNA互补的含有内含子的DNAC以mRNA为模板合成的双链RNAD以上都不正确7(a)以下有关连接反响的表达,错误的就是A、连接反响的最正确温度为37CB、连接反响缓冲体系的甘油浓度应低于10%C、连接反响缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMD、连接酶通常应过量2-5倍8 (c)T4-DNA连