大肠菌群检测作业标准书ok

1、文件名称大肠菌群检测作业标准书页次1/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/01.目的:为保证原、辅料以及产品中的微生物指标之大肠菌群符合公司生产、客户以及国家的标准，确保产品不会对消费者健康造成影响；特制定本标准书。2 .范围本标准书适用于对原、辅料以及半成品、成品的大肠菌群的检验3 .权责检验员负责实验的全过程的操作4 .术语大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL（g）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。5 .操

2、作方法5.1 仪器：5.1.1 冰箱：0C-4c5.1.2 恒温培养箱：36c±1C5.1.3 架盘药物天平：0g500g,精确至0.5g5.1.4 显微镜：10X-10055.1.5 灭菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）5.1.6 灭菌锥形瓶：500mL5.1.7 灭菌培养皿：直径90mm5.1.8 灭菌试管：16m诉160mm5.1.9 灭菌刀、剪子、镣子、载玻片、酒精灯、试管架等。5.2 药品5.2.1 乳糖胆盐发酵管：按GB4789.28-2003中4.9规定。文件名称大肠菌群检测作业标准书页次2/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0

3、5.2.2 伊红美蓝琼脂平板：按GB4789.28-2003中4.25沥规定5.2.3 乳糖发酵管：按GB4789.28-2003中4.10规定。5.2.4 EC肉汤：按GB4789.28-2003中4.11规定。5.2.5 磷酸盐缓冲稀释液：按GB4789.28-2003中3.22规定。5.2.6 0.85%生理盐水。5.2.7 革兰氏染色液：按GB4789.28-2003中2.2规定。5.3 检验程序大肠菌群检验程序如下：检样乳糖胆盐发酵管.36土/24口.11不广q%大肠菌群在性伊红美蓝琼脂平板336由C：18-24h报告1.1.II.-1 操作步骤文件名称大肠菌群检测作业标准书页次3/

4、4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0检样稀释以无菌操作将检样25mL像g）放于含有225mL灭菌生理盐水灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以800010000r/min的速度处理1min,做成1：10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖

5、胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36士1C温箱内，培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1C温箱内，培养1824h,然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1C温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可

6、报告为大肠菌群阳性。报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN佥索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPI值。1.2.II.-1 粪大肠菌群（faecalcoliform）用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见7.2条）转种于EC肉汤管内，置44.5D2C水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24i2h,经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36虫C培养1824h,凡文件名称大肠菌群检测作业标准书页次4/4文件编号YSMD/ZJ/ZY-01版次A/0平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。

7、根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表，报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值，结果报告表1大肠菌群最可能数(MPN)检索表1.3.II.-1 检验过程严格按照进行无菌操作，并注意安全1.4.II.-1 实验结束后作好实验室的卫生清洁以及及时、准确的填写相应的记录.相关文件成品质量标准GB/T4789.3-2003.相关记录产品检验报告原辅料检验单微生物检测原始记录表1阳性管教MPN100Ml(g)95%T信限1Ml(g)*30.1Ml(g)*30.01Ml(g)*3下限上限000<30<59000130002600039001030<51300116001290

8、01312002060021900221200231600309003113003216003319010040<520010170102101021101031501107010230111110303601121501131901201103036012115012220012324013016013120013224013329020090103602011403037020220020326021015030440211200708902122702133402202104047022128010015002223502234202302902313602324402335303002304012003013907013003026401503800303950310430702100311750140230031212003003800313160032093015038003211500300440032221003504700323290033024003601300033146007102400033211000150048000333>240003.2.7注：本表采用