心肌炎患儿TNFαIL6与心肌酶的相关性分析

1、心肌炎患儿TNF IL-6与心肌酶的相关性分析【摘要】目的：探讨肿瘤坏死因子（ TNF）、白细胞介素 6（ IL-6 ）在病毒性心肌炎（ VM）患儿发病中的作用。方式：采纳酶联免疫吸附（ ELISA）方式，对 30 例 VM患儿在急性期和恢复期（ 28 例）和 20 例正常儿童血清和外周血单个核细胞（ PBMC）培育上清液诱生TNF、 IL-6 进行检测。结果： VM急性期血清和 PBMC上清液 TNF、IL-6 水平明显高于恢复期和正常对照，恢复期仍高于对照组。 急性期血清肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）增高28 例，乳酸脱氢酶同工酶（ LDH1）增高 26 例。相关分析提示： VM急性期

2、TNF、IL-6 与 CK-MB和 LDH1呈正相关。结论：TNF、IL-6 在心肌炎的致病中起必然作用，其相关指标呈动态转变，可作为病情转变及预后的一个观看指标及依据。【关键词】心肌炎肿瘤坏死因子白细胞介素 6病毒性心肌炎是小儿常见的心血管疾病之一，最近几年来发病有增加的趋势，关于其发病机制国内外研究连年，免疫机制所起的作用日趋受到重视。 TNF、 IL-6 被称为炎症细胞因子，参与了许多炎症性疾病的发生和进展。本研究对小儿 VM不同时期的血清和 PBMC 诱生的 TNF、 IL-6 的动态转变进行检测，旨在从临床方面进一步探讨 VM发病的免疫机制，为估量病情和预后提供客观依据。1 临床资料

3、病例选择受检对象系我院 2003 年 2 月 2006 年 2 月住院 VM患儿，其中男 17 例，女 13 例，年龄 3 岁 14 岁。在病情的急性期（入院后 24 h 内）和恢复期（发病后 1 月2 月）进行各项指标检测，所有病例均无用激素史，同期同年龄组健康儿童 20 例，作为对照组（ 2 W前，无上呼吸道感染）。诊断标准诊断标准及临床分期依照第六届小儿心血管专业学术会议修订的 VM诊断标准，并除外其它疾病；病原学诊断依据是心肌炎发病前 1 W2 W有病毒感染史，发病初期外周血中柯萨基病毒特异性抗体 IgM 阳性。方式标本搜集：急性期患儿于入院第二天搜集早晨空肚静脉血 6 mL,用乙二胺

4、四乙酸二肝抗凝； 恢复期患儿在发病后 1 月 2 月间采血。心肌酶谱检测由我院查验科完成。PBMC诱生 TNF、IL-6 无菌条件下用淋巴细胞分离液 （上海试剂二厂）分离 PBMC，用 RPMI 1640 将 PBMC调成× 106/mL，培育液中加脂多糖（ LPS，10 g/mL），置 37 ， 5% CO2培育箱培育 72 h，离心搜集上清液后， -30 以下贮存待测。血清和 PBMC上清 TNF、 IL-6 水平的检测血清和 PBMC上清液中 TNF、 IL-6 的检测均采纳酶联免疫吸附双抗体夹心法（ ELISA）。用 450 nm 酶标仪测 OD值，通过绘制标准曲线，计算样品

5、中 TNF、IL-6 的含量。试剂盒由北京晶美生物工程提供（入口分装）。统计学处置，各期间采纳方差分析和两两比较q 查验或成对 t查验。急性期 TNF、 IL-6 和 CK-MB、LDH1的相关关系采纳直线相关分析。2 结果病毒性心肌炎各期心肌酶谱的转变VM 急性期血清 CK-MB、LDH1均高于恢复期和正常对照，LDH2那么低于恢复期和正常对照。 LDH3与恢复期和正常对照无显著意义（见表 1）。表 1 VM各期血清 CKMB、LDH测定结果及比数P<.各组血清 TNF、 IL-6 水平VM 患儿血清 TNF、IL-6 水平呈动态转变， 急性期血清 TNF、 IL-6 水平明显

6、高于恢复期和对照组。 恢复期血清水平明显降低但仍高于正常对照组 ( 见表 2）。 表 2 VM 患儿与对照组血清 TNF、 IL-6 检测结果. PBMC 诱生 TNF、 IL-6 的水平VM 急性期 PBMC经 LPS刺激后产生 TNF、IL-6 的水平明显高于恢复期和正常对照， 恢复期 TNF、IL-6 有高于正常对照组 （见表 3）。表 3 VM患儿各期对照组 PBMC上清液 TNF、 IL-6 检测结果急性期血清 TNF、IL-6 水平与 CK-MB和 LDH1的相关性急性期血清 TNF、IL-6 与 CK-MB、LDH1呈正相关（见表 4）。表 4 患儿急性期血清 TNF和 IL-6

7、 与 CK-MB和 LDH1的相关性3 讨论小儿 VM的发病及病情的进展与T 淋巴细胞和细胞因子的异样紧密相关。 TNF具有相似的促炎症能力， 是要紧的炎症细胞因子， 并可诱导其它炎性细胞因子的表达，二者的协同作用在增进炎症、休克及死亡的机制中有重腹地位 。IL-6 是细胞因子网络中的重要成份，亦是要紧炎性细胞因子之一，它能刺激细胞间粘附因子1 的合成，减少其抗体的表达，使炎性细胞大量聚集在病变区域；增加中性粒细胞在化学趋化因子刺激下，释放毒素性氧基，与其它炎性细胞因子协同发挥细胞毒性作用 。Simth 等在实验中发觉，给患心肌炎小鼠模型用TNF，结果心肌炎严峻程度和死亡率明显高于对照组，而用

8、抗 TNF抗体可明显减轻小鼠心肌的损害，降低死亡率。Neumann等对具有感染后自身免疫性心肌炎有抗击力的小鼠感染 COXB3V，并别离用脂多糖 （LPS）、TNF，小鼠发生严峻心肌炎， 而单独用 COXB3V或 LPS、TNF均不发生心肌炎。 Henke 等研究了体外人单核细胞和 COXB3V的彼此作用， COXB3V可增强单核细胞的游走速度和粘附力，并刺激单核细胞释放细胞因子 TNF和 IL-6 等。感染 COXB3V的单核细胞上清液对心肌细胞显示明显细胞毒活性，但它可被抗 TNF抗血清所取消，提示 COXB3V诱导细胞因子从单核细胞释放， 参与了病毒对心肌的损伤。本实验结果说明， 病毒性

9、心肌炎急性期， 血清和 PBMC上清液中 TNF、IL-6 的水平明显增高，其中以 TNF为著。恢复期其水平降低，与国外学者的研究报告一致，证明这些细胞因子是心肌炎的重要炎性细胞因子，其引发的免疫性炎症参与了病毒感染所致的损伤。当心肌细胞受损时， 可使许多心肌内的酶释放入血，最具特点性的是 CK-MB和 LDH一、 CK-MB几乎只存在于心肌细胞中，在心肌炎的初期诊断上有重要价值。 本研究检测： VM患儿血清 CK-MB和 LDH1，结果急性期 CK-MB和 LDH1明显增高，恢复期下降。急性期血清TNF、IL-6 与 CK-MB、LDH1是正相关关系。提示血清TNF、IL-6 水平和心肌损伤

10、程度关系紧密，其血清水平升高者心肌损伤严峻，故临床上可通过检测其血清水平，做为判定病情和预后的依据。【参考文献】李家宜 . 小儿病毒性心肌炎诊断标准 中级医刊，2000，39：60. Dinarello CA. The proinflammatory interleukin1 and tumor necrosis factor and treatment of thecytokinesseptic shoch infect Dis,2002,163：11771 188. Youker K, Smith W, Anderson DC, et al. Neutrophiladherence to

11、isolatedadultcardiac clinInves,2002,89：602609. Huber SA, Polgar J, Schiltheiss P. Augment ation pathogenesis of coxsackievirus B3 infections in mice exogenous administration of interleukin1 and interleukin2 .JofbyVirol,2004，68：195206.5 Smith SC, Allen PM. Neutralization necrosis factor ameliorates the severityof endogenous tumor of myosin inducedResearch,2002,70：856