《GBT 5009.192-2003 动物性食品中克伦特罗残留量的测定》

1、潍坊医学院实验报告科目食品理化检验班级:2015级食品质量与安全本班组别:第8组姓名：杨香香学号：20156340034试验项目:克伦特罗检测（ELISA检测法）GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定日期:04.23一、实验目的：1、通过本次试验同学们能够掌握ELISA法检测瘦肉精的原理2、掌握快速检测的基本程序及操作，具有独立进行快速检测的基本技能。二、实验原理：间接竞争ELISA方法在酶标板孔条上预包被克伦特罗抗原，加入抗克伦特罗抗体，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物（标记物为辣根过氧化物酶）显色。样本吸光

2、值与其残留物克伦特罗呈负相关，与标准曲线比较再乘以其相对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。三、实验主要仪器设备：试剂盒：克伦特罗ELISA检测试剂盒（深圳市绿诗源生物技术有限公司）、微孔板酶标仪450/630nm离心（15ml管和1.5mlep管）、电子秤（0.01g）、漩涡混合振荡器、恒温培养箱四、实验步骤：1、样品前处理组织用剪刀剪碎，研钵内研成匀浆，取2g肉/肝脏匀4条放入15ml离心管中；（1）加入6ml去离子水，充分震荡2min,室温4000r/min以上离心10分钟，（注若组织样本中油脂含量较高，可在振荡后放入85c水浴10min后再离心。）（2）取20ul上层液进行分析

3、，样本稀释4倍。2、分析（1）微孔板编号：1-6号标准品，7/8号样品等（每样品或标准品均做平行对照即各2孔）（2）加标准品/样品：微孔中加入20ul样品或标准品+50ul克伦特罗酶标物+80ul克伦特罗抗试剂，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后,25c避光30min（3）洗板：孔内液体甩干，用去离子水液300ul/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s,用吸水纸拍干（若有未拍干的气泡用枪头戳破）（4）显色：每孔加入50ul底物A+50ul底物B,轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后，25c避光15-20min（蓝色）（5）测定：加入50ul终止液（黄色），轻轻振荡混匀。酶标仪450nm/630nm双波长检测ODfi

4、（可在加入终止液前目测含量）。五、实验结果及计算：表1酶标仪450/630双波长测量ODfi标准品浓度ppb(10A-3ng/ml)8.12.70.90.30.10猪肝猪肉10.0450.2090.4230.6490.8561.3440.9451.15720.0710.1450.4180.7010.7481.1050.9551.179平均ODfi0.0580.1770.42050.6750.8021.22450.9501.168百分吸光率4.7414.4534.3455.1265.5010077.5895.39(%)为了提高R2,绘制曲线时，删除了0ppb和0.3ppb对应的两组数据，得到如下

5、克伦特罗标准曲线：克伦特罗标准曲线OOOOOOOO7654321百分吸光率y=-14.23ln(x)+32.167R2=0.9912百分吸光率（）对数（百分吸光率（%）0.11克伦特罗浓度半对数值10当y=77.58%时，x=0.04082，所以猪肝中的克伦特罗含量为0.04082W=0.1633ppb当y=95.39%时，x=0.011646,所以猪肉中的克伦特罗含量为0.011646X4=0.0466ppb六、讨论1、猪肝中的克伦特罗含量为0.1633ppb，猪肉中的克伦特罗含量为0.0466ppb。可知猪肉中的克伦特罗含量比猪肝中的少。2、GB/T5009.192-2003动物性食品中克伦特罗残留量的测定中，本标准规定了动物性食品中克伦特罗的测定方法。本标准适用于新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中克伦特罗残留的测定。本方法检出限：酶联免疫法为0.5Ng/kgc线性范围：酶联免疫法为0.004ng0.054ng。由于实验结果猪肝中的克伦特罗含量为0.1633ppb，猪肉中的克伦特罗含量为0.0466ppb，都没有超出国家标准，合格。3、因R2=0.9912，拟合度较差，可重复进行多次实验，也可能实验操作