离心机操作及血液样本处理课件

1、实验(shyn)基础技能培训李玉涛2017-07第一页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理 Part 1 血液基本成分及其分离方法血液基本成分及其分离方法(fngf) Part 2 离心机简介及使用离心机简介及使用第二页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理Part 1 血液血液(xuy)基本成分及其分离方法基本成分及其分离方法一、血液基本成分二、血液物理性质三、血液采集常用方法四、血液成分(chng fn)分离方法第三页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理一、血液一、血液(xuy)基本成分基本成分 血细胞形态、数量、比例和血红蛋白含量的测定称为血像。患病时，血像常有显著变化，故检查血像对

2、了解机体状况和诊断疾病十分(shfn)重要。第四页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理1、红细胞、红细胞红细胞（erythrocyte，red blood cell）直径78.5m，呈双凹圆盘状，中央(zhngyng)较薄（1.0m），周缘较厚（2.0m）红细胞的这种形态使它具有较大的表面积（约140m2），便于携O2和部分CO2。成熟红细胞无细胞核，也无细胞器，胞质内充满血红蛋白（hemoglobin, Hb）。红细胞的渗透压与血浆相等，使出入红细胞的水分维持平衡。当血浆渗透压降低时，过量水分进入细胞，细胞膨胀成球形，甚至破裂，血红蛋白逸出，称为溶血（hemolysis）第五页，共三十七页

3、。离心机操作及血液样本处理2、白细胞、白细胞 白细胞（leukocyte, white blood cell）为无色有核的球形细胞(xbo)，体积比红细胞(xbo)大，能作变形运动，具有防御和免疫功能。第六页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理白细胞分类白细胞分类(fn li) 光镜下，根据(gnj)白细胞胞质有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞两类。有粒白细胞又根据(gnj)颗粒的嗜色性，分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。无粒白细胞有单核细胞和淋巴细胞两种。第七页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.1、中性、中性(zhngxng)粒细胞粒细胞中性粒细胞（neutr

4、ophilic granulocyte, neutrophil）占白细胞总数的50%70%，是白细胞中数量最多的一种。具有活跃的变形运动和吞噬(tnsh)功能。细胞呈球形，直径1012m，核染色质呈团块状。核的形态多样，有的呈腊肠状，称杆状核；有的呈分叶状，叶间有细丝相连，称分叶核。第八页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理中性中性(zhngxng)粒细胞异常粒细胞异常中性粒细胞增高见于：a急性感染和化脓性感染：肺炎、败血症、脓肿等。b组织损伤：大手术后、心肌梗塞、肺梗塞等。c恶性肿瘤：急、慢性(mn xng)白血病、淋巴瘤等。d各种中毒：尿毒症、糖尿病酸中毒等。中性粒细胞减少见于：a某些传

5、染病：流感、伤寒、付伤寒、麻疹。b某些血液病：再障、粒细胞缺乏症、白细胞减少症。c化疗或放疗后，抗癌药物，X线及镭照射。d其它：脾功能亢进，自身免疫性疾病，高度恶病质。第九页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.2、嗜酸性、嗜酸性(sun xn)粒细胞粒细胞嗜酸性粒细胞（eosinophilic granulocyte, eosinophil）占白细胞总数的0.5%3%。与变态反应(bin ti fn yng)有关，并有吞噬抗原抗体复合物的作用。细胞呈球形，直径1015m，核常为2叶，胞质内充满粗大（直径0.51.0m）、均匀、略带折光性的嗜酸性颗粒，染成桔红色。第十页，共三十七页。离心机

6、操作及血液样本处理嗜酸性嗜酸性(sun xn)粒细胞异常粒细胞异常嗜酸性粒细胞增多见于：a变态反应性疾病：支气管哮喘、药物过敏、荨麻疹等。b寄生虫病：蛔虫病、钩虫病、血吸虫病(xu x chn bn)。c某些皮肤病：湿疹、牛皮癣、剥脱性皮炎等。d某些血液病：慢粒、恶性淋巴瘤、嗜酸性粒细胞性白血症等。嗜酸性粒细胞减少见于：a应用糖皮质激素、促肾上腺皮质激素。b伤寒、副伤寒等病患者。第十一页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.3、嗜碱性、嗜碱性(jin xn)粒细胞粒细胞 嗜碱性(jin xn)粒细胞（basoophilic granulocyte, basophil）数量最少，占白细胞总数

7、的00.15。 细胞呈球形，直径1012m。胞核分叶或呈S形或不规则形，着色较浅。胞质内含有嗜碱性颗粒 嗜碱性粒细胞主要参与特殊的免疫反应。第十二页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理嗜碱性嗜碱性(jin xn)粒细胞异常粒细胞异常增多见于：a慢性(mn xng)粒细胞白血病、嗜碱性粒细胞白血病。b某些转移癌及骨髓纤维化。减少一般无临床意义。第十三页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.4、淋巴细胞、淋巴细胞淋巴细胞（lymphocyte）占白细胞总数的20%30%，圆形或椭圆形，大小不等。T细胞约占淋巴细胞总数的75%，参与细胞免疫，如排斥异移体移植物、抗肿瘤等，并具有免疫调节功能。B

8、细胞约占血中淋巴细胞总数的10%15%。B细胞受抗原刺激后增殖分化为浆细胞，产生(chnshng)抗体，参与体液免疫。第十四页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理淋巴细胞异常淋巴细胞异常(ychng)增多见于：a某些病毒(bngd)或细胞所致的传染病：传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症、传染病恢复期、结核病、百日咳。b淋巴细胞性白血病、白血性淋巴肉瘤。减少见于：a应用肾上腺皮质激素、接触放射线。b细胞免疫缺陷病、某些传染病的急性期。第十五页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.5、单核细胞、单核细胞单核细胞（monocyte）占白细胞总数的3%8%。具有游走性和吞噬作用。单核细胞

9、为白细胞中体积(tj)最大的细胞。直径1420m，呈圆形或椭圆形。胞核形态多样，呈卵圆形、肾形、马蹄形或不规则形等。胞质较多，呈弱嗜碱性，含有许多细小的嗜天青颗粒第十六页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理单核细胞异常单核细胞异常(ychng)增多见于：a某些感染：伤寒、结核、疟疾、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎。b某些血液病：单核细胞性白血病、淋巴瘤、骨髓( su)异常增殖综合症、恶性组织细胞病。减少一般无临床意义。第十七页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理二、血液二、血液(xuy)物理特性物理特性血液(xuy)密度为1.0501.060103kg/m3，红细胞的密度为1.090103k

10、g/m3，血浆的密度为1.0251.030103kg/m3。第十八页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理血液血液(xuy)的颜色的颜色 通常抽的是静脉血，所以外观看上去呈暗红色。 若血含较多的是高铁血红蛋白或其他血红蛋白衍生物，则呈紫黑色。 血浆（或血清）因含少量胆红素，看上去呈透明淡黄色； 若含乳糜微粒，则呈乳白浑浊(hnzhu)； 若发生溶血，则呈红色血浆。第十九页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理三、血液三、血液(xuy)采集常用方法采集常用方法 红色试管帽采血管红色试管帽采血管 采血管中不含任何添加剂，适用于常规生化血清(xuqng)检验，对检验结果无影响，缺点：离心不到位或者温

11、育时间不够，容易形成纤维蛋白，容易堵塞设备针孔第二十页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理三、血液采集三、血液采集(cij)常用方法常用方法 紫色试管帽采血管紫色试管帽采血管 采血管中含EDTA-K2抗凝剂，一般(ybn)采取喷雾制作，使得抗凝剂均匀分布管壁，制备标本为全血，一般(ybn)适用于常规的血液学检测第二十一页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理常用常用(chn yn)抗凝剂（抗凝剂（1）乙二胺四乙酸二钠（简称EDTANa2） 抗凝原理：可螯合血液中的钙离子而阻止血液凝固(nngg)。 优点：抗凝作用强，且不改变血细胞的形态和体积，可防止血小板聚集。应用：适于血液学检验，但输血不

12、能用。草酸盐合剂（草酸钾及草酸铵合剂）抗凝原理：夺取血中的游离钙而形成不溶解的草酸钙，而达到抗凝。 优点：溶解度大，抗凝作用强。 缺点：草酸钾使红细胞缩小约6，而草酸铵可使红细胞膨胀。 应用：适于除红细胞压积容量测定的血液检验。第二十二页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理常用常用(chn yn)抗凝剂（抗凝剂（2）枸橼酸钠（柠檬酸钠） 抗凝原理：与血中游离钙离子形成非离子化的可溶性的枸橼酸钙复合物，从而阻止血液(xuy)凝固。 优点：与血中游离钙离子结合松散。 缺点：引起水及无机盐在血细胞及血浆之间分布的改变。 应用：常用于血沉淀及输血时的抗凝，不适用于血液化学检验。肝素 抗凝原理：阻止血

13、中的凝血酶原转变为凝血酶，防止血凝。 优点：抗凝作用强，不影响红细胞的大小，对血液化学分析干扰少。 缺点：价格贵，抗凝时间短，其抗凝血做白细胞分数计数时，白细胞着色不佳。 应用：血液有机成分、无机成分的分析。第二十三页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理四、血液成分四、血液成分(chng fn)分离分离1 血清(xuqng)血浆分离2 白细胞分离2.1 裂解红细胞法2.2 Ficoll分离法第二十四页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理1、血清、血清(xuqng)血浆的分离血浆的分离 血清(xuqng)和血浆的最大区别就是血清(xuqng)中不含纤维蛋白原 紫色采血管颠倒混匀后，1200g

14、 离心10min，4度，取上清。 红色采血管需用枪头搅匀后，1200g 离心10min，4度，取上清第二十五页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.1、白细胞分离、白细胞分离(fnl)-裂解红细胞法裂解红细胞法 红细胞裂解液主要成分：NH4Cl， KHCO3， Na2EDTA 红细胞裂解液裂解原理：氯化铵通过在其细胞膜进行氢氧根碳酸氢根和氯离子的交换，改变其渗透压，造成(zo chn)红细胞胀大破裂；外周血淋巴细胞受影响较少因其细胞膜的离子转运通道不同。第二十六页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.1、白细胞分离、白细胞分离(fnl)-裂解红细胞法裂解红细胞法主要实验流程： 将10X

15、储存(chcn)液稀释到1X工作浓度； 加入血沉棕黄层的6-10倍体积的1X红细胞裂解液，吹打均匀 冰上裂解10分钟。裂解完毕后，50ml离心管中液体应呈透明红色，且下方无红色沉淀。 1500g，10min，4度离心，弃去上层液体，仅保留下层白色沉淀。第二十七页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.2、白细胞分离、白细胞分离(fnl)- Ficoll分离法分离法原理:常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.0770.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin) (FH)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均(pngjn)分子量为400,000

16、，不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。第二十八页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2.2、白细胞分离、白细胞分离(fnl)- Ficoll分离法分离法第二十九页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理Part 2 离心机简介离心机简介(jin ji)及使用及使用http:/ ji)离心机 借助转轴高速旋转产生离心力，使不同密度、不同大小的物质分开，能达到初步分离纯化的目的，是实验室必不可少的仪器。按照转速(zhun s

17、)可以分为低速(50000)三种类型。根据体积大小和摆放位置又可分为台式离心机 和落地式离心机。台式离心机体积比较小，常是中低速离心机 ；落地式离心机体积较大，常带有降控温装置，大多是高速离心机 。第三十一页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理2、离心机的摆放、离心机的摆放(bi fn) 离心机一般放在干燥、避免阳光直射的地方。 离心机散热量比较大，周围不要堆放杂物，四周离墙壁、挡板等不透气、散热性差的物品至少10cm以上。 离心机尽量单独放在一个房间，周围绝对(judu)不要放有机试剂、易燃品第三十二页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理3、离心机使用、离心机使用(shyng)注意事项注

18、意事项 根据实验所需和使用的离心管，含有有机试剂的液体要用特殊的离心管； 选择合适的转头(zhun tu)，转速绝对禁止超过转头(zhun tu)标明的最高转速。 离心管的对称放置和重量配平，同时应该注意离心管和转头可以承受的最大重量的溶液，液体最多装离心管全体积的3/4。第三十三页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理4、离心机保养、离心机保养(boyng) 每次使用完毕，都要将离心机盖儿打开，使得热量或者水气自然蒸发，如之前使用了低温离心，可能有结冰，则要等冰融化，及时用干燥棉纱布擦洗干净，等无明显水汽时再盖上盖子。 如果(rgu)离心机转头可以替换，则每个转头使用完毕后都要及时取出，用干净的、干燥的医用纱布擦洗干净，倒扣放置，切勿使用锐器刮擦。 操作人员离开时候要切断电源。第三十四页，共三十七页。离心机操作及血液样本处理5、具体操作流程、具体操作流程(lichng)（1）1. 设定使用温度 （通常为4）后，先把离心陀放入离心舱中，注意离心陀要卡好轴心；关上舱门，离心舱的温度开始下降，预冷时间要充足。2. 把样本装入适当的离心管，双双用天平平衡重量，盖上离心管盖子并旋紧。1） 注意离心管只装七成满，虽然加有盖子，但也可能因离心