免疫学检测技术 (3)

1、关于免疫学检测技术 (3)现在学习的是第一页，共41页 现在学习的是第二页，共41页 抗原抗体反应的原理抗原抗体反应的原理物质基础：抗原的物质基础：抗原的抗原决定基抗原决定基与抗体与抗体的的抗原结合部位抗原结合部位之间的结构互补性。之间的结构互补性。两者相互结合，在适宜条件下，出现两者相互结合，在适宜条件下，出现可见反应。可见反应。现在学习的是第三页，共41页 一、抗原抗体反应的一、抗原抗体反应的特点及其影响因素特点及其影响因素1、特异性、特异性2、可见性（比例适合）、可见性（比例适合）3、可逆性、可逆性现在学习的是第四页，共41页1.特异性特异性抗原A抗原C抗原B特异性反应交叉反应无反应现在

2、学习的是第五页，共41页2、抗原抗体反应的可见性、抗原抗体反应的可见性适合比例性适合比例性抗体含量抗原含量前带后带等价带现在学习的是第六页，共41页网格学说（网格学说（lattice theorylattice theory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适现在学习的是第七页，共41页3.可逆性可逆性K（亲和常数）=Ag+AbAg Ab现在学习的是第八页，共41页1、利用已知抗原检测未知抗体、利用已知抗原检测未知抗体（1）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病：）检测病原微生物的相应抗体以辅助诊断疾病： 伤寒伤寒病、流行性乙型脑炎、病、流行性乙型脑炎、AIDS病等。病等。（2）检测自身抗体）检

3、测自身抗体诊断自身免疫病：诊断自身免疫病：SLE、类风湿性关、类风湿性关节炎等节炎等2、利用已知抗体检测未知抗原、利用已知抗体检测未知抗原（1）鉴定病原菌：诊断疾病）鉴定病原菌：诊断疾病（2）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌）检测肿瘤相关抗原：检测甲胎蛋白以诊断肝癌（3）检测血型抗原、）检测血型抗原、HLA抗原：鉴定血型，亲子鉴定抗原：鉴定血型，亲子鉴定（4）检测药物半抗原：）检测药物半抗原： 确认运动员是否服用兴奋剂确认运动员是否服用兴奋剂现在学习的是第九页，共41页二、二、 抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法 凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体参与的抗原抗体反应补体参与的抗

4、原抗体反应免疫标记技术免疫标记技术现在学习的是第十页，共41页现在学习的是第十一页，共41页 （一）（一）凝集反应（凝集反应（agglutinationagglutination） 颗粒性抗原颗粒性抗原（红细胞、细菌、（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与抗乳胶颗粒等）与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。血细胞凝集实验及补血细胞凝集实验及补体结合实验体结合实验现在学习的是第十二页，共41页现在学习的是第十三页，共41页（二）沉淀反应（二）沉淀反应（precipitationprecipitation）1、单向免疫扩散（single immunodiffusio

5、n）：常用于测定）：常用于测定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。单向免疫扩散及免疫电泳单向免疫扩散及免疫电泳现在学习的是第十四页，共41页1、单向免疫扩散（single immunodiffusion）：常用于测）：常用于测定定IgG、IgM、IgA、C3、C4等。等。现在学习的是第十五页，共41页（四）免疫标记技术（四）免疫标记技术现在学习的是第十六页，共41页酶：酶：辣根过氧化物酶、辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶硷性磷酸酶现在学习的是第十七页，共41页流式细流式细胞仪胞仪现在学习的是第十八页，共41页临床应用vT、B细胞及其亚群的鉴定细胞及其亚群的鉴定v血清中自身抗体的检测血清中自身抗

6、体的检测v组织中组织中Ig及补体组分的检测及补体组分的检测v肿瘤抗原的检定肿瘤抗原的检定v细菌和病毒的快速检定细菌和病毒的快速检定v特异的组织固定抗体检测特异的组织固定抗体检测现在学习的是第十九页，共41页2.酶免疫分析酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 酶免疫分析分类： 非均相酶免疫测定非均相酶免疫测定(heterogeneous enzyme immunoassay) 均相酶免疫测定均相酶免疫测定(homogeneous enzyme immunoassay) 常用标记酶：HRP、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等。 非均相酶免疫测定非均相酶免疫测定(heterogeneo

7、us enzyme immunoassay)(heterogeneous enzyme immunoassay)是是目前应用最广泛，又分为目前应用最广泛，又分为： 固相酶免疫测定固相酶免疫测定： 琼脂糖珠(Sepharose 4B)作为载体的DASS体系 聚苯乙烯及其他固相支持物的酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 液相酶免疫测定液相酶免疫测定 现在学习的是第二十页，共41页v9）酶联免疫斑点试验）酶联免疫斑点试验现在学习的是第二十一页，共41页第二节第二节 免疫分子的免疫分子的常用检测方法常用检测方法现在学习的是第二十二页，共41页v血清免疫球蛋白的定量测定血清免疫球蛋白的定量测定（IgG、I

8、gM、IgA） 单向免疫扩散、免疫比浊法单向免疫扩散、免疫比浊法v细胞因子检测 生物学方法：生物活性测定 免疫学方法：ELISA 分子生物学方法：PCR现在学习的是第二十三页，共41页现在学习的是第二十四页，共41页一、免疫细胞的分离与纯化一、免疫细胞的分离与纯化现在学习的是第二十五页，共41页细胞免疫功能的检测淋巴细胞的分离1500rpm, 20度, 30min现在学习的是第二十六页，共41页现在学习的是第二十七页，共41页 T T细胞增生细胞增生( (转化转化) )试验试验 T T细胞介导的细胞毒试验原理细胞介导的细胞毒试验原理 T T细胞功能的体内检测法细胞功能的体内检测法 流式细胞术流

9、式细胞术 T T分泌细胞因子功能测定分泌细胞因子功能测定（一）（一）T T细胞功能测定细胞功能测定免疫荧光测定及荧光免疫分选免疫荧光测定及荧光免疫分选现在学习的是第二十八页，共41页 现在学习的是第二十九页，共41页放射性测定3H-TdR丝裂原（抗原）刺激淋淋巴巴细细胞胞转转化化试试验验原原理理示示意意现在学习的是第三十页，共41页现在学习的是第三十一页，共41页放射性测定细细胞胞毒毒试试验验原原理理示示意意细细靶细胞效应细胞分离上清现在学习的是第三十二页，共41页IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测等检测现在学习的是第三十三页，共41页 （2）抗体形成细胞测定）抗体形成细胞测定 溶

10、血空斑试验溶血空斑试验 （hemolytic forming cell assay，HFC）计算计算HFU/ml（1）B细胞增殖试验：细胞增殖试验：现在学习的是第三十四页，共41页第四节第四节 免疫学检测方法的应用免疫学检测方法的应用 评估与选择 特异性（specificity） 敏感性（sensitivity） 现在学习的是第三十五页，共41页特异性（特异性（specificity） 用该试验检查非患者时出现阴性结果的用该试验检查非患者时出现阴性结果的可能性。可能性。敏感性（敏感性（sensitivity） 用该试验检查某病患者时出现阳性结用该试验检查某病患者时出现阳性结果的可能性。果的可能

11、性。 现在学习的是第三十六页，共41页 特异性特异性= =真阴性真阴性/ /（真阴性（真阴性+ +假阳性）假阳性）100%100% 敏感性敏感性= =真阳性真阳性/ /（真阳性（真阳性+ +假阴性）假阴性）100%100%现在学习的是第三十七页，共41页表表 免疫学测定方法敏感性比较免疫学测定方法敏感性比较测定方法测定方法敏感性（每升）敏感性（每升）单向免疫扩散试验单向免疫扩散试验1 12mg2mg双向免疫扩散试验双向免疫扩散试验1mg1mg火箭电泳火箭电泳0.5mg0.5mg对流电泳对流电泳0.1mg0.1mg免疫电泳免疫电泳5 510mg10mg凝集试验凝集试验1g1g被动血凝试验被动血凝试验1g1g血凝抑制试验血凝抑制试验0.1g0.1g补体结合试验补体结合试验0.1g0.1g放射免疫分析法放射免疫分析法1pg1pg酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验1ng1ng定量免疫荧光分析定量免疫荧光分析1pg1pg现在学习的是第三十八页，共41页临床应用临床应用