食管癌术前针刺诱导脑缺血耐受的研究

1、王晶余陈维袁佐鸣张春玲【摘要】目的探讨针刺诱导缺血耐受的内源性脑爱惜机制。方式应用线栓法制做大鼠局灶脑缺血模型，选用百会穴进行针刺预处置。通过神经学评分、脑梗死体积测定、病理学及微小管相关蛋白2(map2)免疫组化染色对缺血耐受模型进行评判。结果针刺预处置一、3、5d都可对后续的大脑中动脉闭塞(mcao)产生爱惜作用，神经病学评分降低，脑梗死体积缩小，病理损伤减轻，以5d最为明显。结论成功复制针刺?局灶性脑缺血耐受模型，针刺可诱导脑缺血耐受。【关键词】针刺；预处置；脑缺血耐受临床和实验研究说明，针刺可增加脑血流量，改善脑组织氧合，提精湛氧化物歧化酶活性，抑制兴奋性氨基酸，诱导爱惜性基因表达，调

2、剂神经内分泌，对缺血性脑损伤有显著的医治作用和爱惜效应1。有研究说明针刺能够产生有效缺血耐受，对缺血性脑卒中有爱惜作用2，但针刺产生缺血耐受的机制尚不完全清楚，对其相关研究甚少。1材料与方式实验动物与分组健康雄性wistar大鼠，体重250300g,由吉林大学实验动物中心提供。模型评判30只，随机分为正常对照组、单纯缺血24h组及针刺一、3、5d预处置后大脑中动脉闭塞(mcao)24h组，每组6只。针刺预处理方法应用dm?a定量针麻仪，参照实验针灸学给予wistar大鼠顶骨正中百会穴电针刺激，采用频率为416hz的间断疏密波，电流强度1ma,每次30min,1次/d。动物模型制备采用longa

3、线栓法：大鼠用10%水合氯醛(ml/100g)腹腔注射麻醉后仰卧于手术台上，颈部正中切口，暴露颈总动脉，逐步分离出颈外动脉、颈内动脉及分叉部，结扎颈外动脉远端，用动脉夹夹闭颈总动脉，在颈内动脉下方穿一提拉线以阻断血流，在结扎线近端距分叉5mm处剪一约mm小口，将鱼线前端用砂纸磨成圆形并用肝素涂布后从颈外动脉残端插入，经颈总动脉分叉部进入颈内动脉，向上深入至分叉以上。平均进线（22士）mm直至感觉有阻力时，即阻断大脑中动脉入口处，结扎颈外动脉近端完成mcaob正常对照组仅暴露颈总动脉分叉处，不插线阻断大脑中动脉。神经病学评分麻醉苏醒后，将动物放回鼠笼，自由饮食，分别于mcao后24h，由不了解分

4、组情况的观察者评估并记录神经行为评分，参照bederson评分标准3，0级：未见行为缺陷；1级：前肢屈曲（即提尾悬空试验阳性）；2级：侧推抵抗力下降（即侧向推力试验阳性），伴前肢屈曲，无转圈行为；3级：同2级行为，伴自发性旋转。梗死体积判定经灌注固定大鼠整个脑组织后，从后至前进行石蜡冠状切片，片厚4（1管每隔2mm切取一张行he染色，根据reempts介绍的公式4，拍照并用图像分析软件计算出脑片上梗塞灶体积与大脑半球体积的百分比。病理标本制备大鼠以10%水合氯醛麻醉，暴露心脏，以12号穿刺针刺入左心室，眼科剪刀剪开右心房，首先灌注温%生理盐水约200ml，待从右心房流出液体清亮时，换用含4%多

5、聚甲醛的mol/lpbs（）缓冲液200ml进行灌注固定，断头取脑。取以视交叉为中心，相当于前联合连续脑片，继续固定46h，常规脱水，透明，浸蜡，包埋。微小管相关蛋白2（map2）检测方法采用免疫组化法。一抗来源为美国santancren试剂公司，染色采用sp法。统计学处理结果以x±s表示，均数的显著性采用t检验，所有统计学处理应用统计软件。2结果神经功能评分正常对照组神经病学评分为0，针刺本身不引起神经功能缺损，针刺1、3、5d预处理后mcao24h神经功能评分为±、±、±，与单纯mcao24h组±相比差异显著，针刺5d最为明显（pv）。梗死

6、体积测定单纯mcao24h脑梗死体积比为（±）%，针刺1、3、5dmcao24h脑梗死体积比分别为（±）%、（±）%、（±）%，其中针刺5dmcao24h组梗死灶体积减少了%，较单纯mcao24h组明显降低（p。病理形态学变化正常对照组：神经细胞的形态分布正常。单纯mcao组：缺血24h,中心区淡染，脑组织稀疏明显，神经元脱失严重，细胞周围大空泡变，神经细胞变形，核固缩，核碎裂，核溶解，并失去完整结构，并有大量细胞残骸，周边区范围明显缩小，可见胶质细胞浸润。针刺预处理1、3、5dmcao缺血周边区范围缩小，其中形态完整的神经细胞增多，充血及脑水肿程度较单

7、纯mcao组轻，以针刺预处理5d最为明显。map2表达免疫组化结果显示：正常对照组可见脑组织中神经元及树突均呈阳性表达，以树突表达更为明显，染色均匀，突起排列完整呈束状。缺血24h,梗死中心区可见明显map2表达淡染区，无完整树突，树突排列不齐，散在断裂状，周边区表达明显，与中心区分界清楚，可见正常神经元与缺血改变神经元以及形态排列正常树突与增粗、部分断裂树突交替存在。1、3、5d针刺预处理中心区与mcao表现一致，但针刺预处理使梗死范围明显缩小，map2正常表达神经元增多，缺血改变神经元减少，也可见形态排列正常树突与增粗、部分断裂树突交替存在，梗死范围以5d针刺预处理最小。3讨论预处理是指在

8、严重缺血之前给予的各种保护性干预措施，缺血耐受是指经预处理的脑组织对随后严重缺血的耐受性明显提高的现象。自发现缺血耐受现象以来，对脑缺血防治的认识开辟了新的领域，为脑保护提供了新的思路，并已进行了相关动物实验和临床研究，这种通过激发机体的内源性保护机制，以增强对下一次严重损伤抵抗能力的研究受到广泛关注。研究表明，针刺预处理可诱导缺血耐受，减轻大鼠脑缺血损伤，可能通过影响自由基、细胞凋亡等机制起脑保护作用59。为进一步探讨针刺诱导脑缺血耐受，本实验选择针刺预处理1、3、5d后行mcao，从神经学评分、梗死体积等方面对其进行评价，结果显示，针刺预处理1、3、5d后行mcao,均不同程度提高神经功能

9、、缩小梗死体积，其中5d针刺预处理后，梗死体积缩小达%与单纯mcao相比差异显著，he染色显示病灶部位缺血程度、缺血范围及脑水肿程度均较单纯mcao组轻，提示成功制备针刺诱导脑缺血耐受模型，为进一步研究针刺诱导缺血耐受相关机制奠定了基础。本实验还利用map2免疫组化染色，对此模型进行了评价，进一步证实了针刺预处理产生了缺血耐受。正常脑组织中map2神经元及树突均呈阳性表达，以树突表达更为明显，染色均匀，突起排列完整呈束状。微管是一种重要的细胞骨架蛋白，它对细胞结构的维持和线粒体的轴突转运具有重要意义，但微管具有动力学不稳定性，极易发生解聚。map2主要存在于神经元树突和胞体，作为微管的辅助蛋白

10、可促进微管组装，稳定微管的结构，它的活性下降可造成微管变性堆积，影响细胞骨架的完整，并可使线粒体的轴突转运发生障碍，最终导致神经元死亡。map2对缺血很敏感，可显示缺血时神经元损伤，缺血性神经元map2抗原性消失可作为缺血损伤的模型判定标准之一。【参考文献】1 litscherg，schwarzg，sandnerka，jneurosci,1998;95(1?2):1?15.2 郭佳,张莉.脑缺血耐受与针灸的脑保护作用j.中国临床康复,2002；6(1):116?7.3 berders

11、onjb，pittslh，tsujim,etmiddlecerebralarteryocclusion:evaluationofthemodelanddevelopmentofneurologicalexaminationj.stroke，1986；17:472?6.4 reemptsjv，deurenbv，venmv,etreducescerebralinfarctsizeafterphotochemicallyinducedthrombosisinspontaneouslyhypertensiveratsj.stroke，1987；18:1113?9.5 张民，刘剑波，张宏亮，等.单次电针预处理诱导大鼠局灶性脑缺血耐受时程j.中华麻醉学杂志，2003；23（5）:355?7.6 熊利泽，路志红.重复电针预处理可减轻大鼠急性短暂性脑缺血损伤j.第四军医大学学报，2001；22（21）:5?6.7 田代实，邓医宇，王光海，等.针