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文档简介
1、基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过 ,赋予生物以 ,创造出 。基因工程是在 上进行设计和施工的,又叫做 。(一)基因工程的基本工具1.“分子手术刀” (1)来源:主要是从 中分离纯化出来的。(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种 的核苷酸序列,并且使每一条链中 部位的两个核苷酸之间的 断开,因此具有 性。(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式: 和 。2.“分子缝合针” (1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶)的比较:相同点:都缝合 键。区别:E·coliDNA连接酶来源于 ,只能将双链
2、DNA片段互补的 之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合 ,但连接平末端的之间的效率较 。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将 加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接 的末端,形成磷酸二酯键。3.“分子运输车” (1)载体具备的条件: 。 。 。(2)最常用的载体是 ,它是一种裸露的、结构简单的、独立于 ,并具有 的双链 DNA分子。(3)其它载体: (二)基因工程的基本操作程序第一步: 1.目的基因是指: 。2.原核基因采取 获得,真核基因是 。人工合成目的基因的常用方法有 _和_ 。3.PCR技术扩增目的基因(1)原理: (2)过程:第一步
3、:加热至9095 ;第二步:冷却到5560, ;第三步:加热至7075, 。第二步: 1.目的:使目的基因在受体细胞中 ,并且可以 ,使目的基因能够 。2.组成: (1)启动子:是一段有特殊结构的 ,位于基因的 ,是 识别和结合的部位,能驱动基因 ,最终获得所需的 。(2)终止子:也是一段有特殊结构的 ,位于基因的 。(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中 ,从而将 筛选出来。常用的标记基因是 。第三步: 1.转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 ,其次还有 和 等。将目的基因导入动物细胞:
4、最常用的方法是 。此方法的受体细胞多是 。将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是 ,最常用的原核细胞是 ,其转化方法是:先用 处理细胞,使其成为 ,再将 溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是 。第四步: 1.首先要检测 ,方法是采用 。2.其次还要检测 ,方法是采用 。3.最后检测 ,方法是从转基因生物中提取 ,用相应的 进行 。4.有时还需进行 的鉴定。如 。(三)基因工程的应用1.植物基因工程: 。2.动物基因工程: 。3.基因治疗: 。(四)蛋白质工程的概念
5、蛋白质工程是指以 作为基础,通过 ,对现有蛋白质进行 ,或制造一种 ,以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产 的蛋白质)翻译转录答案专题1 基因工程基因工程的概念体外DNA重组和转基因技术 新的遗传特性 更符合人们需要的新的生物类型和生物产品因 DNA分子水平 DNA重组技术(一)基因工程的基本工具1.限制性核酸内切酶(限制酶)(1)原核生物(2)特定 特定 磷酸二酯键 专一(3)黏性末端 平末端。2. DNA连接酶(1)磷酸二酯T4噬菌体 黏性末端 两种末端 低。(2)单个核苷酸 两个DNA片段3.载体(1)能在受体细胞中复制并稳定保存。 具有一至多个限制酶切
6、点,供外源DNA片段插入。具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。(2)质粒 细菌染色体之外 自我复制能力 环状(3) 噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取1. 编码蛋白质的结构基因 。2.直接分离 人工合成 反转录法_ 化学合成法_。3.(1)DNA双链复制 (2)DNA解链; 引物结合到互补DNA链; 热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步:基因表达载体的构建1.稳定存在 遗传至下一代 表达和发挥作用。2.目的基因启动子终止子标记基因(1)DNA片段 首端 RNA聚合酶 转录出mRNA 蛋白质。(2)DNA片段 尾端。(3)是否含有目的基因
7、 含有目的基因的细胞 抗生素基因。第三步:将目的基因导入受体细胞_2. 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 受精卵繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 大肠杆菌 Ca2+ 感受态细胞 重组表达载体DNA分子 3.标记基因是否表达。第四步:目的基因的检测和表达1. 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术。2. 目的基因是否转录出了mRNA 用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。3. 目的基因是否翻译成蛋白质 蛋白质的 抗体 抗原抗体杂交。4. 个体生物学水平 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状(三)基因工程的应用1.抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。2.提高动
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