细胞工程考试

1、专业： 生物技术年级2011级 学生姓名 敖佳琳 学号 2011210154序号装订线华中师范大学20132014学年第二学期期末考试试卷（A）卷课程名称 细胞工程 课程编号 84425002 任课教师 金烨 刘凯于 题型植物动物总分简答分析论述综合分值30203020100得分得分评阅人一、植物部分简答题(每题10分,30分)1. 简述植物细胞工程的应用。10分1. 脱毒苗生产，利用植物快速繁殖技术2. 植物改良，利用体细胞无性系技术3. 创造新的种质资源，利用原生质体培养和体细胞杂交技术4. 植物来源生物产品的生产，如人参皂甙、紫杉醇等5. 人工种子生产，利用植物胚胎培养技术2. 举例说明

2、你对胚胎发生途径和器官发生途径的理解。10分 胚胎发生途径是指指外植体按胚胎发生方式形成再生植株的过程。在植物的有性生殖过程中，精子与卵子结合形成合子，尔后发育成胚，胚再进一步发育成完整的植株。兰花的组织培养过程中，经诱导之后，茎尖会逐渐增大而形成原球茎体，与兰花的胚胎正常发育相似。器官发生途径是指在组织培养的过程中，再生植株不是通过胚胎，而是通过分生中心直接分化器官，最终形成完整植株的过程。通常情况下像草莓无菌苗的获取：采用牙尖分生组织经脱分化形成愈伤组织，进而再分化发育成不同的组织器官，最后形成完整植株。 3. 有位同学配完MS液体培养基时，发现其中有一些沉淀，请分析可能的原因。10分 M

3、S液体培养基配方复杂，从培养基配方角度考虑，出现沉淀可能有以下个方面的原因：l Mg2+、Ca2+、Fe3+等会与PO43-结合形成微溶或难溶物，加母液时没有有意调整加样顺序l 调节pH时，所用的NaOH的浓度太高，又没有及时搅拌均匀，局部出现过碱性，产生Mg(OH)2及Ca(OH)2等沉淀l 所用到的双蒸水没有达到要求，存在杂质排除以上原因，操作者在配置时使用到的器皿不洁净以及灭菌过程温度、时长的设置不合适都有可能会是的配置的培养基产生沉淀。得 分评阅人二、植物部分-分析题(20分)1 配置MS固体、液体培养基2 诱导形成愈伤组织（流程图如下）以水稻、烟草的种子为原材料，采用植物愈伤组织诱导

4、的方法建立1. 如果要建立水稻（单子叶植物）和烟草（双子叶植物）的悬浮细胞系，请写出你的工作方案。工作方案可以用文字描述，也可以箭头、文字说明，你需要尽量考虑到实验的细节，不要过于简略，但又要注意：实验方案不等于具体的实验步骤，不可写成实验的具体步聚。20分烟草种子消毒（84#消毒无菌水反复冲洗）水稻种子去壳、消毒（95%酒精消毒无菌水冲洗25.0g/L的次氯酸钠浸泡无菌水冲洗）接种（每瓶接种23粒）接种（诱导愈伤组织形成的固体培养基中，每瓶接种510粒）培养，得无菌苗叶片消毒，切成小片接种（每皿接种5片）培养（26，恒温培养箱避光培养）愈伤组织反复继代培养3 愈伤组织离散重悬液体悬浮，摇床振

5、荡超松散愈伤组织得分评阅人三、动物部分-问答题 (每题10分，共30分)影响动物细胞体外增殖的环境因素主要包括温度、渗透压、pH及气体环境等。温度 温度是动物细胞在体外生存的基本条件之一，不同种类的动物细胞最适 生长温度是不同的。渗透压 体外培养渗透压是依赖于溶液中离子和中性分子（蔗糖、葡萄糖等）浓 度，不同来源的细胞其所要求的渗透压是不相同的 。pH 合适的酸碱度也是细胞生存的必要条件之一，一般来说，大多数哺乳动 物细胞的最适pH为7.27.4之间，如果低于6.5或者高于7.6都会对细胞 产生不利影响，较长时间在这种pH条件，细胞会衰老或死亡。气相环境 体外培养细胞需要有一理想的气体环境，包

6、括O2和CO2，且其浓度则需 要适当。多数细胞需要在有O2的条件下才能生长，CO2为细胞生长所需 要，同时又是细胞代谢的产物，并且与维持培养基的pH有关。体外培养 细胞采用开放培养时，其气体环境一般应为95%空气加5%CO2的混合气体。1. 简述影响动物细胞体外增殖的环境因素（10分）。淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要步骤包括： 1、抗原制备； 2、免疫动物； 3、免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备； 4、细胞融合； 5、杂交瘤细胞的选择培养； 6、杂交瘤细胞的筛选； 7、杂交瘤细胞的克隆化； 8、单克隆抗体的检定； 9、分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立； 10、单克隆抗体的大量制备。 用图示

7、可以表示为：2 试述单克隆抗体的制备过程(10分)胚胎干细胞的特征，在形态上表现为：l 体积小、核大，l 有一个或多个核仁；l 胚胎干细胞克隆紧密堆积，无明显的界限，形似鸟巢。在生化上表现为：l 具有碱性磷酸酶和端粒酶活性；l 表达SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60等；l 表达OCT-4蛋白；l 无X染色体失活。3 胚胎干细胞有什么特征？造血干细胞的来源途径有哪些（10分）?造血干细胞是从血液或骨髓中分离到的具有能自我更新、能分化成一些具有组织特化的细胞、能从骨髓中游离出来进入血液循环、能发生程序性死亡特性的细胞。造血干细胞的来源途径主要有：l 骨髓；1/400l 外周血；1/100

8、000l 脐带血；1/10000l 胎儿造血系统；l 胚胎干细胞和胚胎生殖细胞得分评阅人四 动物部分-综合题 (20分) 根据实验需要准备好所需的试验器皿，并清洗好。主要用到的器皿有：玻璃器皿（细胞培养瓶、试剂瓶、容量瓶、烧杯等） 新购置的应经过泡酸、泡碱处理，之后用刷子刷洗再用蒸馏水冲洗，完成之后自然阴干或者烘干。用过的培养瓶则可以省去泡酸泡碱的过程。塑料器皿（试剂瓶等） 新置的塑料器皿先用清水充分浸泡和清洗，再用2%NaOH溶液浸泡过夜，取出用自来水冲洗后用5%稀盐酸浸泡30分钟，取出再用自来水冲洗，完后用蒸馏水漂洗，晾干。用过的塑料器皿则可以省去泡酸泡碱的过程。滤器 玻璃滤器按照如下流程清洗后烤干备用。1. 用清水注入滤器，抽气过滤3-5遍至无白沫，然后水滴滤过液。2. 用清洁液抽滤1-2遍，然后清洁液滴滤过夜。3. 自来水抽滤5遍，水滴滤过夜。4. 蒸馏水抽滤3遍，蒸馏水滴滤过夜。5. 三蒸水抽滤2遍，漂洗一次。 不锈钢滤器按如下流程清洗后烤干备用。a. 弃去滤板或滤膜，浸泡于清水中。b. 用软毛刷和优质洗涤剂轻轻刷洗干净c. 自来水冲洗干净d. 最后用蒸馏水漂洗3次金属器械（镊子、解剖刀等） 新置的金属器械应先用沾有汽油的沙布擦除防锈油，再用优质洗涤剂轻轻刷洗干净，再经自来水洗净，最后用蒸馏水洗净后用酒精棉球擦试，晾干或烤干备用。灭菌的过程常采用高压湿热灭菌，