流式基础原理及应用

1、流式基础原理及临流式基础原理及临床应用床应用流式基本概念流式基本概念BD BiosciencesImmune Function流式细胞术的基本概念流式细胞术的基本概念 流式细胞术流式细胞术（Flow Cytometry, Flow Cytometry, 简称简称FCMFCM）是一种可以快速、是一种可以快速、准确、客观，并且能够同时检测快速直线准确、客观，并且能够同时检测快速直线流动状态流动状态中的中的单单个细胞个细胞的多项物理及生物学特性，加以的多项物理及生物学特性，加以分析分析定量的技术，定量的技术，同时可以对特定群体加以同时可以对特定群体加以分选分选。 流式细胞仪流式细胞仪（Flow Cy

2、tometer）集激光技术、电子物理技）集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。BD BiosciencesImmune Function流式细胞术的特点流式细胞术的特点 检测速度快，分析样本量大：检测速度快，分析样本量大： 在极短时间内可分析大量细胞，在极短时间内可分析大量细胞，这是流式不同于其他细胞分这是流式不同于其他细胞分析仪器的主要特点，析仪器的主要特点，只要标本中的细胞数量足够，流式细胞只要标本中的细胞数量足够，流式

3、细胞仪可以每秒钟成千上万个细胞的速率进行测量，测量的细胞仪可以每秒钟成千上万个细胞的速率进行测量，测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个总数可达数千、数万乃至数百万个 可同时分析单个细胞的多种特征：可同时分析单个细胞的多种特征： 使用不同荧光素标记的单克隆抗体或荧光染料对细胞进行多使用不同荧光素标记的单克隆抗体或荧光染料对细胞进行多色荧光染色，通过流式细胞分析，可获得单细胞的多种信息，色荧光染色，通过流式细胞分析，可获得单细胞的多种信息，使细胞亚群的识别、计数更为准确使细胞亚群的识别、计数更为准确 强大的分选功能：强大的分选功能： 在分析的同时可以对特定群体加以分选在分析的同时可以对特定群体

4、加以分选BD BiosciencesImmune Function流式检测的样本流式检测的样本 可检测的样本种类多样：可检测的样本种类多样：各种细胞（如外周血，骨髓，细针穿刺，灌洗液，实体各种细胞（如外周血，骨髓，细针穿刺，灌洗液，实体组织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微组织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球等球等New!New!血清、血浆、培养上清、细胞裂解液血清、血浆、培养上清、细胞裂解液 样本制备：样本制备： 单细胞悬液（天然，机械研磨单细胞悬液（天然，机械研磨/ /消化）消化） 5 510105 51 110107 7cells/mlcells/ml，约，约0.

5、50.51ml1ml，300300目筛网过滤目筛网过滤BD BiosciencesImmune Function流式细胞仪的检测范围流式细胞仪的检测范围 细胞结构细胞结构 细胞大小细胞大小 细胞颗粒度细胞颗粒度 细胞表面积细胞表面积 核浆比例核浆比例 DNADNA含量与细胞周期含量与细胞周期 RNARNA含量含量 蛋白质含量蛋白质含量 细胞功能细胞功能 细胞表面细胞表面/ /胞浆胞浆/ /核的特异性抗原核的特异性抗原 细胞活性细胞活性 细胞内细胞内/ /外的细胞因子外的细胞因子 激素结合位点、细胞受体激素结合位点、细胞受体 蛋白磷酸化蛋白磷酸化 pHpH值值 钙离子浓度钙离子浓度 细胞膜电位、

6、线粒体膜电位细胞膜电位、线粒体膜电位 流式细胞仪流式细胞仪的检测信号的检测信号BD BiosciencesImmune Function散射光信号散射光信号 当细胞颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束当细胞颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方向散射。与激光束 方向同轴的称前向角散射光信号（方向同轴的称前向角散射光信号（FSC）。与激光束垂直的称为）。与激光束垂直的称为 侧向角散射光信号（侧向角散射光信号（SSC）。）。BD BiosciencesImmune Function散射光信号散射光信号Right Angle Light Right Angle Light Detect

7、or Detector Cell Complexity Cell ComplexitySSCSSCForward Light Forward Light Detector Detector Cell Surface Area Cell Surface Area FSCFSCIncident Incident Light Light SourceSource=前向角散射光（前向角散射光（FSC, Forward ScatterFSC, Forward Scatter）细胞相对大小及其表面积细胞相对大小及其表面积 =侧向角散射光（侧向角散射光（SSC, Side ScatterSSC, Side

8、Scatter）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性BD BiosciencesImmune Function前向角散射光信号前向角散射光信号BD BiosciencesImmune Function侧向角散射光信号侧向角散射光信号BD BiosciencesImmune Function外周全血细胞散射光双参数点图外周全血细胞散射光双参数点图（红细胞溶解后）（红细胞溶解后） 颗粒杂质、气泡颗粒杂质、气泡对检测的影响对检测的影响BD BiosciencesImmune Function荧光信号荧光信号 使用不同荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析使用不同荧光

9、标记的单克隆抗体染色，做多色分析 荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量BD BiosciencesImmune Function荧光样本制备荧光样本制备双色直接染色双色直接染色BD BiosciencesImmune FunctionFACSCalibur荧光检测通道荧光检测通道检测器组检测器组（激光器）（激光器）PMT位置位置带通带通/长通透镜长通透镜适用染料适用染料488nm蓝色激光蓝色激光FL1530/30FITCFL2585/42PE, PIFL3670 LPPerCP,PerCP-Cy5.5, PE-Cy7635nm红色激光红色激光FL46

10、61/16APCBD BiosciencesImmune Function双色分析=CD19+CD3细胞(B淋巴细胞)=CD3+CD19+细胞=CD3CD19细胞=CD3+CD19细胞(T淋巴细胞)流式数据分析形式流式数据分析形式BD BiosciencesImmune Function数据存储数据存储 FCS 2.0格式格式 常以列表模式（常以列表模式（LIST MODE)：将每个细胞的每个检测参：将每个细胞的每个检测参量依次排列顺序存储量依次排列顺序存储FSC SSC FL1 FL2Eventvent 210016024585Event 3300650160720

11、FITC/PE双染样本双染样本BD BiosciencesImmune FunctionBD BiosciencesImmune Function数据显示数据显示 直方图（直方图（Histogram） 二维点图（二维点图（Dot Plot） 等高线图（等高线图（Contour Plot） 密度图（密度图（Density） 三维图（三维图（3D Plot）等）等BD BiosciencesImmune Function单参数直方图分析单参数直方图分析l 荧光峰的高低即在纵轴对应的高度反映了？荧光峰的高低即在纵轴对应的高度反映了？l 荧光峰的高低即在纵轴对应的高度反映了具荧光峰的高低即在纵轴对应的

12、高度反映了具有此种荧光强度的细胞在样本中所占比例的相有此种荧光强度的细胞在样本中所占比例的相对多少，而非绝对数目对多少，而非绝对数目BD BiosciencesImmune Function双参数散点图分析双参数散点图分析BD BiosciencesImmune Function等高图和密度图等高图和密度图流式细胞仪的组成流式细胞仪的组成和工作原理和工作原理BD BiosciencesImmune FunctionBD BiosciencesImmune Function液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，液流系统：鞘液包绕着单行排列的细胞依次高速通过流动池，而激光聚焦于流动

13、池中心的样本流上，随后经检测的样本和而激光聚焦于流动池中心的样本流上，随后经检测的样本和鞘液流向废液桶。鞘液流向废液桶。BD BiosciencesImmune Function光学系统：经荧光染色的细胞在激光的照射下产生散射光学系统：经荧光染色的细胞在激光的照射下产生散射光和荧光信号，同时被前向光电二极管和一组光电倍增光和荧光信号，同时被前向光电二极管和一组光电倍增管（管（PMT）接收，荧光信号经一系列双色性反射镜和带）接收，荧光信号经一系列双色性反射镜和带通或长通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号通或长通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号BD BiosciencesImmune

14、 Function电子系统：荧光信号和散射光信号经二极管和电子系统：荧光信号和散射光信号经二极管和PMT接收后接收后可转换为电信号，再通过模可转换为电信号，再通过模/数转换器转换为可被计算机识数转换器转换为可被计算机识别的数字信号，以列表模式存储，最终以图形形式呈现别的数字信号，以列表模式存储，最终以图形形式呈现BD BiosciencesImmune FunctionBD BiosciencesImmune Function上机检测上机检测 单色单色/双色双色/多色样本多色样本 参数调节参数调节电压电压阈值阈值设门设门补偿补偿 BD BiosciencesImmune Function流式细

15、胞仪的应用领域流式细胞仪的应用领域 临床研究临床研究: :血液、肿瘤、药理、免疫血液、肿瘤、药理、免疫. 生物学研究：生物学研究：遗传、生殖、微生物、细胞生物、毒理、分子生物遗传、生殖、微生物、细胞生物、毒理、分子生物. 环境研究：环境研究：海洋生态研究海洋生态研究. 制药工业制药工业 食品工业食品工业 农业畜牧业农业畜牧业流式细胞仪的临床应用BD BiosciencesImmune FunctionHLA-B27 HLA-B27是是MHC I类抗原，在有核细胞上广泛表达类抗原，在有核细胞上广泛表达 HLA-B27的表达与强直性脊柱炎高度相关，在其它血的表达与强直性脊柱炎高度相关，在其它血清阴

16、性骨关节病也有明显表达，如清阴性骨关节病也有明显表达，如Reiters综和症、银综和症、银屑病性关节炎、葡萄膜炎等屑病性关节炎、葡萄膜炎等 使用流式细胞仪，用血量少，可以快速、灵敏、准确地使用流式细胞仪，用血量少，可以快速、灵敏、准确地分析分析HLA-B27 BD HLA-B27 Kit检测检测HLA-B27，报告检测的平均荧光，报告检测的平均荧光强度，根据界值判定，得到阴性强度，根据界值判定，得到阴性/阳性结果。实验的灵阳性结果。实验的灵敏度为敏度为100%，特异性为，特异性为97.5%BD BiosciencesImmune FunctionHLA-B27HLA-B27阴性样本HLA-B2

17、7阳性样本BD BiosciencesImmune Function淋巴细胞及其亚群的分析淋巴细胞及其亚群的分析 SimulSET IMK MultiTEST IMK TriTEST 3-Color Reagent MultiTEST 4-Color ReagentBD BiosciencesImmune Function淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析 使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析淋巴细胞上多种抗原的表达，可以将淋巴细胞亚群淋巴细胞上多种抗原的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定量分析区分开，进行定量分析 各淋巴细胞亚群的百分含量

18、各淋巴细胞亚群的百分含量 淋巴细胞亚群的绝对计数淋巴细胞亚群的绝对计数BD BiosciencesImmune Function淋巴细胞亚群分析淋巴细胞亚群分析 根据功能，淋巴细胞主要分为根据功能，淋巴细胞主要分为 B淋巴细胞（淋巴细胞（CD19+），与体液免疫有关），与体液免疫有关 T淋巴细胞（淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关），与细胞免疫有关 NK细胞（细胞（CD3-CD16+56+），行驶免疫监控功能），行驶免疫监控功能 根据根据CD4、CD8表达，表达，T淋巴细胞又分为淋巴细胞又分为 T辅助辅助/诱导细胞（诱导细胞（CD3+CD4+） T抑制抑制/细胞毒性细胞（细胞毒性细胞（CD3

19、+CD8+）Th/Ts升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、SLE） Th/Ts降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血 活化活化T淋巴细胞：淋巴细胞：HLA-DR、CD38等等BD BiosciencesImmune Function淋巴细胞免疫分型原理淋巴细胞免疫分型原理 荧光染料标记的荧光染料标记的单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原单克隆抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，结合，结合多色荧光分析，结合多色荧光分析，即可以把各种不同功能即可以把各种不同功能的淋巴亚群区分开来，进而得到各亚群的相对比例。的淋巴亚群区分开来，进

20、而得到各亚群的相对比例。 T淋巴细胞（淋巴细胞（CD3+）/B淋巴细胞淋巴细胞(CD19+)/NK淋巴淋巴细胞细胞(CD16+/CD56+)及亚群分析及亚群分析 CD4+ T淋巴细胞绝对计数淋巴细胞绝对计数BD BiosciencesImmune Function淋巴细胞免疫分型原理淋巴细胞免疫分型原理 淋巴细胞为淋巴细胞为CD45强阳性，颗粒度较低的一群细胞强阳性，颗粒度较低的一群细胞 主要有主要有T淋巴细胞（淋巴细胞（CD3+）、）、B淋巴细胞（淋巴细胞（CD19+）和）和 NK细胞（细胞（CD16+56+/CD3-） T淋巴细胞亚群：淋巴细胞亚群：CD3，反映细胞免疫功能，反映细胞免疫功

21、能 B淋巴细胞：淋巴细胞：CD19、CD20、CD22等，与体液免疫功能有等，与体液免疫功能有关。关。 NK细胞：执行免疫监视功能细胞：执行免疫监视功能BD BiosciencesImmune FunctionT淋巴细胞的免疫表型原理淋巴细胞的免疫表型原理 T淋巴细胞分类复杂，不同类型免疫表型的淋巴细胞分类复杂，不同类型免疫表型的T淋巴细胞的功淋巴细胞的功能不同能不同 根据根据CD4、CD8的表达，的表达，T淋巴细胞可分为淋巴细胞可分为T helper/T inducer（CD3+CD4+）、）、T suppressor/ T cytotoxic（CD3+CD8+） H/S比值升高：自身免疫性

22、疾病如类风湿性关节炎、比值升高：自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、SLE等。等。 H/S比值降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血等。比值降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血等。 H/S比值是比值是HIV感染病人的重要监测指标感染病人的重要监测指标 活化活化T淋巴细胞：淋巴细胞：HLA-DR、CD38等等BD BiosciencesImmune FunctionSimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴细胞双色分析淋巴细胞双色分析 使用双色分析试剂使用双色分析试剂 样本使用样本使用EDTA抗凝全血，用血量抗凝全血，用血量600uL 使用使用cellquest pro软件，进行样本

23、的获取和分析软件，进行样本的获取和分析 医生报告医生报告T、B、NK淋巴细胞及淋巴细胞及TH、TS百分含量和百分含量和H/S比比值，并报告参考值范围值，并报告参考值范围BD BiosciencesImmune FunctionSimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴细胞双色分析淋巴细胞双色分析CD45/CD14，Leucogate：确定淋巴细胞门，评估门的有效性，并自：确定淋巴细胞门，评估门的有效性，并自动计算淋巴细胞亚群占门内淋巴细胞的比例，排除门内杂细胞的干扰动计算淋巴细胞亚群占门内淋巴细胞的比例，排除门内杂细胞的干扰 1/ 2a，阴性对照：确定淋巴细胞的阴性界值，评估实验的非

24、特异染色，阴性对照：确定淋巴细胞的阴性界值，评估实验的非特异染色CD3/CD19：分析：分析T淋巴细胞和淋巴细胞和B淋巴细胞淋巴细胞CD3/CD4：分析：分析T辅助辅助/诱导细胞诱导细胞CD3/CD8：分析：分析T抑制抑制/细胞毒性细胞细胞毒性细胞CD3/CD16+56：分析：分析T淋巴细胞和淋巴细胞和NK细胞细胞BD BiosciencesImmune FunctionMultiSET全自动分析软件全自动分析软件 FACS系列流式细胞分析仪使用的全自动淋巴细胞免疫表型系列流式细胞分析仪使用的全自动淋巴细胞免疫表型检测软件检测软件 外周血直接多色荧光分析，获得关于外周血中淋巴细胞各外周血直接多

25、色荧光分析，获得关于外周血中淋巴细胞各类亚型细胞的信息类亚型细胞的信息 进行相对计数和绝对计数进行相对计数和绝对计数TruCOUNT 免洗试剂设计，操作简便，减少细胞丢失免洗试剂设计，操作简便，减少细胞丢失 质量控制保证质量控制保证 用户定义测定管组合用户定义测定管组合 提高工作效率和计数的精确度提高工作效率和计数的精确度BD BiosciencesImmune FunctionMultiSET淋巴细胞亚群绝对计数MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4MultiTEST CD3/CD15+56/CD45/CD19BD BiosciencesImmune Function实验报告实

26、验报告ReporthLaboratory Report：实验室报告，报告每个标本各实验管：实验室报告，报告每个标本各实验管的分析点图的分析点图FSC-SSC、FL1-FL2，计算淋巴细胞及各亚型，计算淋巴细胞及各亚型相对含量相对含量/绝对含量，计算绝对含量，计算H/S比值比值hPhysician Report：医生报告，报告每个标本的各种淋巴：医生报告，报告每个标本的各种淋巴细胞占总淋巴细胞的百分含量细胞占总淋巴细胞的百分含量/绝对含量，并给出正常值范绝对含量，并给出正常值范围围hSummery Report：总结报告，总结当日的：总结报告，总结当日的SimulSET实验实验结果结果BD Bi

27、osciencesImmune Function正常参考值正常参考值 百分数百分数 绝对数绝对数CD3+T 50-84% 955-2860/ulCD3+CD4+Th 27-51% 550-1440/ulCD3+CD8+Tc 15-44% 320-1250/ulCD4/CD8 0.71-2.87 CD19 5-18% 90-560/ulCD16/56 7-40% 150-1100/ulCD3+HLA-DR+ 1.2-5.8%BD BiosciencesImmune Function临床意义临床意义 了解在不同情况下体内免疫功能状态了解在不同情况下体内免疫功能状态 辅助临床疾病的诊断辅助临床疾病的

28、诊断 探索疾病的发病机理、病程、预后探索疾病的发病机理、病程、预后 监测、指导临床治疗方案监测、指导临床治疗方案BD BiosciencesImmune Function临床意义临床意义 自身免疫性疾病：自身免疫性疾病：SLE，类风湿关节炎，类风湿关节炎 免疫缺陷病，免疫缺陷病，AIDS 各种肿瘤：消化道肿瘤各种肿瘤：消化道肿瘤 肿瘤病人化疗后免疫力监测肿瘤病人化疗后免疫力监测 各种感染：带状疱疹、慢性肝病各种感染：带状疱疹、慢性肝病 移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测BD BiosciencesImmune Function临床意义临床意义 急性

29、心肌梗塞：急性心肌梗塞： 血液系统疾病：小儿再障，传染性单核细胞增多血液系统疾病：小儿再障，传染性单核细胞增多症症 皮肤病性病：皮炎、梅毒皮肤病性病：皮炎、梅毒 妇产科疾病：习惯性流产妇产科疾病：习惯性流产BD BiosciencesImmune Function临床意义临床意义疾病疾病 T 细胞亚群细胞亚群 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 类风关类风关 （活动期）（活动期） SLE （活动期）（活动期） Sjogren综合症综合症 多发性硬化症多发性硬化症 重症肌无力重症肌无力 膜型肾小球肾炎膜型肾小球肾炎 胰岛素依赖性糖尿病胰岛素依赖性糖尿病 乙型肝炎乙型肝炎 自身溶血性贫血自身溶

30、血性贫血 BD BiosciencesImmune Function临床意义临床意义疾病疾病 T 细胞亚群细胞亚群 CD4+ CD8+ CD4+/CD8+ 上呼吸道感染上呼吸道感染 传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症 （急性期）（急性期） 巨细胞病毒感染巨细胞病毒感染 乙肝乙肝 （急性期（急性期/慢性肝炎）慢性肝炎） 结核结核 （胸水（胸水/重症外周血）重症外周血）麻风麻风 疟疾疟疾 血吸虫病血吸虫病 AIDS BD BiosciencesImmune FunctionHIV感染感染=T淋巴细胞总数减少淋巴细胞总数减少=T细胞亚群比例倒置，细胞亚群比例倒置，Th/Ts1.0=Th细胞细胞

31、(CD4+细胞细胞)绝对计数绝对计数200个个/ml=Ts细胞增高细胞增高=NK细胞减少或活力下降细胞减少或活力下降=B细胞正常细胞正常BD BiosciencesImmune FunctionAIDS病人病人T亚群分析亚群分析BD BiosciencesImmune Function先天性无先天性无 球蛋白血症球蛋白血症BD BiosciencesImmune Function干祖细胞的分析和分选干祖细胞的分析和分选 造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血细胞。向分化的造血细胞。 造血干细胞的特征是：造血干细胞的特征是：大小（大小（FSCFS

32、C）和颗粒度（）和颗粒度（SSCSSC）介于成熟淋巴细胞、）介于成熟淋巴细胞、大淋巴细胞相似大淋巴细胞相似细胞内含有较多核酸物质细胞内含有较多核酸物质CD34CD34表达弱阳性或强阳性表达弱阳性或强阳性CD45CD45表达弱阳性表达弱阳性BD BiosciencesImmune Function干祖细胞的分析干祖细胞的分析细胞表型分析细胞表型分析CD34+造血干细胞：广泛应用于人造血干细胞：广泛应用于人/小鼠小鼠造血干细胞分析造血干细胞分析488nm激光做多色分析激光做多色分析Milan：CD34单色分析单色分析ISHAGE：CD45/CD34双色分析双色分析SIHON：CD14+66e /C

33、D34/ LSD751三色分析三色分析ProCOUNT：NA/CD34/CD45三色分析，加入三色分析，加入TruCOUNT标准微球，做造血干细胞绝对计数标准微球，做造血干细胞绝对计数BD BiosciencesImmune FunctionProCOUNT造血干细胞计数造血干细胞计数 造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血细胞，在干细胞移植时需要做造血干细胞绝对计造血细胞，在干细胞移植时需要做造血干细胞绝对计数数 根据造血干细胞特征，进行三色分析根据造血干细胞特征，进行三色分析NA/CD34 PE/CD45 PerCP ，多重设门，准

34、确、特异地圈定，多重设门，准确、特异地圈定CD34+干细胞干细胞 使用使用TruCOUNT绝对计数管，准确计算绝对计数管，准确计算CD34+干细胞干细胞绝对含量绝对含量BD BiosciencesImmune Function造血干细胞计数造血干细胞计数=传统方法（有核细胞计数、集落形成单位计数）：费传统方法（有核细胞计数、集落形成单位计数）：费时费力，与干细胞移植的数量关系不明确时费力，与干细胞移植的数量关系不明确=流式细胞术：快速得到准确的计数结果流式细胞术：快速得到准确的计数结果=多色分析，多重设门，特异检测多色分析，多重设门，特异检测CD34+干细胞干细胞=利用利用TruCOUNT绝对

35、计数技术，准确定量，确定干细胞移植绝对计数技术，准确定量，确定干细胞移植数量数量=使用使用ProCOUNT自动软件，自动做质量检查，报告结果，重自动软件，自动做质量检查，报告结果，重复性好复性好=报告报告CD34+细胞百分含量和绝对含量，并根据收获量和受者细胞百分含量和绝对含量，并根据收获量和受者体重，自动计算受者每公斤体重接受的干细胞数量，帮助判体重，自动计算受者每公斤体重接受的干细胞数量，帮助判断干细胞移植的最佳时间断干细胞移植的最佳时间BD BiosciencesImmune FunctionProCOUNT造血干细胞计数造血干细胞计数BD BiosciencesImmune Funct

36、ion造血干细胞计数造血干细胞计数ProCOUNTBD BiosciencesImmune Function造血干细胞计数造血干细胞计数ProCOUNTBD BiosciencesImmune Function阵发性血红蛋白尿阵发性血红蛋白尿PNH=阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血补体异常敏感的一种慢性血管内溶血=患者体内红细胞呈不均一性患者体内红细胞呈不均一性=利用流式细胞术和利用流式细胞术和CD55和和CD59单克隆抗体，对单克隆抗体，对PNH患者患者红细胞、粒细胞和血小板进行分析，证实存在

37、膜蛋白表达红细胞、粒细胞和血小板进行分析，证实存在膜蛋白表达缺陷的血细胞，并计算缺陷细胞在全血中所占比例缺陷的血细胞，并计算缺陷细胞在全血中所占比例BD BiosciencesImmune Function阵发性血红蛋白尿阵发性血红蛋白尿PNH=正常人红细胞、粒细胞和血小板正常人红细胞、粒细胞和血小板CD59表达完全阳性表达完全阳性=PNH患者血细胞分为三型：患者血细胞分为三型：型：型：CD59表达完全阳性，荧光强度与正常人阳性峰荧光强度接近表达完全阳性，荧光强度与正常人阳性峰荧光强度接近型：型：CD59表达部分阳性，荧光强度介于表达部分阳性，荧光强度介于型与型与型之间型之间 型：型：CD59

38、表达完全阴性表达完全阴性=分析分析PNH患者各型细胞所占百分比，评估疾病的严重程度患者各型细胞所占百分比，评估疾病的严重程度BD BiosciencesImmune Function红细胞红细胞 PNHPNH分析分析 A 正常人B D 病人BD BiosciencesImmune Function网织红细胞计数网织红细胞计数Retic-COUNT= 操作快速、简便操作快速、简便= 计数精确计数精确= 低水平网织红细胞检测低水平网织红细胞检测= 网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数IRF临床应用：临床应用：= 预测骨髓移植效果预测骨髓移植效果= 判断贫血发病原因判断贫血发病原因= 评价生物制剂的疗效评价生物制剂的疗效BD BiosciencesImmune Function血小板检测血小板检测=血小板膜糖蛋白复合物诊断血小板缺陷性疾病血小板膜糖蛋白复合物诊断血小板缺陷性疾病CD41-CD6