单基因遗传病的研究方法与技术2013

1、基因突变基因突变三核苷酸重复突变三核苷酸重复突变微小突变微小突变Xq27.3前突变和全突变前突变和全突变正常正常 CGG 200F: Fully expanded and methylatedNM: Methylated X do not cut with EclXIP: Unmethylated premutationN: X in normal male and active normal femalev聚合酶链式反应于聚合酶链式反应于1983年由美国年由美国Cetus公司的公司的K.Mullis建立，并和建立，并和定点突变的发明者定点突变的发明者M.Smith一起荣获一起荣获1993年度

2、诺贝尔化学奖，年度诺贝尔化学奖，为为生命科学领域的研究开创了崭新时代。生命科学领域的研究开创了崭新时代。5533d.NTPs耐热DNA聚合酶引物5353535353535353添加反应混合液添加反应混合液及样本及样本变性变性535353535353退火退火加入试管中加入试管中延伸延伸53535353继续延伸继续延伸535355TaqTaq353TaqTaq55循环循环5353535355335353第二个循环第二个循环4个拷贝个拷贝第三个循环第三个循环8个拷贝个拷贝53535353535353535353533553535353第第n个循环个循环2n个拷贝个拷贝 NC F1 F2 F3 F4

3、F5 PC M应用应用PCR技术分析一遗传性脊髓小脑性共技术分析一遗传性脊髓小脑性共济失调（济失调（SCA)3型家系型家系NCNC: :正常对照正常对照PCPC: :阳性对照阳性对照F F: :家系成员家系成员M M:Marker:Marker结果：结果：家系成员家系成员1 1、3 3、4 4有有SCA3SCA3致病基致病基因突变因突变; ;家系成员家系成员2 2、5 5未检测到突变未检测到突变12345应用应用PCR-RFLP技术分析脊肌萎缩症（技术分析脊肌萎缩症（SMA）致病基因致病基因SMNPCRPCR扩增扩增SMNSMN基因基因exon7,DraIexon7,DraI酶切酶切PCRPC

4、R产物产物. .酶切酶切N N：正常人：正常人PCRPCR产物被酶切为产物被酶切为两条带两条带酶切酶切P P：阳性对照：阳性对照PCRPCR产物被酶切为产物被酶切为一条短带一条短带病人病人1 1：结果显示：结果显示SMNSMN基因有突变基因有突变病人病人2 2和和3 3：结果：结果显示未有突变显示未有突变MLPA 技术原理技术原理MLPA方法检测方法检测DMD 1 12 23 34 45 5464749新致病基因的研究方法新致病基因的研究方法和技术和技术StopCACACAPrimer 1Primer 2CACACACACACACACACACACACACACACAD4S1534D4S2929D

5、4S2460D4S423I-1114,124176,178200,202105,112II-1114,120153,159200,202107,109II-2114,124157,176202,204105,112II-3114,122157,178200,202102,105II-4114,124157,176202,204105,112II-5114,124157,176198,202107,109III-1114,124153,176200,202109,112III-2114,124176,176202,202109,112 隐性突变隐性突变往往导致失去功能（loss of function） 显性突变可导致获得功能（gain of function）