乙肝核心抗原的检测与应用课件

1、乙肝核心抗原的检测与应用HBcAg的检测的检测(jin c)与应用与应用 检验科检验科 胡亚远胡亚远 第一页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第二页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第三页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第四页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第五页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第六页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第七页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 机体的机体的Th1型免疫反应可促进病原体的清除型免疫反应可促进病原体的清除(qngch)(qngch)，而，而Th2型免疫反应则可加重机体的病理损害，在型免疫反应则可加重机体的病理损害，在

2、HBcAg诱导下诱导下，外周血单个核细胞（，外周血单个核细胞（PBMC）产生）产生Th1类细胞因子量明类细胞因子量明显增高；在显增高；在HBeAg诱导下，诱导下，Th2类细胞因子量明显增高。慢类细胞因子量明显增高。慢性性HBV感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使HBeAg特异特异性性T细胞由细胞由Th2细胞主导型转化为细胞主导型转化为Th1细胞型，细胞型，HBcAg有望有望打破打破HBeAg诱导的免疫耐受状态而增强诱导的免疫耐受状态而增强Th1细胞优势表达细胞优势表达达到治疗的目的。慢性乙型肝炎患者和达到治疗的目的。慢性乙型肝炎患者和HBV慢性携带者慢性携带

3、者体内针对体内针对HBV的特异性的特异性CTL应答明显低下，纠正这种应答明显低下，纠正这种CTL低反应状态，对于机体有效地清除低反应状态，对于机体有效地清除HBV至关重要。至关重要。 第八页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第九页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第十页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第十一页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用检测(jin c) 第十二页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第十三页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第十四页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第十五页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第十六页，共四十二页。乙肝核心抗原

4、的检测与应用 慢性活动性肝炎中血慢性活动性肝炎中血HBcAg阳性率明阳性率明显高于显高于ASC（无症状病毒携带者），说明血（无症状病毒携带者），说明血HBcAg阳性较多见于病变活动较重的慢性阳性较多见于病变活动较重的慢性肝炎肝炎(n yn)(n yn)而较少见于病变较静止的而较少见于病变较静止的ASC。血清中的血清中的HBcAg阳性与肝脏病变活动程度阳性与肝脏病变活动程度有关，且对估计预后有很好价值。有关，且对估计预后有很好价值。HBcAg检出结果是：肝硬化慢性乙型肝检出结果是：肝硬化慢性乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。炎中型慢性乙型肝炎轻型。 第十七页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 （

5、1）对血液内）对血液内HBV的开壳处理，能直接检测的开壳处理，能直接检测HBcAg，能比，能比HBeAg更客观地反映血更客观地反映血HBV的存在，以的存在，以及作出数量多少的判断，可替代及作出数量多少的判断，可替代HBeAg而作为病毒复而作为病毒复制和传染性的敏感指标，是病毒存在的直接标志。它制和传染性的敏感指标，是病毒存在的直接标志。它与与HBV复制标志呈正相关，可以反映复制标志呈正相关，可以反映HBV活动活动(hu dng)(hu dng)的的复制程度。复制程度。HBcAg与乙型肝炎病毒其他五项标志物相与乙型肝炎病毒其他五项标志物相比更是反映比更是反映HBV复制的直接证据。它可与其他的复制

6、的直接证据。它可与其他的HBV血清学标志物起到相互配合和相互补充的作用。血清学标志物起到相互配合和相互补充的作用。 第十八页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 （2）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，HBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后细胞溶解后HBcAg可直接释放入血，故能直接反映肝细可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。在急性乙型肝炎早期胞损害和病情进展的程度。在急性乙型肝炎早期HBcAg亦达高峰值，而且病情严重者的亦达高峰值，而且病情严重者的HBcAg水平也水平也

7、相应相应(xingyng)(xingyng)提高。慢性乙型肝炎患者，血提高。慢性乙型肝炎患者，血HBcAg阴性者阴性者比阳性者有明显的临床及生化指标的改善。比阳性者有明显的临床及生化指标的改善。HBcAg含含量与肝脏损害的情况有关，有助于抗病毒药物及免疫量与肝脏损害的情况有关，有助于抗病毒药物及免疫治疗的疗效评价。治疗的疗效评价。 第十九页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 （3）从理论上讲，聚合酶链反应（）从理论上讲，聚合酶链反应（PCR）检测法）检测法比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现HBcAg阳性而阳性而HBV DNA阴性的结果。因此，两

8、种检测方法可阴性的结果。因此，两种检测方法可以互补使用，以减少漏检。在不具备以互补使用，以减少漏检。在不具备(jbi)(jbi)PCR检测条件检测条件的单位，以酶联（的单位，以酶联（ELISA）法试剂盒在检测血清）法试剂盒在检测血清HBV五五项标志的同时，检测项标志的同时，检测HBcAg不仅能进一步了解病毒的不仅能进一步了解病毒的复制情况，还可了解肝细胞损害和病情进展的程度，且复制情况，还可了解肝细胞损害和病情进展的程度，且检测费用低廉，有临床实用价值。检测费用低廉，有临床实用价值。 第二十页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 （4）在对献血员的筛选中，单凭）在对献血员的筛选中，单凭HBs

9、Ag的测的测定来判断是否受定来判断是否受HBV感染也是不够的，会漏诊感染也是不够的，会漏诊HBsAg阴性而阴性而HBcAg和抗和抗-HBc阳性的乙型肝炎阳性的乙型肝炎患者，只有患者，只有(zhyu)三者同时检测，才能更好地诊断三者同时检测，才能更好地诊断乙型肝炎并防止在输血中传播，降低输血后肝炎乙型肝炎并防止在输血中传播，降低输血后肝炎的发生率。的发生率。第二十一页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 HBcAg主要存在主要存在(cnzi)(cnzi)于于HBV颗粒和受染颗粒和受染的肝细胞中，的肝细胞中，HBV复制时复制时HBcAg表达于肝表达于肝细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型。细胞内，分

10、胞核型、胞质型和胞膜型。Delladetsima et al发现胆管上皮细胞也是发现胆管上皮细胞也是HBV的适合宿主，的适合宿主，HBV能够在其中复制并能够在其中复制并表达表达HBcAg和和HBsAg抗原。抗原。 第二十二页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 肝内肝内HBcAg与与HBV DNA的分布区域常较一致，有的分布区域常较一致，有的肝细胞可同时检出的肝细胞可同时检出HBcAg和和HBV DNA，但多数，但多数HBV DNA（）肝细胞并不同时含有（）肝细胞并不同时含有HBcAg。HBV高复制高复制期期HBcAg以胞核表达为主，无或很少在胞质内表达；而以胞核表达为主，无或很少在胞质内表

11、达；而低复制期时相反，低复制期时相反，HBcAg在肝细胞核内而不是细胞质内在肝细胞核内而不是细胞质内的表达程度的表达程度(chngd)能够精确地反映慢性乙型肝炎患者的病能够精确地反映慢性乙型肝炎患者的病毒复制水平。肝毒复制水平。肝HBcAg与血清与血清HBV DNA水平呈正相关水平呈正相关。经干扰素。经干扰素治疗后的慢性活动性乙型肝炎患者，治疗后的慢性活动性乙型肝炎患者，HBcAg发生从核内向胞质的转换。发生从核内向胞质的转换。第二十三页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 HBcAg与与HBeAg常同时表达在肝细胞内，常同时表达在肝细胞内，但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃复制的但在亚细

12、胞水平有重要差异。在病毒活跃复制的ASC，常有较强的，常有较强的HBcAg胞核表达和胞核表达和HBeAg胞胞质表达；活动性慢性乙型肝炎时常有质表达；活动性慢性乙型肝炎时常有HBcAg的的胞质表达，因免疫清除而病毒减少胞质表达，因免疫清除而病毒减少(jinsho)(jinsho)，难以，难以检出检出HBeAg。作为免疫攻击的靶抗原，。作为免疫攻击的靶抗原，HBeAg不不及及HBcAg重要。重要。 第二十四页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第二十五页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第二十六页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中

13、HBcAg、HBV DNA的阳性率较高。的阳性率较高。HBcAg颗粒在肝组织中主要颗粒在肝组织中主要(zhyo)(zhyo)呈弥漫呈弥漫的浆膜型分布，的浆膜型分布，HBcAg和和HBV DNA呈浆、膜型分布者呈浆、膜型分布者，其肝组织中，其肝组织中HBV DNA表达程度、炎症活动度和纤维表达程度、炎症活动度和纤维组织增生程度，明显较呈核型分布者高。组织增生程度，明显较呈核型分布者高。HBcAg及及HBV DNA阳性的肝组织，炎症活动明显，界面呈碎阳性的肝组织，炎症活动明显，界面呈碎屑坏死，灶性坏死。屑坏死，灶性坏死。 第二十七页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用第二十八页，共四十二页。乙肝

14、核心抗原的检测与应用 HBV合并合并HDV感染者的肝组织中，感染者的肝组织中，HBcAg和和HDAg阳性细胞分布关系不密切，阳性细胞分布关系不密切，HBcAg阳阳性细胞明显少于性细胞明显少于HDAg阳性细胞，阳性细胞，HBcAg主要主要呈核型表达，胞质中阳性颗粒较少见到，表达呈核型表达，胞质中阳性颗粒较少见到，表达强度也较弱，表明强度也较弱，表明HDV感染者感染者HBV是低水平复是低水平复制，制，HDV可能有抑制可能有抑制HBV基因复制或病毒抗原表基因复制或病毒抗原表达的作用，特别达的作用，特别(tbi)(tbi)是在是在HDV复制活跃的阶段，复制活跃的阶段，即即HDAg大量表达时，大量表达时

15、，HBV复制受到的抑制最为复制受到的抑制最为明显。明显。 第二十九页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 儿童肝内儿童肝内HBcAg主要表达于核内。肝内主要表达于核内。肝内HBcAg呈弥漫性分布者，多见于呈弥漫性分布者，多见于10岁以内的较小岁以内的较小儿童；而呈局灶性分布者，多见于儿童；而呈局灶性分布者，多见于10岁以上的较岁以上的较大儿童，大儿童，HBcAg呈局灶性分布比弥漫性分布者，呈局灶性分布比弥漫性分布者，ALT水平水平(shupng)(shupng)较高并伴有较明显的肝脏炎症活动较高并伴有较明显的肝脏炎症活动。在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝内。在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝内HBcA

16、g呈弥呈弥漫性分布者为病毒感染早期，漫性分布者为病毒感染早期，HBcAg呈局灶性分呈局灶性分布并伴随布并伴随HBeAg阳性者为疾病短期内进展的标志阳性者为疾病短期内进展的标志。 第三十页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 （1）检测肝组织）检测肝组织HBcAg有助于确有助于确定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对于血定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对于血清乙型肝炎病毒清乙型肝炎病毒(bngd)(bngd)标志物阴性病例，标志物阴性病例，在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型肝在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型肝炎的不足。炎的不足。 第三十一页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 （2）有助于评估肝细胞坏死炎

17、性活动）有助于评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性的程度及病变发展的趋向，推测慢性(mn xng)(mn xng)乙乙型肝炎的预后。肝细胞内型肝炎的预后。肝细胞内HBcAg转阴和肝细转阴和肝细胞坏死病变减轻具有一致性。胞坏死病变减轻具有一致性。HBcAg浆膜型浆膜型者显示此种一致性，而核型则否，可能由于者显示此种一致性，而核型则否，可能由于肝细胞质、膜上的肝细胞质、膜上的HBcAg作为靶抗原易受到作为靶抗原易受到杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致肝细胞损杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致肝细胞损害，而核型害，而核型HBcAg则不具有此种作用。则不具有此种作用。 第三十二页，共四十二页。乙

18、肝核心抗原的检测与应用 （3）HBcAg检测检测(jin c)(jin c)也是判断也是判断HBV复制状态的一项重要指标，肝组织复制状态的一项重要指标，肝组织HBcAg与与HBV DNA两种病毒复制标志物两种病毒复制标志物相关。研究结果证实肝组织相关。研究结果证实肝组织HBcAg检测检测具有多种实用价值，值得推荐。具有多种实用价值，值得推荐。 第三十三页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死胎进行研究，发现胎进行研究，发现HBcAg在多种脏器内均在多种脏器内均可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最低。说明低。说明HBV有可能在多种组织内复制并表有可能在多种组织内复制并表达抗原。这可能是达抗原。这可能是HBV通过产妇传播，导致通过产妇传播，导致(dozh)(dozh)新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿发育新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿发育不良和死亡的重要因素。不良和死亡的重要因素。 第三十四页，共四十二页。乙肝核心抗原的检测与应用 总之，充分认识总之，充分认识HBcAg的生物学特点和其在的生物学特点和其在血液、肝组