凝乳酶酶制剂的制备

1、凝乳酶酶制剂的制备报娠2211中的方法制卷擬乳酶和酚液.5000inL煤终浓缩500mL,超滤浓绸fXf网态发酵陆?辿OjjyniiLIA.bOKD'PYr6DkD浓缩1知ml1泠才!酗沛10mm划休沉淀的过程由图3-25中所示"右OkD翅滤酒4500itjL>4350mL6000mL“1600QD屮玄A纤雉超泄:膜百000。趨遞液3甜0IT1I團3-対中空纤堆超熄法浓篩闔港实验谎程囹FigJ-25TheHowchadofpolypropykne(PP)hollowfiberporousmembrane发酵原液离七用狀得的上清液经过60kD中空纤维超粽膜*浓编液为黑色浑

2、浊液,超滤液为楡色透fl刖液体即通过KStfflttRfe去酋体呼片和发醉用菲堆的杂氛中空纤维超滤过程中体枳变化如图3-25,从图中我们可以看出发酵上清液体积由原来的5L浓缩金500ml.,HU发醉液休积浓缩信数约为20倍：图326为中空纤绯甩濾膜浓缩后发酵液的Tris-SDS-PAGE凝胶电冰图，对以石出经过6000I)超滤膜的浓缩作用后.35.0kDa的冃的蛋门被高效浓缩。山此证明中空纤维超滤膜可以离效的将酶液浓缩，为酗活的捉高提供了理论基础。MO4“21.1 45m；n*II的蛋门II的蛋门*JtSOkPa240H>»”UklH.U4kl>»图3-26超滤

3、浓缩过程中电泳图泳ill为原液泳道2为中空纤维6万腫上的收集液泳道3为中空纤细6万旅下的收集液.泳道4为中空纤维6千膜下的收集液.泳道5为中空纤维6千膜上的收集液.泳道6为markerIig.3-26Electrophoregraminconcentrationprocess山表314中所示,右：浓缩后，凝乳陽活力增加:Ihr人分孑徴白被£除，中空纤维6力截留下的蛋白含虽增加;而山于中空纤维6截昭小分子物质包括无机盐离f和水分化从而达到浓缩的冃的，因此蛋门含量增加。相应地，比活力也随之壇加。表3-14超滤过程中蛊白含审及比活力的比较Table3-14Enzymeactivits.pr

4、oteinandspecificactivity蛋白含(mg/mL)比活力(U/mg)没提的液0.0973075±20中空纤维6/jJfi0.06452078士20中空纤维6千斥0.461764.70±20凝乳酣酶制剂的制备保护剂和载体的选择/I/I62H8图3-27甘油和海瘵檢对凝乳活力的彩响l;ig.3-27Effeclofmycosc,glycerinonclottingactivity海藻糖在高温卜能保持萌的正常活性，甚至起热激活作用，还能用提高F燥保存的酚的活性.II油是(ft品加T业屮通常便用的甜味剂和保湿剂,在3.5中,II油作为凝乳陽修饰剂对酶活有促进作用因

5、此,选用甘汕和海藻糖作为凝乳酶的修饰剂c如图327所示，甘油浓度为2%时,凝乳誨活力最高:海鴻糖浓度为4%时,凝乳誨活力最高,并H在工业生产中,海藻糖作为酶制剂保护剂的浓度通常为4%.IM此.选川添加II汕至浓度为2%及海藻糖浓度为4%(1为胡制剂的保护剂。酶制剂的稳定剂通常选用该酶的辅基、辅酶、金属离了、底物、螯介剂、蛋门质箸'凝乳爾的作用底物为牛乳中的酪蛋白，因此选用脱脂奶粉作为凝乳输的我体，如表3】5所示。表3-15凝乳酶酶制剂中的添加仞table3I5Addtiveinrvnnctpreparation榊的浓缩液(ml.)同形物含地)奶粉(g)IHili(g)海魅糖(g)400

6、3.2150816凝乳附制剂制备后酶活力如农3-I6所示.表3T6凝乳菊篦制剂的活力Table3-16Clottingactivtyofrennetpreparation就乳饰浓缩舸液(U/mg)殺乳输海制剂U/g)248776±201764.70仝20本实验分别利用江米酒液念发酵提取和固态发酵提取这两种方法得到凝乳爲与商品凝乳酶相比，具有生产周期短，操作简便，价格低兼等特点，表317为本实验得到的凝乳酶与商品凝乳酶胡制剂的比较。表317本实验凝乳酚与商品凝乳酶比较Table3-17chymosininthisexperimentprearing:ocommercialrennet比

7、校顶口米酒敖乳的同态发酵处乳闸商品凝乳陽來源酒醪发酵.酒廨中订人呈微生物,故屈微生物凝乳fit酒酵中分离纯化得歎的零菌经固态发酵.屈微生物凝乳酶由动物制的商制得，亦称小牛皱加.屈动物源凝乳詹以糕;K：秋皮1:1、掖同比为0.9:1、匍的抽2.8%(m/v).小牛、小山羊或羊羔(亦制备过程以江米而：水为1：10ft为液态培养基在捲瓶中发醉52h离心.经硫酸筱分级沉淀，除盐，冷冻十如得刽凝乳誇粉木Na?SO,0.03l%(m/v)、乩温800.34%(m/v).CaSOqO.O乙(m/v)、K3SOj0.04%(m/v)为同态培养基.接种由酒耀中分离地化符到的爸询.佗二角瓶中发醋：96h经NaCI溶液浸提，离心，超滤浓缩.喷为煉紂刘耻乳购粉末可由牛、绵羊城或山羊)第四射(皱谢的水抽提液。一般经水洗、干燥、切片応在4%硼酸水溶液中丁30匸卜浚渍5大抽捉而得，或用食盐浸出不干燥而成活力为l93l58±50(U/g).凝乳活力(u/g)利川该酶制作的契达干酯与商品焰在质地、外观等方而并别不人.并見任风味上优丁商品凝