高效液相色检验方法验证方案设计2

1、word型高效液相色谱仪测定川葛含量检验方法验证方案文件编号S-YF-01301起草人X英南日期2012年08月26日审核人日期20核年08月31日批准人李立新日期2012年08月31日生效日期2012年09月01日验证项目申请单再确认项目用高效液相色谱仪测定川茸含量检验方法验证目的对已进展设计、选型、安装、运行与系统适应性测试设备确认的高效液相色谱仪，通过选用生产品种药典川茸进展含量测定，验证具检验方法准确度、精细度、专属性、线性、X围、耐用性的止确性，证实该设备设计、选型是否符合药品质量标准中含量测定的要求，使检验指标具有可控性、科学性、准确性，使设备达到设计要求与规定的技术指标，把好质量

2、关，使合格产品能按GMP要求进展放行。小组成员组长：组员：要求完成时间2012年09月09日提出部门：质量保证部批准部门：冉确认委员会签字年月日签字年月日备注验证项目计划书验证题目用高效液相色谱仪测定J1茸含量检验方法验证目的概要对已进展设计、选型、安装、运行与系统适应性测试设备确认的高效液相色谱仪，通过选用生产品种药典川茸进展含量测定，验证具检验方法准确度、精细度、专属性、线性、X围、耐用性的正确性，证实该设备设计、选型是否符合药品质量标准中含量测定的要求，使检验指标具有可控性、科学性、准确性，使设备达到设计要求与规定的技术指标，把好质量关，使合格产品能按GMP要求进展放行。再确认小组成员组

3、长：组员：验证方法用高效液相色谱仪测定含量检验期待结果用已确认的设备对生产品种进展含量测定，验证检验方法的准确度、精细性等符合生产、质量、GMP的规定，符合该设备的设计、选型能够满足检验要求，所采用的方法达到相应的检测要求，达到测得指标的科学、准确性，已满足控制产品质量的需要。验证方式同步验证超过允许值的对应措施1 .待系统稳定后，重新检测。2 .必要时，对肩关设备重新处理和调整后，再测试，分析检测结果以确定/、合格原因。3 .假如属于设备运行方面的原因，必要时报再确认委员会，调整设备运行参数。验证实施时间2012年09月01日小组负责人2012年08月31日起草责任者起草时间2012年08月

4、26日审核责任者审核时间2012年08月31日批准责任者批准时间2012年08月31日验证方案审批表再确认方案名称用高效液相色谱仪测定J1茸含量检验方法验证再确认方案编号S-YF-01301起草人X英南2012年08月26日审核人所在部门签字审核意见日期质量管理部年月日生产技术部年月日设备动力部年月日饮片车间年月日供销部年月日化验室年月日年月日年月日年月日年月日年月日年月日年月日批准人日期年月日批准意见同意执行日期年月日1再确认目的2再确认X围3再确认责任4内容4.1概述4.2.2预确认4.2.3 安装确认4.2.4 运行确认4.2.5 性能确认4.2.6 结果分析与评价4.2.7 再确认周期

5、文件名称用图效液相色谱仪测定J1茸含量检验方法验证文件编号S-YF-013-01起草人X英南起草日期2012年08月26日审核人审核日期年月日批准人批准日期年月日执行日期年月日颁发部门质量管理部版本号01分发号分发部门质管化验车间办公销分发数量21110011目的确认经设备确认高效液相，按药典检验方法测定生产品种含量，验证其检验结果科学性、准确性、精细性等，满足检验结果正确性需要，有效控制产品质量。提供必要的文件以证实本设备的操作与所预期的完全一致。根据本方案的验证，确认按检验操作规程操作，能有效的保持本设备于确认状态下，能稳定地、恒定地达成其所预期的功能。X围质量标准、检验操作规程文件的聚集

6、。验证设备用于含量测定检验方法的准确性在标准X围内验证设备用于含量测定检验方法的精细度可靠性验证设备用于含量测定检验方法，在设计的X围内，测试结果与供试品中被测物尝试直接呈正比关系的程度。验证设备用于含量测定检验方法具有专属性。验证设备用于含量测定检验方法在达到一定精细度、准确度和线性时，其测定值上下限在可控X围内。验证设备用于含量测定检验方法的耐用性。责任质量管理部负责验证方案的起草，申请审批，验证过程的监视、资料的存档，再确认方案的执行与再确认结果的评估。化验室负责实验的操作，原始记录、报告的填写。验证小组负责验证报告的审核。内容1概述：本设备由P3000高压输液泵和UV3000可变波长紫

7、外/可见分光检测器组成。P3000高压输液泵是以CPLD技术为核心，由单片机控制的高精细输液泵系统。它基于全数字的频率发生系统、先进的马达驱动系统与友好的人机显示页面似的该设备的操作与控制很方便。先进的泵头与单项阀设计思路，融汇了当今世界上最先进的经验，使得用户在各种使用条件下都可以保证输液的精度与重复性指标。UV3000紫外/可见波长检测器是完整的高效液相色谱仪的一个重要的组成局部。该检测器的设计以当今最先进的技术为先导，通过数字化的数据处理和控制，其基线噪声和漂移降低到一个新的极限。由于采用了数字量输出功能，该检测器可以与计算机直接通过串行口相连而不需要任何数据采集单元。该设备已经设计、安

8、装、运行、性能确认，并经过计量校验，在有效期X围内。通过该设备用于生产品种川茸中阿魏酸的含量测定，验证该设备的准确性、精细性、专属性、线性、X围、与耐用性是否符合要求。2验证内容验证小组：由厂验证领导小组安排，成立P3000/U3000高效液相色谱仪验证小组。2.1.1组长：X杰2.1.2组员：小组职务某某所在部门职务组员设备动力部设备管理员组员化验室主任组员质量管理部质量监视员组员化验室化验员2.2预确认设备根本情况设备名称：高效液相色谱仪编号：021型号：制造商：地址：电话：传真：联络人：文件名称存放地点身效液相色谱仪质量管理部一份产品保修单质量管理部一份使用证明书质量管理部一份合格证质量

9、管理部一份设备开箱验收单质量管理部一份设备安装调试验收单质量管理部一份色谱工作站质量管理部一份综合性评价结果上述设备档案材料符合GMP和生产工艺要求。检查人检查日期年月日复核人复核日期年月日1.1.1 检查并确认设备组成的单体结构应完整，并且各单体结构外观应无缺陷性损坏。设备单体结构名称有无缺陷损坏可变波长紫外/可见分光检测器无缺陷损坏身压输液泉无缺陷损坏综合性评价结果设备组成的单体结构完整，并且各单体结构外观无缺陷性损坏。检查人检查日期年月日复核人复核日期年月日单体设备名称要求材质实际材质可变波长紫外/可见分光检测器不与药物发生化学反响不锈钢身压输液泉不与药物发生化学反响不锈钢综合性评价结果

10、设备所有材质制造不与药物发生化学反响，符合药品检验要求。检查人检查日期年月日复核人复核日期年月日2.4 设备确认该设备已经设备的设计、安装、运行、性能再确认，同时该设备经计量校验确认，并在有效期X围内。2.5 人员、环境、试药确实认化验员已经均经过培训，熟悉方法与使用的仪器，环境湿度为56%温度为20c均在合理X围内。对照品从国家生物检定研究院购置，批号为有效期为其它试剂为色谱纯，水为纯化水均符合试验要求。3含量测定准确度验证准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率表示，准确度应在规定的X围内测试3.1.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以

11、甲醇-1%醋酸溶液30:70为流动相；检测波长为321nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于4000。x250mm粒度：5仙可进样量：10口。3.1.2 对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精细称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20Hg的溶液，即得。3.1.3 供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约0.5g,精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml,密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。3.1.4 测定法可用上述纯度的对照品做加样回收测定，即于被测成分对照品，在规定X围内，取同一浓度的供试

12、品进展测定。分别精细吸取对照品溶液与供试品溶液各10口，注入液相色谱仪，测定。同一浓度，用6个测定结果进展评价，应报告参加量的回收率%，或测定结果平均值与真实值之差与其相对标准偏差RSD%。用实测值与供试品中含有量之差，除以参加对照品量计算回收率。公式：回收率%=C-A/B*100%式中A为供试品所含被测成分量；B为参加对照量；C为实测值。实测值公式：平均值X=EXi/n平均偏差=EIXi-X|/n平均相对偏差=平均偏差/平均值附图：样品与对照品峰面积见图谱。加样回收率考察取本品粉末6份，精细称定，按照供试品方法制备，得到供试品溶液各50ml,各参加10ml对照品溶液，摇匀，得到待测溶液，滤过

13、，进样，计算峰面积，得到数据如下表：注意：在加样回收试验中须注意对照品的参加量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线性X围之内；参加的对照品的量要适当，过小如此引起较大的相对误差，过大如此干扰成分相对减少，真实性差。表1含量测定川茸加样回收率试验表序号样品称量g样品WW的含量mg对照品经力口里m实测值mg回收率%回攵率的平均值RSD%123456检测人：检测日期：结果评价：检查人：复核人：日期：年月日精细度系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经屡次取样测定所得结果之间的接近程度。精细度一般用偏差，标准偏差或相对标准偏差表示。同一浓度，用6个测定结果进展评价。精细度包含重复性，中间精细

14、度和重现性，其中重现性是在不同化验室不同时间进展实验，查看实验结果有没有重现性，本公司只一个实验室此项略。3.2.1 重复性设操作人员AC在一样操作条件下，由同一个分析人员在较短的间隔时间内测定所得结果的精细度称为重复性；3.2.1.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液30:70为流动相；检测波长为321nmx250mm;粒度：5g;进样量：10小3.2.1.2 对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精细称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20Hg的溶液，即得。3.2.1.3 供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约0.5g,精细称定，置具塞锥形

15、瓶中，精细参加70%甲醇50ml,密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。含量(mg / g)At25f-WT式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值;AT为对照品峰面积；单位pv*sec;nT为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位go表2含量测定阿魏酸重复性试验表在舁厅P样品称量g含量g/g含量的平均值:g/gRSD%123456检测人：检测日期：结果评价:检查人:复核人： 日期： 年 月 日3.2.2 中间精细度换一时间，换一操作人员，设操作人员为B在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用

16、不同设备测定结果之间的精细度称为中间精细度；同一浓度，用6个测定结果进展评价。3.2.2.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液30:70为流动相；检测波长为321nmx250mm;粒度：5g;进样量：10小3.2.2.2 对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精细称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20Hg的溶液，即得。3.2.2.3 供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约0.5g,精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml,密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取

17、续滤液，即得。公式:含量（mg / g） fAt 1 f At 25WTWT式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值;AT为对照品峰面积；单位pv*sec;nT为供试品的稀释倍数;WT为供试品的称量；单位go表3:含量测定阿魏酸甲中间精细度试验表在舁厅P样品称量g含量g/g含量的平均值g/gRSD%操作员A123456操作员B123456检测人：检测日期：结果评价：检查人：复核人：日期：年月日线性系指在设计的X围内，测试结果与供试品中被测物尝试直接呈正比关系的程度。应在规定的X围内测定线性关系。可用一贮备液经精细稀释，或分别精细称样，制备一系列供试品的方法进展测定，至少制备5个浓度

18、的供给品，以测得的响应信号作为被测物尝试的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进展线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进展线性回归计算。数据要求：应列出回归方程，相关系数和线性图。X围系指能达到一定精细度、准确度和线性、测试方法适用的上下限尝试或量的区间。X围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精细度结果与要求确定。3.3.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%醋酸溶液30:70为流动相；检测波长为321nmx250mm;粒度：5g;进样量：10小3.3.2 对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精细称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含2

19、0Hg的溶液，即得。3.3.3 供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约0.5g,精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml,密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。公式:含量(mg / g)fAt25Wt式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值;AT为对照品峰面积；单位pv*sec；nT为供试品的稀释倍数；WT为供试品的称量；单位go表4川茸阿魏酸不同浓度的峰面积浓度mg/ml峰面积pv*sec回归方程y=29433200x相关系数R2检测人：检测日期：结果评价：检查人：复核人：日期：年月日

20、耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。液相色谱法中典型的变动因素有：不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，不同类型的担体，柱温，进样口和检测器温度等。经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。本试验以流动相的组成比例、同一规格的色谱柱为变动因素，得出测定结果不受影响的程度，为使方法用于常规检验提供依据。3.4.1 对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精细称定，置棕色量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含20Hg的溶液，即得。3.4.2 供试品溶液的制备取本品粉末过四号筛约0.5g,精细称

21、定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml,密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得。3.4.3 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；1、以甲醇-1%醋酸溶液30:70为流动相；检测波长为321nmx250mm;粒度：5g;进样量：104。2、以甲醇-1%醋酸溶液35:65为流动相；检测波长为321nm。x250mm;粒度：5g;进样量：10将数据整理，填入下表。表4含量测定耐用性试验表保存时间别离度理论板数色谱条件1色谱条件2(1)检测人：检测日期：结果评价：检查人：复核人：日期：年月日专属性是指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出被测的特性，以不含被测成分的供试品除去含待测成分药材或不含待