高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量

1、2009年第3期9月出版摘要运用磷酸、甲醇溶液作为流动相，采用高效液相色谱法测定了葡萄酒中柠檬酸含量，实验结果表明，该方法有很好的线性关系，相关系数为0.9998,最低检出浓度为0.03mg/L,加标回收率在93.8%106.2%,相对标准偏差RSD<3%,该方法简便快捷、准确度高、重现性好。关键词柠檬酸；高效液相色谱；葡萄酒AbstractAreversed-phasehighperformanceliquidchromatographicmethodwasintroducedfordeterminingthecontentofcitricacidsinwinewithphosphat

2、eandmethanolsolutionasmobilephase.Theresultshowsthatthismethodtakesongoodlinearrelation,itscorrelativeconnectionis0.9993thelowestdetectionconcentrationis0.03mg/L,theaveragerecoveriesrangedfrom93.8%to106.2%withtherelativestandarddeviationislessthan3%.Thismethodissimpleness,speedinessandhighveracityan

3、dgoodfidelity.keywordscitricacid;highperformanceliquidchro-matography；wine柠檬酸作为一种食品添加剂广泛应用于食品加工领域，但其使用范围是受到严格限制的，在葡萄酒标准中有限量要求，即干、半干、半甜葡萄酒中要求柠檬酸含量<1.0g/L甜葡萄酒中要求柠檬酸含量02.0g/L柠檬酸的测定方法有电位滴定法、离子色谱法、阻抑动力学荧光法和高效毛细管电泳法等。本文采用高效液相色谱反相C18柱，磷酸二氢钾溶液作流动相，测定葡萄酒中的柠檬酸，并对测试条件进行了研究，建立了一种简便、准确的分析方法。1材料与方法1.1 仪器LC-10A

4、Tvp高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；PHS-3c型数字酸度计（雷磁仪器厂）；AP-9925型真空泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；AB104-S型分析天平梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。1.2试剂无水柠檬酸、磷酸、氢氧化钠、甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钾、实验用水为超纯水。除另有规定外，试剂均为分析纯。1.3溶液的配制1.3.1流动相的配制体积浓度1%磷酸溶液的配制：准确量取磷酸10mL,用超纯水定容至1000mL。张素娟*（国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心，山西省食品质量监督检验中心，

5、太原030012）高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量Determinationofcitricacidscontentinwinebyhighperformanceliquidchromatography*张素娟，女1975年出生，2003年毕业于吉林大学分析化学专业，硕士，工程师。收稿日期：2009-07-20ZHANGSu-juan*（NationalFarmProductsandLiquorQualitySupervisionandInspectionCenter,ShanxiProvinceFoodstuffQualitySupervisionandInspectionCenter,

6、Taiyuan030012,China食品分析<<<<<<<<<<<<<<食品工程FOODENGINEERING482009年第3期9月出版样品本底值g/LRSD%1.000g/L柠檬酸加入量mL测得值g/L回收率%10.2102.982.00.28695.010.00.60097.521.4542.572.01.53196.210.01.85399.830.8271.652.00.90293.810.01.245104.541.7652.032.01.850106.210.02.15998.650.9681.

7、552.01.04798.810.01.374101.5磷酸甲醇溶液的配制：量取甲醇50mL,用体积浓度1%磷酸溶液定容至1000mL,混匀，再经0.45小饰§膜过滤、超声波脱气后备用。0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（pH2.9）:准确称量2.72g磷酸二氢钾，用超纯水定容至1000mL,用磷酸调pH值到2.9,再经0.45仙ml®过滤、超声波脱气后备用。1.3.2标准溶液的配制柠檬酸储备液：称取无水柠檬酸0.10g,精确至0.0001g,用0.01mol/L氧化钠溶液溶解并定容至100mL，止匕溶液含柠檬酸1.000g/L。1.4试样的制备吸取10.00mL样品（液温2

8、0C）于100mL容量瓶中，加超纯水定容，经0.45以射：孔滤膜过滤后，备用。1.5色谱条件色谱分离柱：反相C18（150mmX4.6mmi.d,5Nm）;流动相：磷酸甲醇溶液；柱温：25C；流速：1.0mL/min；检测波长：214nm；进样量：10仙L。2结果与讨论2.1 标准曲线的绘制将0.01mol/L柠檬酸储备液配制成一系列浓度为0.05mol/L,0.10mol/L,0.20mol/L,0.40mol/L,0.80g/L的标准系列溶液。样品测定液和标准溶液经0.45pmK系滤膜过滤，分别进样，估算出样品溶液的浓度范围；根据检测到的样品浓度作适当的稀释，使其浓度在标准曲线的范围内；从

9、标准曲线中求出样品的柠檬酸含量。2.2流动相的选择柠檬酸为弱酸，在水系流动相中易解离，需在流动相中加入一些添加剂，以改善其在非极性固定相上的分离选择性、色谱峰的峰形和色谱峰的重复性。故本实验选用磷酸甲醇溶液和0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液（pH=2.9）作流动相，测定同一标准溶液和样品溶液进行比较，两种流动相具有很好的分离效果，并能避免样品中的杂质干扰。但0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液（pH=2.9）作为流动相不仅配制时操作繁琐、pH稍有变化对数据的影响也很大，而且容易滋生细菌，必须每天现用现配，否则造成赌塞色谱柱，缩短柱子的寿命。而磷酸甲醇溶液作为流动相由于有甲醇的存在可抑制细菌的繁

10、殖，能用一定的时间。因此本实验最终选用磷酸甲醇溶液作为流动相。2.3 标准色谱图在最佳色谱条件下，分析柠檬酸标准溶液的保留时间为8.78min。见图1。图1柠檬酸标准色谱图2.4 回归方程和线性范围的测定用6次测定的平均值计算回归方程得到Y=541498x，柠檬酸含量在0.05g/L1.00g/L范围内呈线性关系，标准曲线的线性相关系数r2=0.99979。2.5方法的精密度与回收率将5种柠檬酸含量不同的葡萄酒样品分别取6份平行样，按所选色谱条件下进行测定，测得5种样品的相对标准偏差（RSD）;同时在分析样品时，5种样品平行取样，各取10.0mL样品于25mL容量瓶中，分别加入1.000g/L

11、的标准溶液2.0mL、10mL,以超纯水定容至刻度。超出线性以外的加标溶液进行适当稀释，再进行测定。测得5种样品加标的回收率结果见表1。表1试样测定的精密度与回收率实验结果（n=6）由表1可看出，该法的相对标准偏差（RSD）<3.0%,回收率为93.8%106.2%。2.6干扰试验和最低检出限选线性范围中段质量浓度0.0100.0050.000123456789101112t/minA/mAU（下转第54页）2009年第3期9月出版收购的区域进行实地调查，了解果树农用化学品使用情况，收集农用化学品的种类、使用剂量、作业方法等相关信息，同时对种植区域内农用化学品的销售流通环节进行调查，了解

12、农药化学品销售的种类、数量、来源、流向，核查销售和使用的农用化学品在种类、数量等方面是否吻合，必要时可采集原料样品进行检测验证。采集种植区域的土壤样品进行检测，了解土壤中重金属污染以及农药残留情况。将调查的结果按区域、时间进行分类管理，并以此作为判断原料是否安全的主要依据，对原料种植区域进行分类，确定原料的合格采购区域。2.3加强原料的入厂验收作好原料入厂验收工作，逐车查验原料的来源地，坚决杜绝非合格种植区域内的原料进入生产线。对来自合格种植区域的原料检测其包装、运输的卫生条件以及其腐烂情况，对不符合要求的予以绝收。对合格的原料按区域分类存放，并按时间顺序进入生产线进行加工，保证产品的可追溯性

13、。2.4积极配合监管企业积极配合中央、地方各级政府及主管部门，切实加强监管力度，认真贯彻落实国家新的食品安全法各项条款，建立起统一的、明确的、行之有效的、与国际接轨的安全质量规则标准体系和产品安全质量预警制度。做到企业在为客户和消费者负责的同时，也要为国家更要为企业自己的信誉负责。各级政府监管部门在处理质量事故时找出问题和差距的同时，寻求解决的办法，帮助企业提早预防和克服不安全隐患。作为企业，要理性看待和接受政府监管部门的检查、批评、指导，一旦发现问题，要自觉地及早的克服，以防影响企业长远发展。2.5规范农用化学品的生产及销售农用化学品的生产、销售企业也应建立健全农产品的档案管理制度，利用现代

14、科学技术力量大力发展低浓度、低残留的农用化学品，始终保持与国际农用化学品接轨。总之，果汁产品的安全，关系到果汁加工企业的长足发展，关系到众多消费者的身体健康。企业要花大力气，把好每个质量关，真正从源头上消除不安全隐患的发生。要做到这些，要有长远打算，不能急功近利，务必以一流的管理和技术水准作为实施产品安全质量强有力的后盾。参考文献1大陶.有机果汁安全级别最高的饮品J.食品与健康，2005(2):16-18.2陈敏.梨浓缩清汁生产工艺研究J.食品工程，2008(2):40-41.(0.40mg/mL)进行干扰实验，选常见的食品添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、双乙酸钠、丙酸钙等物质在10倍浓度范围内，在确定的色谱条件下进行标样的测定。试验结果表明在本实验条件下不产生干扰(测定值相对偏差小于5%,即认为无干扰)。本方法按仪器的3倍噪声计算，柠檬酸的最低检出质量浓度为0.03mg/L。以仪器的10倍噪音计算，柠檬酸的最低定量检出浓度为0.10mg/Lo3结论本文采用高效液相色谱法测定葡萄酒中柠檬酸含量，该方法有很好的线性关系，相关系数为0.9998,其最低检出浓度为0.03mg/L,回收率为93.8%106.2%,具有简便灵敏、准确、干扰少等优点，可适用于葡萄酒样品中柠檬酸的检测分析。参考文