便携式酶标仪

1、Metertech M6+便携式酶标仪便携式酶标仪主要内容一 酶标仪的原理、分类及应用二 ELISA介绍三 便携酶标仪1 便携酶标仪的特点,技术参数2 目前便携酶标仪可现场检测的项目3 霉菌毒素检测需要的前处理程序,设备,检测步骤四 已有的使用便携式酶标仪的范例 一 酶标仪原理n酶联免疫读数仪(ELISA Reader)是酶联免疫吸附测定的专用仪器，又酶标仪，英文多称微孔板阅读器（ microplate reader ）。酶标仪的本质是一个比色计,即用比色法来检测待检测物质的含量,是一种专用的分光光度计，原理是朗伯比尔定律。酶标仪与普通比色计的区别：n1，盛装待测比色液的容器不再使用比色皿，而

2、是多使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯等材料制成，对抗原、抗体有较强的吸附作用。2，由于盛样本的塑料微孔板是多排多孔的，光线只能垂直穿过，因此酶标仪的光来都是垂直通过待测溶液和微孔板的，光束既可从上到下，也可以从下到上穿过比色液。 3， 酶标仪通常与ELISA试剂盒使用结合使用。ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250微升以下，用一般比色计无法完成测试。 4，检测能力强，处理能力批量化。酶标仪的分类n按照光学检测通道分：有单通道酶标仪，如我们的便携式酶标仪；多通道酶标仪，一般为自型的。n 多通道酶标仪有可分为全自动酶标仪（集加液、洗板、孵育、洗板、显色、读数、数据处理于一体的酶标仪，

3、常称全自动酶免分析系统，如我们的DSX、Chemwell 2910）、半自动酶标仪(如我们的拜发Well Reader)酶标仪的分类按检测波长分:不连续波长酶标仪和连续波长酶标仪。一般不连续波长酶标仪采用滤光片，连续波长酶标仪采用光栅。按功能分：包括紫外功能、荧光功能、化学发光功能、动力学功能酶标仪、可见光功能，我们代理的酶标仪均为可见功能酶标仪 酶标仪的应用酶标仪的应用n酶标仪广泛地应用在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中，特别在近几年，由于大量的酶联免疫检测试剂盒的出现，使得酶标仪在医疗和食品检测领域中的应用越来越广泛。nELISA试剂盒在各种领域中的应用n蔬菜、水果农药残留

4、的检测n肉制品、水产品、蜂产品中兽药残留的检测n谷物、粮食、坚果、饲料中霉菌毒素的检测n食品和环境中微生物的检测n转基因食品的检测n动植物疫病的检测n医疗方面的检测 二二 ELISA的背景的背景n1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。 ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题 ，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术( immunoenzymatic

5、techniques ) 的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于食品,生物学和医学科学等诸多领域。 2.2 ELISA的原理的原理n它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶催化底物产生颜色反应，用于定量测定或定性。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。n在这种测定方法中有3种必要的试剂：n固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）n酶标记的抗原或抗体（标记物）n酶作用的底物（显色剂）双抗体夹心法 测抗原双抗原夹心法 测抗体间接法 测抗体竞争法 测抗体 测抗原捕获包被法 测抗体ELISA的基本类型的基本类型n鉴于我们通常是检测抗原,

6、所以使用的方法是双抗体夹心法和竞争性ELISA法，而用到最频繁的是竞争性ELISA法.下图是竞争性ELISA法的示意图:ELISA的特点的特点l适合大量样品的检测l敏感性高l特异性强l重复性好l简便快速荷尔蒙激素荷尔蒙激素 / 代谢物代谢物检测产品检测产品RIDASCREEN激素 / 代谢物 克伦特罗快速检测 莱克多巴胺 己烯雌酚 乙酰孕激素 17-雌二醇 睾酮 乙炔雌二醇 类固醇 DES 19-去甲睾酮 甲基睾酮 地塞米松 抗生素检测产品抗生素检测产品RIDASCREEN 抗生素检测抗生素检测 氯霉素 氯霉素葡萄糖苷酸 四环素族 链霉素 磺胺二甲嘧啶 磺胺总量 AMOZ (呋喃它酮) AOZ

7、 (呋喃唑酮) 恩诺/环丙沙星 氟喹诺酮霉菌毒素RIDASCREEN 高灵敏度高灵敏度检检测测 黄曲霉毒素 M1 黄曲霉毒素 B1 黄曲霉毒素 总量 赭曲霉毒素A 玉米赤霉烯酮 DON T-2 毒素 伏马菌毒素RIDACREENFAST快速快速检测检测 FAST 黄曲霉毒素 M1 FAST 总黄曲霉毒素 FAST 黄曲霉毒素B1 FAST 橘霉素 FAST 赭曲霉毒素 A FAST 玉米赤霉烯酮 FAST DON FAST T-2 毒素 FAST 伏马菌毒素拜发的ELISA试剂盒 谷物和饲料中的谷物和饲料中的6类霉菌毒素检测试剂盒类霉菌毒素检测试剂盒 n黄曲霉毒素（多种植物性食品中的黄曲霉毒素

8、总量、M1、B1）n赭曲霉毒素A(可检测啤酒、血清中的)n玉米赤霉烯酮（粮食谷物、饲料、血清、尿液中的）n呕吐毒素（粮食谷物、饲料、麦芽、啤酒）nT-2毒素（粮食谷物、饲料）n伏马菌毒素（粮食谷物、饲料）三 便携式酶标仪光路n采用会聚式钨灯，钨灯发出的光经过透镜后聚焦到一个狭缝组中，然后经过样品池，再经过干涉滤光片后，获得的所需波长的光投射到光电二极管上。n光信号经过一个高增益放大器和AD转换器后转变为数字信号，通过微处理器对信号进行处理和计算后显示在显示屏上。便携式酶标仪的产品特点便携式酶标仪的产品特点n便携式酶标仪是单孔检测酶标仪,适合现场快速检测,适合与前处理简单的试剂盒配合使用.n对1

9、8或者112的酶标板条适用，同时采用垂直水平两用试管设计，可以读取方型试管，圆型试管n轻巧，便携式设计，室内检测不占空间，室外使用更室内检测不占空间，室外使用更加方便加方便n仅使用2个按键，就可以按LCD指示进行测试，结果2秒即可知道n试管座和滤光片可以更换n可存储125组数据，拥有RS232接口和并行接口，可以外接电脑和打印机n旋转光学部件设计获专利批准 (美国专利号： No 5,221,961) 光学部件可以旋转至水平或垂直位置而容纳试管、微孔板板条，这样便于做各种实验便携式酶标仪的产品特色便携式酶标仪的产品特色n适用于所有ELISA方法的酶标免疫试验，人体健康体检筛查、动植物检验检疫及食

10、品检疫，这些试剂盒在试验室里可以结合便携式酶标仪使用。一旦这些试剂盒的检测对象的前处理程序简化，试剂盒就可以结合便携式酶标仪进行现场快速检测n完全开放酶免试剂系统，对其他厂商的酶联免疫试剂盒同样可以适用便携式酶标仪的技术参数：便携式酶标仪的技术参数：n型号：Model 6+n光源：钨灯n波长范围：400700nmn滤光片：标配450nm滤光片；带宽：10nm2nmn适于：18或者112的酶标板条，圆形试管1275mm，方形试管1010mmn检测器：硅光电二极管n重复性：0.005Abs(在2Abs以下)n线性：0.001 1.500 Abs (2%) Resolutions 0.001 Abs

11、n吸光度范围：02.5Absn测量模式：吸光度/浓度/Cut-off模式n显示：16 x 2 LCD n接口：RS232和并行接口n电源：输入 AC:100 240V at 50/60Hz 输出 DC: 12V/700MAn尺寸：150 x 170 x 50mmn重量：0.85kgn存储数据：可存储125组数据配置配置 主机1台 450nm干涉滤光片 电源适配器 板条支架 比色皿支架（圆形） 操作手册一1份便携式酶标仪的适用范围便携式酶标仪的适用范围n由于便携式酶标仪是针对现场快速检测,所以目前它比较适合检测植物性食品如谷物、粮食、干果等当中的霉菌毒素。便携式酶标仪可以结合德国拜发（R-Bio

12、pharm）公司的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮，呕吐毒素、赭曲霉毒素A、桔霉毒素、T-2 毒素、伏马菌毒素试剂盒n由于霉菌毒素检测样品的前处理程序比较简单,所需要的前处理设备也相对简单n激素、抗生素的前处理较复杂，需要离心机等设备,另外还需要多种其它化学试剂，前处理的时间也比较长，一般在现场检测的机会不多，台式酶标仪更合适，如果客户的检测量较小，或有移动实验室，也可以推荐我们的这款便携酶标仪酶标仪我公司提供的霉菌毒素快速检测方案我公司提供的霉菌毒素快速检测方案n仪器：仪器：粉碎机、天枰、电脑、定时器、便携式酶标仪n器皿：器皿：50ml离心管（配备个数根据样品量而定，离心管可清洗后重复使用）、Wha

13、tman No. 1滤纸、漏斗、50ml小烧杯（个数根据样品数量而定）、2ml离心管，试管架：50ml及2ml离心管架n移液器：移液器：1000ul、100ul、50u、250ul八道移液器各一支（或200-1000ul、50-200ul、250ul八道移液器各一支）及相配备的枪头盒各一个n试剂：试剂：蒸馏水、甲醇溶液，快检箱里配备一定量50ml离心管，在出去执行任务时，提前配好适量70%甲醇溶液，及洗板缓冲液，可置于50ml离心管里n其它：加样槽（主要用于洗板，拜发有简易型），记号笔，记录笔，标签纸，软件及布板试验记录薄 黄曲霉毒素检测的前处理步骤黄曲霉毒素检测的前处理步骤n谷物谷物/饲料：

14、饲料：n取 5g 粉碎的样品与25ml 甲醇溶液（70/30）*）混合n强力振荡 3 分钟（用手或是振荡器）n用 Whatman No.1 滤纸过滤提取液n取 1ml 处理后的样品，用1ml 蒸馏水或是去离子水稀释n取 50l 稀释液进行分析n花生：花生：n样品去皮粉碎，取 5.0g 样品，加入25.0mL 甲醇水(7+3)溶液和20ml 石油醚，n振荡10 分钟，用滤纸过滤于分液漏斗中，静置分层，放出下层甲醇水提取液n此液为样品提取液，取1ml 样品提取液，用1ml 蒸馏水或是去离子水稀释，取n50ul 稀释液进行分析n食用油：n称 5.0g 油样品于25mL 小烧杯中，用20ml 石油醚（

15、或是正己烷）分次将试样转n移到125ml 分液漏斗中，准确加入25.0ml 甲醇水（7+3）溶液，加塞振摇5 分n钟，静置分层，放出下层甲醇水提取液，此液为样品提取液，取1ml 样品提取液n用1ml 蒸馏水或是去离子水稀释，取50ul 稀释液进行分析。n月饼、桃酥、花生酱等：月饼、桃酥、花生酱等：n称取 10.0g 样品于125mL 具塞锥形瓶中，加入50.0mL 甲醇水（70+30）溶液n和20mL 石油醚，加塞振荡15min，过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层。n放出下层甲醇水提取液于另一个锥形瓶中。n准确吸取 10.0mL 甲醇水提取液（相当于2.0g 样品）于125mL 分液漏斗中，

16、n加入20mL 三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，n用滤纸过滤于100mL 蒸发皿中，再加5mL 三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提n取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于n蒸发皿中，65水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0mL 甲醇水（70+30）n溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解得样品提取液。取1ml 样品提取液，用1mln蒸馏水或是去离子水稀释，取50ul 稀释液进行分析n酱油、醋：酱油、醋：n称取 5.0g 样品于25ml 小烧杯中，用5ml 蒸馏水将试样转移到125ml 分液n漏斗中，加入20mL 三氯甲烷，加塞轻轻振摇

17、3min，静置分层。放出下层三氯n甲烷层，经盛有约5g 预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4 的快速定性滤纸过滤n于100ml 蒸发皿中，再加5ml 三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲n烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，n65水溶通风挥干。挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（30+70）溶液，将n蒸发皿中的凝结物充分溶解得样品提取液。取1ml 样品提取液，用1ml 蒸馏水n或是去离子水稀释，取50ul 稀释液进行分析n*根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。如10g 样品加入50ml甲醇/水溶液（70/30）5.6 检测步骤n试剂

18、盒做法：n1 酶标记物稀释n提供的酶标记物（盖红色帽的瓶子）为浓缩液。由于稀释的酶标记物稳定性不好，所以只稀释实际需用量的酶标记物。 在吸取浓缩液之前，要仔细地轻轻振摇。用缓冲液以1: 11的比例稀释酶标记物浓缩液（200ul浓缩液+2.0ml缓冲液，足够4个微孔板条用）。n2抗体稀释n提供的抗体（盖黑色帽的瓶子）为浓缩液。由于稀释的抗体稳定性不好，所以只稀释实际需用量的抗体。在吸取浓缩液之前，要仔细地轻轻振摇。用缓冲液以1: 11的比例稀释抗体浓缩液（200ul浓缩液+2.0ml缓冲液，足够4个微孔板条用）。n3测定程序（在20-24条件下操作）n将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准及样品做平行，并记录标准及样品的位置。n加入50ul的标准或处理好的样品到各自的微孔中，每个标准和样品必须使用新的吸头。n加入50ul稀释了的酶标记物到微孔底部。n加入50ul稀释了的抗体到微孔底部彻底混合，并且在室温黑暗处孵育30分钟。如果实验所用孔数量多，请用多通道移液器。（注意移液器管尖千万不要接触到放进孔中的