感染性眼病的病原微生物实验室诊断专家共识2022年

1、2022年3月27日baby诺安感染性眼病的病原微生物实验室诊感染性眼病的病原微生物实验室诊断专家共识断专家共识背景背景 感染性眼病是发展中国家重要致盲原因之一,病原微生物检查病原微生物检查是感染性眼病诊断的金标准金标准。 由于眼部组织取材困难、标本量少取材困难、标本量少,实验室诊断阳性率偏低阳性率偏低,严重影响疾病的诊断和预后。 我国大多数医疗机构感染性眼病实验室诊断能力不足,缺乏眼部微生物检测的标准化方法。 为此,北京医学会检验分会组织专家和相关课题组通过讨论和临床验证,总结出适合我国眼科临床实践的病原学诊断路径,形成感染性眼病实验室诊断专家共识。0.11%0.11%基层白内障术后感染性眼

2、内炎0.192%0.192%感染性角膜炎共识共识该共识从常见感染性眼病临床表现和送检指征人手，规范眼部标本采集、转运、质量评估的方法和流程强调眼科医师应与微生物检验人员充分配合眼科医师应与微生物检验人员充分配合,正确选择适宜的微生物检测方法，提倡床旁接种,同时针对刮片细胞学检查、传统微生物培养、棘阿米巴培养以及核酸检测、宏基因组测序等技术提出建议。12345常见病原体及送检指征标本采集及质量评估实验室检查报告要求小结目录CONTENTS1常见病原体及送检指征常见病原体及送检指征ONE眼科临床检查临床检查及微生物实验室检查微生物实验室检查是感染性眼病诊断不可缺少的2个重要组成部分送检指征及实验室

3、检查送检指征及实验室检查1.1.感染性结膜炎感染性结膜炎感染性结膜炎：感染性结膜炎：结膜暴露于外界环境中容易发生感染性结膜炎，结膜充血及分泌结膜充血及分泌物增多物增多是其典型的临床特征，多数结膜炎无需进行微生物检查。但对于流行性、难治性、复发性或常规治疗无效的感染性结膜炎，结膜刮片、培养或核酸检测结膜刮片、培养或核酸检测对其诊疗具有重要意义。常见的病原体：常见的病原体：金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、他溶血性链球菌、肠杆菌目、不动杆菌属、棒状杆菌属、腺病毒（儿童3、7型；成人8、11、19型）、单纯疱疹病毒（1、2 型）、柯萨奇病毒A 24 型及肠病毒70型等。AC血清型沙眼衣原体可

4、引起沙眼性结膜炎，DK 血清型沙眼衣原体可引起包涵体性结膜炎。2 2. .感染性角膜炎感染性角膜炎感染性角膜炎：感染性角膜炎：感染性角膜炎多由病原微生物侵入角膜引起拟诊化脓性角膜炎（细菌、真菌、阿米巴感染）拟诊化脓性角膜炎（细菌、真菌、阿米巴感染）：需通过实验室检查进行确诊。非化脓性（病毒性）角膜炎：非化脓性（病毒性）角膜炎：可依靠反复发作的病史及角膜病变特点进行临床诊断。细菌性角膜炎：细菌性角膜炎：以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、溶血性链球菌、铜绿假单胞菌（隐形眼镜）及肠杆菌目细菌等感染为主；非典型分枝杆菌（龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌、脓肿分枝杆菌）较为少见，一般见于创伤后或屈光手

5、术后的患者。病毒性角膜炎：病毒性角膜炎：以单纯疱疹病毒（1、2 型）、水痘 带状疱疹病毒、柯萨奇病毒A24、肠道病毒70感染为主，另外埃博拉病毒和虫媒病毒感染（寨卡病毒、登革热和基孔肯雅病毒）可引起轻度角膜炎。真菌性角膜炎：真菌性角膜炎：常发生于植物外伤或有眼表慢性疾病的患者中，常见的丝状真菌有镰刀菌、曲霉菌、丝孢菌属、拟青霉属、支顶孢属和弯孢菌属等。在免疫功能低下的患者中，可出现念珠菌、隐球菌引起的角膜炎。寄生虫性角膜炎：寄生虫性角膜炎：罕见，以棘阿米巴原虫感染为主，另外还有微孢子虫、变形虫及蝇蛆幼虫所致的角结膜炎。由于角膜病灶取材量少，标本应立即进行涂片染色镜检或床旁微生物接种；除常规角膜

6、刮片和培养外，还可选择进行病原体核酸检测。感染性睑缘炎：感染性睑缘炎：睑缘出现如下体征之一可疑诊为感染性睑缘炎。（1）睑缘充血、睫毛脱落，睫毛基底部见小脓疱、鳞屑或袖套样物质；（2）对于经验性治疗无效的前部睑缘炎患者可进行睑缘分泌物培养（需氧及厌氧培养同时进行）；（3）对于睑板腺功能障碍或眼部红斑痤疮患者，睫毛有袖套样改变时，需进行睫毛螨虫显微镜检查，涂片和培养有助于发现病原菌。常见病原体有金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痤疮皮肤杆菌、酵母菌（皮屑芽孢金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痤疮皮肤杆菌、酵母菌（皮屑芽孢菌）、毛囊蠕形螨（睫毛根部）、蝇蛆幼虫及阴虱菌）、毛囊蠕形螨（睫毛根部）、蝇蛆幼虫及阴

7、虱等，注意区别正常菌群。3 3. .感染性结膜炎感染性结膜炎感染性泪道炎：感染性泪道炎：泪液的排出系统称为泪道，出现如下体征可拟诊为泪道感染，如泪溢、内眦部黏性分泌物，泪小点或泪囊处红肿，挤压泪小点或泪囊后可见脓性分泌物溢出。经验性治疗无效的泪小管炎或泪囊炎并发角结膜炎或眶蜂窝织炎患者，需进行泪道分泌物细胞微生物学检查分泌物细胞微生物学检查。常见病原体有放线菌科属（放线菌属和诺卡菌属最常见）、肺炎链球菌、溶血性链放线菌科属（放线菌属和诺卡菌属最常见）、肺炎链球菌、溶血性链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌及革兰阴性杆菌球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌及革兰阴性杆菌等。泪道真菌（曲霉菌、链格孢

8、霉、念珠菌、枝顶孢属）感染较罕见。4 4. .感染性泪道炎感染性泪道炎感染性眼内炎：感染性眼内炎：特指微生物在眼内引起的感染，进展迅速，属临床急重症致盲性眼病，包括眼内炎（细菌、真菌）、病毒性眼内炎、寄生虫性眼内炎眼内炎（细菌、真菌）、病毒性眼内炎、寄生虫性眼内炎等。外源性眼内炎：外源性眼内炎：常见于术后感染和眼外伤（特别是白内障和青光眼术后）术后感染和眼外伤（特别是白内障和青光眼术后）常见病原体包括葡萄球菌、肠球菌、链球菌、肠杆菌、非发酵菌、需氧芽孢杆菌、曲霉菌、镰刀菌、暗色真菌等，表现为多病原体混合感染，其中凝固酶阴性葡萄球菌易造成急性感染，痤疮皮肤杆菌是慢性感染最常见原因，警惕高毒力肺炎

9、克雷伯菌的眼内感染，假单胞菌与丝状真菌少见。内源性眼内炎：内源性眼内炎：多来自血源性感染血源性感染，常见病原体有肺炎链球菌、葡萄球菌、溶血性链球菌、分枝杆菌、酵母菌、丝状真菌、肠球菌、乏养球菌、颗粒链菌、流感嗜血杆菌、韦荣球菌、普雷沃菌、念珠菌等。视网膜炎：视网膜炎：以病毒感染病毒感染为主，包括单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、带状疱疹病毒、EB病毒等。虹膜、睫状体和/或脉络膜的炎症：可与细菌细菌来源（伯氏疏螺旋体、梅毒螺旋体、分枝杆菌、钩端螺旋体、巴尔通体）、病毒病毒来源（疱疹病毒、巨细胞病毒）或寄生虫来源寄生虫来源（弓蛔虫、弓形虫、盘尾丝虫、囊尾蚴）的全身性或局部性感染有关全身性或局部性感染有关。

10、刚地弓形虫是脉络膜视网膜炎的元凶，是感染性后葡萄膜炎的主要原因。5 5. .感染性眼内炎感染性眼内炎病原学诊断路径病原学诊断路径2标本采集及质量评估TWO1. 强调“即刻送检、即刻涂片、床旁接种即刻送检、即刻涂片、床旁接种”原则，尤其需进行厌氧培养的标本；若难以实现即刻接种，则需室温保存，标注采集时间。（一）样本采集及转运原则（一）样本采集及转运原则参考2018 年美国微生物实验室操作指南、2021年美国眼部感染临床微生物实验室实用指南以及2021年欧洲微生物手册2. 用于培养的标本原则上需同时进行细胞微生物学检查；用于PCR的标本，需避免滑石粉、荧光素钠和眼部麻醉剂的使用。3.由于眼部标本较

11、为珍贵且标本量少珍贵且标本量少，医生应告知实验室具体检测项目及优先次序。4.结膜结膜分泌物应双眼取材双眼取材并在申请单注明眼别、部位，以便于结膜囊正常菌群的分析。5. 角膜溃疡角膜溃疡标本应由具有临床经验的眼科医师或眼科技师在裂隙灯显微镜下使用无菌刮铲或无菌手术刀片轻柔刮取，即刻涂片并床旁接种。角膜组织和活检标本建议使用无菌剪刀或手术刀片切碎后再行接种；眼内标本（房水或玻璃体）需手术取材，使用原液进行涂片、接种。（一）样本采集及转运原则（一）样本采集及转运原则6. 眼内液包括房水和玻璃体液房水和玻璃体液，有创性眼内液检测，仅适用于高度怀疑的感染性眼内炎患者，须由有经验眼科医师在无菌环境下采集。

12、操作前需用抗生素（如氧氟沙星、妥布霉素）滴眼液点眼，表面麻醉后皮肤消毒、聚维酮碘结膜囊冲洗。房水取房水取出量以出量以0.050.1 ml 为宜为宜，玻璃体灌洗液则需离心（玻璃体灌洗液则需离心（800 转转/min10 min，离心半，离心半径径10 cm）后取沉淀涂片或甩片后显微镜检查或微生物培养）后取沉淀涂片或甩片后显微镜检查或微生物培养，也可使用0.22 m无菌过滤器过滤，将过滤膜进行细菌和真菌培养。房水或玻璃体标本，可注入无菌EP管中进行转运，也可将注射器连带针头及针帽，置于密闭标本转运箱中快速转运。7. 隐形眼镜或与眼外伤相关异物也可进行微生物检测，但其培养结果需根据病情谨慎解释。（一

13、）样本采集及转运原则（一）样本采集及转运原则眼部标本不建议拒收不建议拒收，即使标本量少、转运超时，仍要尽可能完成检验，及时与临床医生沟通，争取二次送检。（二）标本质量评估（二）标本质量评估1.刮片样本评估：刮片样本评估：进行刮片细胞微生物学检查的标本，如分泌物、脓液或坏死组织应制成均匀薄层涂片，直径约10 mm。除玻璃体灌洗液需离心后取沉淀或甩片外，其余均应使用原始标本。(1)组织标本评估：组织标本评估：载玻片上肉眼可见分泌物、脓液或坏死组织薄层平铺，不形成组织细胞堆积。(2)角膜刮片评估：角膜刮片评估：角结膜病灶及周围脱落或炎性细胞数量须1级。国际上将刮片细胞数量（显微镜下可见到的所有细胞）

14、分为4级，即以低倍镜（LP）下细胞计数为准，0级：10/LP，1级：1150/LP，2级：51100/LP，3 级：1011 000/LP，4 级：1 000/LP。其他组织标本（如房水和玻璃体等）也可参照此标准。2.培养标本评估：培养标本评估：包括标本采集前是否使用抗菌药物、抗菌药物种类及时间；采集方式、转运装置、采样量；是否床旁接种、是否在2 h内送达实验室；申请检查项目的适宜性等。由于不建议拒收标本，因此对评估不合格的标本需在结果报告中进行描述。由于不建议拒收标本，因此对评估不合格的标本需在结果报告中进行描述。（二）标本质量评估（二）标本质量评估3实验室检查THREE对于感染性眼病实验室

15、诊断，除睫毛螨虫、阴虱或结膜吸吮线虫外，在培养、核酸及免疫学检测之前均应进行细胞微生物学检查细胞微生物学检查，强调从病理学角度重视眼部刮片细胞学检查。刮片染色方法选择取决于临床拟诊及疑似的病原体类型。常用的染色方法包括姬姆姬姆萨染色、革兰染色、荧光染色和抗酸染色萨染色、革兰染色、荧光染色和抗酸染色等。（一）刮片细胞微生物学检查（一）刮片细胞微生物学检查用于组织病理及病原体形态学检查组织病理及病原体形态学检查，是眼科最常用的染色方法。根据病原体形态特征及排列方式可对细菌、包涵体、真菌、阿米巴细菌、包涵体、真菌、阿米巴等微生物进行鉴别。姬姆萨染色也可对病灶处病灶处的角结膜上皮细胞、炎性渗出细胞（中

16、性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、单核吞噬细胞、浆细胞及肥大细胞等）以及特殊组织细胞进行观察。按照炎性细胞所占比例可判断感染还是非感染，急性感染（中性粒细胞为主）还是慢性感染（淋巴细胞增多）棘阿米巴感染可出现嗜酸性粒细胞浸润衣原体感染急性期以中性粒细胞浸润为主病毒感染则以淋巴细胞浸润为主，可出现细胞内包涵体1.姬姆萨染色姬姆萨染色1.姬姆萨染色姬姆萨染色镜下描述同常规微生物检查。根据菌体形态（杆菌、球菌、球杆菌）、染色特性（阳性、阴性或不确定）、排列方式（成双、成堆或散在，短链或长链等）、白细胞吞噬等因素判断。如涂片见到大量中性粒细胞，细胞内外可见革兰阳性双球菌、呈矛头样相对排列、有厚荚膜，可

17、报告疑似肺炎链球菌2.革兰染色革兰染色利用荧光素标记的几丁质酶可特异性结合真菌细胞壁的多糖及几丁质，5 min内快速判断标本中是否含有真菌成分。组织背景为均质黑色或弱蓝色荧光，真菌细胞壁则呈亮蓝紫色或明亮荧光蓝，容易识别菌丝或孢子形态、结构、菌丝密度等。因棘阿米巴包囊同样含几丁质成分，包囊也可呈淡染的蓝绿色。荧光染色可显著提高对真菌、微孢子虫和棘阿米巴诊断的敏感性，但需注意拭子棉纤维以及任何含纤维素或几丁质的其他物质可能会造成假阳性。3. 荧光染色荧光染色抗酸染色可对眼部抗酸菌抗酸菌，主要包括结核分枝杆菌（M. tuberculosis，MTB） 、非结核分枝杆菌（nontuberculoau

18、smycobacteria，NTM）进行检测。疑似诺卡菌感染或微孢子虫可使用弱抗酸染色，菌体或虫体呈粉红色着染为阳性。4. 抗酸染色及弱抗酸染色抗酸染色及弱抗酸染色常用的方法有生理盐水湿片法生理盐水湿片法和KOH湿片法湿片法生理盐水湿片法：生理盐水湿片法：主要用于棘阿米巴滋养体和包囊的活体观察棘阿米巴滋养体和包囊的活体观察，尤其适用于观察滋养体的运动情况。棘阿米巴滋养体在角膜组织间移行，呈不规则、易变化等特点，其胞质内富含颗粒物质，可随滋养体的变形而运动。囊前期包囊双层囊壁尚未形成，胞质内含有均匀的较粗大颗粒状物，较活跃，不停颤动。成熟包囊具有内外囊壁双层结构。空囊则呈皱缩状、无内容物，常见于

19、抗阿米巴治疗后。KOH湿片法：湿片法：可用于丝状真菌丝状真菌的观察，将采集的标本混匀涂于滴10%20%KOH溶液的清洁载玻片上，加盖玻片，过酒精灯火焰23次，冷却后低倍镜观察。KOH可消化组织细胞，使真菌菌丝清晰可见。5. 湿片法湿片法除棘阿米巴原虫外，常见眼部寄生虫还包括结膜吸吮线虫、睫毛的螨虫及阴虱。结膜吸吮线虫结膜吸吮线虫：生长于结膜囊结膜囊内，裂隙灯下可见白色线头样虫体蠕动，镊子取出光学显微镜下进行观察。螨虫：螨虫：位于睫毛毛囊内睫毛毛囊内，光学显微镜下（100倍）寻找蠕形螨成虫、幼虫或虫卵。阴虱：阴虱：常生长于睫毛毛根及毛干睫毛毛根及毛干，裂隙灯下剪除或拔取睫毛后光学显微镜下观察成虫

20、及虫卵，容易诊断。6. 寄生虫检查寄生虫检查1. 1. 培养基：培养基：眼部微生物常规培养包括需氧、兼性厌氧、厌氧及真菌培养需氧、兼性厌氧、厌氧及真菌培养等，必要时可增加微需氧及分枝杆菌培养。常用培养基包括哥伦比亚血琼脂、巧克力琼脂，必要时增加麦康凯、沙保罗、马铃薯及厌氧血琼脂培养基。强调厌氧培养的重要性，同时眼微生物医/技师需与临床医师密切沟通，对来之不易的标本尽可能全面进行有助于诊断的检验项目。（二）传统微生物培养（二）传统微生物培养2. 培养条件：培养条件：细菌：细菌：细菌培养温度3436 ，25 d；培养的环境包括需氧、厌氧（厌氧袋、厌氧罐及厌氧手套箱），5%7%CO2培养箱，微需氧等

21、；除常规哥伦比亚血琼脂培养35 d外，分枝杆菌的生长需要罗氏或米氏7H10 培养基以及BACTEC MGIT 培养系统，7 d后观察生长情况，培养最长需56d。真菌：真菌：真菌培养温度2729 或3436 ，730 d。眼部真菌适合马铃薯葡萄糖琼脂培养基或沙氏培养基斜面，每日观察，刮片/涂片呈阳性但培养为阴性、怀疑罕见或生长缓慢真菌应延长观察期至48周。（二）传统微生物培养（二）传统微生物培养3. 关于增菌：关于增菌：眼部感染标本不建议增菌菌，尤其来自与外界相通部位分泌物，如结膜、泪道、泪囊。术中取材的房水、玻璃体液及角膜等可进行增菌。（二）传统微生物培养（二）传统微生物培养4. 微生物鉴定：

22、微生物鉴定：基于菌落的生化试验、自动化仪器及MALDITOF质谱是目前常用的鉴定手段，后者无论针对细菌还是真菌均可实现快速鉴定。必要时可选用rDNA（16S、18S 或或28S）及）及ITS/D1D2测序技术进行鉴定测序技术进行鉴定。5. 抗菌药物敏感实验：抗菌药物敏感实验：对外眼标本，有时无法鉴别分离菌株为共生菌群、污染或感染真正病原体，除凝固酶阴性的葡萄球菌（非路邓葡萄球菌）和类白喉棒状杆菌外，对单一微生物纯培养或培养出2种优势病原体，需行鉴定和AST（金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌无论菌落多少，均应行鉴定和AST）。相较之下，内眼标本应作为无菌部位处理，任何培养阳性病原体皆需鉴定和AST。

23、如果CLSI缺少某种抗菌药物的判定标准，可参考本地流行病学结果用药。国 内 基 本 选 择 临 床 实 验 室 标 准 化 协 会 （ c l i n i c a l a n d l a b o r a t o r y s t a n d a r d s i n s t i t u t e ， C L S I ） 标 准 ， 但 眼 科 多局 部 用 药 ， 其 局 部 暴 露 剂 量 远 高 于 血 清 药 物 浓 度 ， 抗 菌 药 物 敏 感 实 验 （ a n t i m i c r o b i a l s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g

24、 ，A S T ） 结 果 仅 供 参 考（二）传统微生物培养（二）传统微生物培养棘阿米巴性角膜炎多由棘阿米巴原虫感染所致，偶有耐格里属感染的报道。角膜棘阿米巴原虫的培养常规选择Page非营养琼脂培养基非营养琼脂培养基，其固体培养基可在100 ml液体培养基中加入1.5 g琼脂。在使用Page非营养琼脂培养基前，应在其琼脂表面涂布活的或灭活的大肠埃希菌菌液，标本点种于琼脂中心，置于湿盒内28 孵育，每天观察，至少观察至第10 d。棘阿米巴可自琼脂表面接种部位生长并向四周移行，产生不规则轨迹，培养1 d即可在显微镜下观察到，接种510 d后可通过肉眼观察发现琼脂表面出现菲薄波纹状改变，低倍镜下见

25、到小圆形或多边形壁厚包囊，折光性强；滋养体呈圆形、椭圆形、不规则等形态，并向四周移行觅食，所以接种部位的远端则以滋养体居多。用小刀片切取一片表面琼脂，在显微镜的油镜下观察，可清晰分辨出棘阿米巴滋养体和包囊的形态、结构。因抗阿米巴药物有限，临床上无需常规开展抗棘阿米巴药物敏感试验，在新药研发时可采用微量稀释法。（三）棘阿米巴培养及鉴定（三）棘阿米巴培养及鉴定对常规培养阴性的标本，核酸检测成为诊断病毒性角膜炎、葡萄膜炎和视网膜炎的主要手段对常规培养阴性的标本，核酸检测成为诊断病毒性角膜炎、葡萄膜炎和视网膜炎的主要手段实时定量实时定量PCR技术：技术：利用实时定量PCR（quantitativere

26、altime PCR，qPCR）技术检测腺病毒、巨细胞病毒、腺病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、水痘带状疱疹病毒、EB病毒和弓形虫病毒和弓形虫等病原微生物已在业界达成共识。该方法特异度和敏感度较高特异度和敏感度较高，可通过拷贝数评估感染现状和治疗效果，其阳性预测值和阴性预测值优于传统微生物检测方法。qPCR技术适用于急性感染期，恢复期或一过性感染，可出现假阴性结果16S rDNA和和18S rDNA测序技术：测序技术：可利用16S rDNA和18S rDNA测序技术提高检出率。FISH技术：技术：2017 年，荧光原位杂交技术（flourescence in si

27、tu hybridization，FISH）首次用于眼科，利用葡萄球菌特异性分子肽核酸（peptidenucleic acid，PNA）探针进行肽核酸荧光原位杂交（PNAFISH），20 min 即可实现眼内液病原体检测36。近期，有研究扩大了FISH与PNA探针的应用范围，可快速检测眼内炎或角膜炎的常见细菌和真菌病原体（敏感可快速检测眼内炎或角膜炎的常见细菌和真菌病原体（敏感度度97%、特异度、特异度100%）。）。（四）核酸检测（四）核酸检测目前尚无国家药品监督管理局批准的眼部标本核酸扩增检测试剂，大部分核酸检测采用实验室自行建立的方法mNGS技术：技术：对于眼部无菌标本，常规检验无法满足

28、实验室诊断时眼部无菌标本，常规检验无法满足实验室诊断时，可选择宏基因组下一代测序技术（metagenomics next generation sequencing，mNGS）。该技术的无偏倚性使其成为未知病原体识别的重要手段。有研究表明mNGS诊断眼内炎的敏感度为敏感度为88%，在鉴定未知低丰度微生物时，mNGS 灵敏度优于其他方法。mNGS受标本量、标本处理、核酸提取、文库制备及测序深度的影响，结果的准确性和特异度有待临床进一步验证。非无菌部位眼科标本可检测出多种微生物，临床上难以判断其是否致病。尽管mNGS存在局限性，但目前仍是眼科难培养病原体的检测手段之一。（四）核酸检测（四）核酸检测

29、继发于全身感染的视网膜炎或葡萄膜炎继发于全身感染的视网膜炎或葡萄膜炎患者可进行血清学检查，如梅毒螺旋体、刚地弓形虫和伯氏疏螺旋体等的诊断。标本类型：标本类型：血清、房水、玻璃体液及泪囊分泌物均可进行病原体（包括疱疹病毒、巨细胞病毒、弓形虫、梅毒）特异性抗体和总IgG检测方法：方法：酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbent assay，ELISA）免疫荧光法（immunofluorescence assay，IFA）免疫印迹法（immunoblotting test，IBT）（五）免疫学检测（五）免疫学检测标本采集时机采集时机对结果解释非常重要，当IgG 抗体恢复期较

30、初期增高4 倍或显著增高，且急性期显著增高可判断为阳性。有文献报道初次感染弓形虫后，IgM和IgA在感染后714 d达高峰，IgG 在感染1421 d开始上升并持续较长时间。IgM阳性对早期感染的诊断具有一定意义，IgG恢复期4倍高于急性期有回顾性诊断意义。通过计算GoldmannWitmer（GW）系数，可辅助判断眼内该特异抗体是眼内原位产生，还是因为血清渗漏出现的假阳性。系数4表示局部抗体的产生，系数30 个细菌，记为+40。给出初步疑似病原菌。（2）真菌应分别叙述孢子和菌丝的形态、位置、大小、排列以及着色性等，菌丝要区别真假菌丝。对形态特征典型的菌丝和孢子，可报告疑似微生物；如发现酵母样

31、孢子和假菌丝，可报告查到酵母样真菌孢子及假菌丝；姬姆萨染色发现长丝状菌丝、有隔，分枝呈45，可报告查到真菌菌丝，有隔、45分枝，疑似曲霉菌等。（3）通过姬姆萨染色或生理盐水湿片可观察棘阿米巴原虫的滋养体、包囊前期、包囊及空囊4个阶段，在报告中应详细描述原虫的形态特征，参考细胞计数方法描述原虫的数量。对螨虫，可报告多少只（数量）成虫、幼虫、虫卵/高倍视野。其他寄生虫可进行虫体描述，给出初步诊断。2.细胞分类：细胞分类：除描述微生物特征外，还应报告细胞分类，如角结膜上皮细胞、色素上皮细胞、炎性渗出细胞（中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核吞噬细胞、淋巴细胞及浆细胞等）及特殊的组织细胞等。同时还应报告炎性细胞与病原体之间的关系。建议图文报告，给出初步拟诊。3.细胞计数：细胞计数：每油镜视野下，1 个细胞，记为+；每15 个细胞，记为+；630 个细胞，记为+；30个细胞，记为+。4. 显微镜检查结果报告：建议进行快速报告模式，一般报告建议在2 h内发出，复杂报告不应超过4 h发出。对重要病原（如疑似蜡样芽孢杆菌或镰刀菌等），报告建议走危急值（三）显微镜检查报告（三）显微镜检查报告1.培养阳性的报告：培养阳性的报告：对培养阳性的标本，需参照标本来源进一步确定是否为致病微生物。结膜、睑缘等部位有正常菌群定植，免疫力低下时定植菌也可导致感染；角膜、房水及玻璃体等部位