第四章抗微生物药物和敏感性试验2

1、1二、稀释法药敏试验二、稀释法药敏试验2（一）（一） 肉汤稀释法肉汤稀释法 用用MHMH肉汤将抗菌药物作不同浓度的稀释肉汤将抗菌药物作不同浓度的稀释后后, ,再接种待测菌，定量测定抗菌药物抑再接种待测菌，定量测定抗菌药物抑制或杀灭待测细菌的最低抑菌浓度（制或杀灭待测细菌的最低抑菌浓度（MICMIC）或最低杀菌浓度（或最低杀菌浓度（MBCMBC）* * * *。 常量稀释法常量稀释法 微量稀释法微量稀释法3微量液体稀释法 (microdilution test)4原理：聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入100l浓度为105 CFU/ml的菌液，盖上盖板，351620h观察结果。孔底部

2、清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过CLSI标准判断其敏感和耐药。 再取0.01ml容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经35过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死99.9原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)。 5实验方法：1.抗菌药物的稀释和融解母液的制备62.抗菌药物母液的稀释73.在微量聚乙烯微板孔中加入各种不同浓度的抗生素100l，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。 84.挑选1824h的菌落置M-H肉汤增菌46h。95.制备0.5麦氏比浊管，然后1:200稀释，使之最终浓度105 CFU/ml。 106.用

3、微量加样器接种100l菌液到96孔中，盖上盖板。 同时作阳性、阴性对照。 7.手工看浊度或仪器自动 判读。 按照CLSI标准报告细菌 对某抗菌药物为敏感、 耐药和中介。 1112小结小结1.1.培养基培养基 MH MH 肉汤肉汤2.2.药物稀释药物稀释 原液配制原液配制稀释抗菌药物的制备稀释抗菌药物的制备3.3.菌种接种菌种接种 4.4.结果判断结果判断 MICMIC13141516（二）（二） 琼脂稀释法琼脂稀释法 将不同浓度抗菌药物分别混匀于琼脂将不同浓度抗菌药物分别混匀于琼脂培养基中，配制出含各种浓度药物的培养基中，配制出含各种浓度药物的平板，使用微量多头接种仪接种细菌，平板，使用微量多

4、头接种仪接种细菌，孵育后观察细菌在含不同浓度药物的孵育后观察细菌在含不同浓度药物的平板上的生长情况，以抑制细菌生长平板上的生长情况，以抑制细菌生长的平板所含的药物浓度测得最低抑菌的平板所含的药物浓度测得最低抑菌浓度（浓度（MICMIC）。）。17 四、四、E 试验（试验（Epsilometer test） 是一种结合了稀释法和扩散法的原理和特是一种结合了稀释法和扩散法的原理和特点测定细菌对抗菌药物的敏感度的定量技点测定细菌对抗菌药物的敏感度的定量技术。术。18（一）原理（一）原理 E试条是一条5mm50mm无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判

5、别的刻度。 抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的宽度范围。 将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，对照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。 19（二）实验方法（二）实验方法201.挑取1620h的菌落2.用无菌生理盐水制备成0.5麦氏比浊管浊度的菌液。213.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向平均涂抹琼脂表面（每次转60）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 224.用镊子将E-TEST试条的抗菌药物的一面贴向琼脂表面，有刻度的

6、一面向外，直径140mm的平板可放置 6条，9mm平板只能放置12试条 。5.孵育，置平板于35孵育1624h。 236.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。2425从左到右依次为常见菌、苛养菌、厌氧菌、酵母菌和其他霉菌的 E 试验结果 26五、联合药物敏感性试验五、联合药物敏感性试验 联合药物敏感试验意义联合药物敏感试验意义 联合抑菌试验联合抑菌试验 最低杀菌浓度测定最低杀菌浓度测定27（一）联合药物敏感性试验意义281.体外联合药敏实验的目的体外联合药敏实验的目的 扩大抗菌谱，治疗混合性感染扩大抗菌谱，治疗混合性感染 预防或推迟细菌抗生素耐药性的发生预防或推迟细菌抗生素耐药性的发生 联合用药可以减少剂量以避免达到毒性联合用药可以减少剂量以避免达到毒性剂量剂量 对某些耐药细菌引起的严重感染，联合对某些耐药细菌引起的严重感染，联合用药比单一用药时效果更好。用药比单一用药时效果更好。292.2.抗菌药物联合用药可出抗菌药物联合用药可